pH緩沖液的配制

【引用】常用pH緩沖溶液的配制和pH值2011-05-1320:01:24|分類(lèi)：生物|字號(hào)訂閱本文引用自DSC《常用pH緩沖溶液的配制和pH值》）整理：zfg序號(hào)溶液名稱配制方法pH值1氯化鉀-鹽酸13.0ml0.2mol/LHCl與25.0ml0.2mol/LKCl混合均勻后，加水稀釋至100ml1.72氨基乙酸-鹽酸在500ml水中溶解氨基乙酸150g，加480ml濃鹽酸，再加水稀釋至1L2.33一氯乙酸-氫氧化鈉在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，加40gNaOH，溶解完全后再加水稀釋至1L2.84鄰苯二甲酸氫鉀-鹽酸把25.0ml0.2mol/L的鄰苯二甲酸氫鉀溶液與6.0ml0.1mol/LHCl混合均勻，加水稀釋至100ml3.65鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/L的鄰苯二甲酸氫鉀溶液與17.5ml0.1mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml4.86六亞甲基四胺-鹽酸在200ml水中溶解六亞甲基四胺40g，加濃HCl10ml，再加水稀釋至1L5.47磷酸二氫鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/L的磷酸二氫鉀與23.6ml0.1mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml6.88硼酸-氯化鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化鉀與4.0ml0.1mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml8.09氯化銨-氨水把0.1mol/L氯化銨與0.1mol/L氨水以2：1比例混合均勻9.110硼酸-氯化鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化鉀與43.9ml0.1mol/LNaOH混合均勻，10.0加水稀釋至100ml11氨基乙酸-氯化鈉-氫氧化鈉把49.0ml0.1mol/L氨基乙酸-氯化鈉與51.0ml0.1mol/LNaOH混合均勻11.612磷酸氫二鈉-氫氧化鈉把50.0ml0.05mol/LNa2HPO4與26.9ml0.1mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml12.013氯化鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/LKCl與66.0ml0.2mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml13.0、常用溶液的配制(文章來(lái)自：醫(yī)藥園()整理：zfg)(一)溶液配制注意事項(xiàng)藥品要有較好的質(zhì)量試劑分為優(yōu)級(jí)純(保證試劑，Guaranteedreagent,G.R.)、分析試劑(Antalyticalreagent,A.R.)化學(xué)純(Chemicalpure,C.P.)和實(shí)驗(yàn)試劑(Laboratoryreagent,L.R.)等等。工業(yè)用的化學(xué)試劑，雜質(zhì)較多，只在個(gè)別情況下應(yīng)用,如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。藥品稱量要精確。配制試劑用水應(yīng)用新鮮的去離子水或雙蒸餾水，比電阻值在50萬(wàn)歐姆以上，pH在5.5~7.0之間才可應(yīng)用,在組織培養(yǎng)等特殊用途時(shí)應(yīng)注意此項(xiàng)要求,配制一般化驗(yàn)用溶液只要求用雙蒸餾水或去離子水。配好后的溶液，應(yīng)立即除菌處理(如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物質(zhì))，以防雜菌生長(zhǎng)。(二)0.067(1/15)Mol/L磷酸緩沖液1/15Mol/L磷酸二氫鉀溶液的配制：稱取磷酸二氫鉀(KH2PO4,A.R.)9.08g，用蒸餾水溶解后，傾入1000ml容量瓶?jī)?nèi)，再稀釋至刻度(1000ml)。1/15Mol/L磷酸二氫鈉溶液的配制：稱取無(wú)水磷酸氫二鈉(Na2HPO4,A.R.)9.47g(或者Na2HPO4?2H2O11.87g)用蒸餾水溶解后，放入1000ml容量瓶?jī)?nèi)，再加蒸餾水稀釋至刻度(1000ml)。3.按附表的比例，配制成不同pH值的緩沖溶液。附表1磷酸鹽緩沖液配制法(單位：毫升)p1/15Mol/L1/15Mol/Lp1/15Mol/L1/15Mol/LHNa2HPO4KH2PO4HNa2HPO4KH2PO4

.858.092.0.1766.623.4.959.990.1.2772.028.0.0612.287.8.3776.823.2.1615.384.7.4780.819.2.2618.681.4.57622.477.6.6787.013.0.4626.773.3.7789.410.6.5631.868.2.87637.562.5.97643.556.5.08649.650.4.18655.444.6.2897.03.0.07898.02.0

(三)0.15Mol/LPB液附表20.15Mol/LPB液配制法pH0.15Mol/LNa2HP04(ml)0.15Mol/LNaH2PO4(ml)6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0Na2HP04?2H2O分子量=175.050.15Mol/L溶液含26.7g/L。Na2HPO4?12H2O分子量=358.220.15Mol/L溶液含53.7g/L。NaH2PO4?H2O分子量=138.000.15Mol/L溶液含20.7g/L。NaH2PO4?2H2O分子量=156.030.15Mol/L溶液含23.4g/L。(四)0.2Mol/LPB緩沖液附-表30.2mol/LPB緩沖液配制法pH0.2Mol/LNa2HPO4(ml)0.2Mol/LNaH2PO4(ml)5.88.092.06.012.381.56.426.573.5637.549.051.0.0761.039.0.2772.028.0781.019.0.6787.013.0.8791.58.5.o8Mol/LNa2HPO4?2H2O溶液35.61g/LNa2HPO4?12H2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4?H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4?2H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/LPB緩沖液則在0.2Mol/LPB緩沖液的基礎(chǔ)上加H2O稀釋1倍即可。欲配制PBS液時(shí)，則在溶液中加0.85%的NaCl溶液即可。（五）無(wú)鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（PBS）（0.15Mol/LPH7.2）TOC\o"1-5"\h\zNaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g（如為Na2HPO4?12H2O,則為2.89g）KH2PO40.2g將上述試劑依次溶于1000ml去離子水中，完全溶解后，115°C高壓滅菌10min~15min,存在4°C冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細(xì)胞分散劑以及洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物。）整理：zfg1硼酸（H3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1000ml。2．硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1000ml。附表4不同pH的0.2Mol/L硼酸緩沖液配制法Hp0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）Hp0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）.471.09.0.272.08.0.786.04.0.083.07.0.098.02.0（七）巴比妥緩沖液1.pH8.2離子強(qiáng)度0.05Mol/L巴比妥緩沖液巴比妥鈉47.6g蒸餾水3000ml1.17NHCl55.0ml（1.17NHCI=193ml濃HCI加1807ml蒸餾水）⑴將4.76g巴比妥鈉溶于3000ml蒸餾水。⑵加1.17NHCl55ml。⑶用HCl調(diào)節(jié)pH到8.2,并加蒸餾水至4265ml。2.pH8.40.06Mol/L巴比妥緩沖液巴比妥1.84g巴比妥鈉10.30g加蒸餾水至加蒸餾水至1000.00ml3.pH8.6O.O6M0I/L巴比妥緩沖液巴比妥1.66g巴比妥鈉12.76g加蒸餾水1OOO.OOmI（八）0.2MoI/L醋酸鹽緩沖液見(jiàn)表附表5附表50.2MoI/L醋酸鹽緩沖液配制法pH0.2Mol/LO.lMol/LpH0.2Mol/L0.1Mol/L2372373°CCTrisHCl(ml)3CCTrisHCl(ml)(ml)(ml)98.25587.2527.5.1095.069088.257.577.2530.0.9276.968288.2510.577.2532.5.7560.877388.2512.577.2535.0.6248.776388.2515.577.2537.5.5037.665288.2517.577.2540.0.4027.544088.2520.077.2542.5.3218.3622（九）三羥甲基甲烷一鹽酸緩沖液（Tris—HCI緩沖液）不同pH，0.05MoI/L25mI0.2MoI/L三羥甲基氨基甲烷加xmlO.INHCI，加水稀釋至100ml（見(jiàn)下表）附表6Tris—HCI緩沖液配制法pH0.2Mol/L0.1MHC1pH0.2Mol/L0.1MHC123C37CTris(ml)(ml)23C37CTris(ml)(ml)9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222502552545.08.148.002525.025三羥甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羥甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1000ml。0.1NHCI：取HCI8.6ml,加水至1000ml。（十）0.5Mol/LpH9.5碳酸鹽緩沖液NaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于600.00ml蒸餾水中即得。不用時(shí)塞緊瓶塞，以免吸收空氣中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸緩沖液配制pH8.0磷酸緩沖液0.1Mol/LNa2HPO494.50ml0.1NNaH2PO45.50ml混合即可9份甘油與1份pH8.0磷酸緩沖液混合，即為甘油磷酸緩沖液。用途：用于免疫熒光試驗(yàn)。（十二）Hank's液

1．貯存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO4?12H2O1.52gKH2PO40.60g葡萄糖4.00g0.4％酚紅液50.00ml雙餾水加至100.00ml115°C高壓滅菌15min,冰凍保存。2．工作液貯存液1份雙餾水9份115C高壓滅菌15min。臨用時(shí)用滅菌的5.6%NaHCO3液調(diào)pH值至7.2左右（溶液呈橙紅色）。（十三）萘（鈉）氏試劑(Nessler'sreagent)配方1：氯化汞6.0g碘化鉀12.4g20％NaOH30ml加蒸餾水至100ml配方2：碘化汞11.5g碘化鉀8g蒸餾水50ml（完全溶解后）過(guò)濾,加20％NaOH50ml用途：檢測(cè)溶液中氨離子。（十四）阿氏（Alsever's）液葡萄糖2.05g檸檬酸鈉0.80g氯化鈉0.42g蒸餾水100ml溶解后，以10%檸檬酸調(diào)節(jié)pH至6.1,過(guò)濾，分裝，10磅10min滅菌，4°C保存。（十五）青、鏈霉素混合液（簡(jiǎn)稱S.P.液或雙抗液）青霉素（40萬(wàn)U）5支鏈霉素（200萬(wàn)pg）1支分別溶于100ml滅菌無(wú)離子水中或共同溶于200ml滅菌無(wú)離子水中，混合后分裝小瓶，置-10C~-20C冰箱保存?zhèn)溆茫?萬(wàn)單位pg/ml）。臨用時(shí)，按1%的量加入營(yíng)養(yǎng)液或其他溶液中，最后濃度是青霉素100U/ml，鏈霉素100ug/ml。（十六）洗液（清潔液）配方1：重鉻酸鉀150g蒸餾水300ml濃硫酸3000ml將重鉻酸鉀加入蒸餾水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩堝中加熱溶解，然后慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，見(jiàn)發(fā)熱過(guò)劇則稍停，冷卻后再繼續(xù)加。此為強(qiáng)洗液。盛清潔液的容器要堅(jiān)固，上加厚玻璃蓋，操作時(shí)要穿橡皮圍裙、長(zhǎng)統(tǒng)膠靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。洗液一旦變綠，表示鉻酸已經(jīng)還原，失去了氧化能力，不宜再用。如將這樣洗液加熱再加適量重鉻酸鉀，又可重新使用。配方2：濃硫酸50%蒸餾水50%重鉻酸鉀5%此為中等強(qiáng)度洗液。配方3：重鉻酸鉀100g蒸餾水1000ml加熱溶解，冷卻后緩慢加入工業(yè)硫酸100ml此液為弱洗液，為棕紅色。使用此液時(shí)，必須預(yù)先用熱肥皂水將玻璃器皿洗凈，經(jīng)自來(lái)水沖洗，瀝干然后才能浸入，否則該洗液很快失效。0.2mol/L(pH7.4)磷酸鹽緩沖液(PhosphateBuffer,PB)試劑：NaH2PO4?2H2ONa2HPO4?12H2O配制方法：配制時(shí)，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4,兩者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液(PB)，根據(jù)需要可配制不同濃度的PB和PBS。0.2mol/L的Na2HPO4；稱取Na2HPO4?12H2O31.2g(或NaH2PO4?H2O27.6g)加二次水至1000ml溶解。0.2mol/L的Na2HPO4：稱取NaHPO4.?12H2O71.632g(或Na2HPO4?7H2O53.6g或Na2HPO4?2H2O35.6g)加二次水至1000ml溶解。0.2mol/LpH7.4的PB的配制：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4和81ml0.2mol/L的Na2HPO4?12H2O,充分混合即為0.2mol/L的PB(pH約為7.4?7.5)。若pH偏高或偏低，可通過(guò)改變二者的比例來(lái)加以調(diào)整，室溫保存即可。0.01mol/L磷酸鹽緩沖生理鹽水(PhosphateBufferedSaline,PBS)試劑：0.2mol/LPB50mlNaCl8.5?9g(約0.15mol/L)二次水至1000ml配制方法：稱取NaCl8.5?9g及0.2mol/L的PB50ml,加入1000ml的容量瓶中，最后加二次水至1000ml，充分搖勻即可。若擬配制0.02mol/L的PBS,則PB量加倍即可，依此類(lèi)推。PB和PBS是免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)中最為常用的緩沖液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗組織標(biāo)本、稀釋血清等，其pH應(yīng)在7.25?7.35之間，否則需要調(diào)整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情況下，0.2mol/LPB的pH值稍高些，稀釋成0.01mol/L的PBS時(shí)，?？蛇_(dá)到要求的pH值，若需調(diào)整pH，通常也是調(diào)PB的pH。Karasson-Schwlt's磷酸鹽緩沖液試劑：NaH2PO4?H2O3.31gNa2HPO4?7H2O33.77g二次水至1000ml配制方法：同前該緩沖液主要用于配制Zamboni's固定液。0.5mol/LpH7.6的Tris-HCl緩沖液。試劑：Tris(三羥甲基氨基甲烷)60.57g1NHCl1NHCl約420ml二次水至1000ml配制方法：先以少量二次水（300?500ml）溶解Tris，加入HCI后，用1N的HCI或1N的NaOH將pH調(diào)至7.6,最后加二次水至1000ml。此液為儲(chǔ)備液，于4°C冰箱中保存。免疫細(xì)胞化學(xué)中常用的Tris-HCI緩沖液濃度為0.05moI/L，用時(shí)取儲(chǔ)備液稀釋10倍即可。該液主要用于配制Tris緩沖生理鹽水（TBS）、DAB顯色液。Tris緩沖生理鹽水（TrisBuffered,Saline,TBS）試劑：0.5mol/LTris-HCl緩沖液100mlNaCI3.5?9g（0.15moI/L）二次水至1000ml配制：先以二次水少許溶解NaCl，再加Tris-HCl緩沖液，最后加二次水至1000ml，充分搖勻使Tris終濃度為0.05mol/L。TBS主要用于漂洗標(biāo)本，常用于免疫酶技術(shù)中。Tris-TBS(PBS)試劑：Tris-TBS(PBS)試劑：TritonX-1000.5mol/LTris緩沖液(pH7.6)NaCl二次水10ml(1%)或3ml(0.3%)1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB)8.5?9g至1000ml配制方法：先以二次水少許溶解NaCl后，加入TritonX-100及Tris緩沖液或（PB）,最后加二次水至1000ml，充分搖勻。該液常用濃度為1%及0.3%，前者主要用于漂洗標(biāo)本，后者主要用于稀釋血清。0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS緩沖液(pH7.2?7.4)：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L稱7.9gNaCl，0.2gKCI，0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，溶于800ml蒸餾水中，用HCI調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最后加蒸餾水定容至1L。保存于4C冰箱中即可。需要注意的是，通常所說(shuō)的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制：0.2MNa2HPO4：稱取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：稱取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需將0.2MPB(pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋即可，如：0.1MPB(PH=7.4):取500ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.01MPB(PH=7.4)：取50ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.02MPB(PH=7.4)：取100ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。若需要NaCI的話，加入NaCI至0.9%(g/100ml)即可。另：其它各種另PH值的0.2MPB（100ml）配方：pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4(ml)5.79285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法稱取8gNaCI、0.2gKCI、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCI調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2（1034x105Pa）高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4°C冰箱中。需要注意的是，通常所說(shuō)的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話,則需要在配置的時(shí)候分別加入100u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。PH7.0H2O1000100010001000NaCl8.5Na2HPO2.2NaH2PO0.4根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過(guò)晝夜的時(shí)間后，PH值會(huì)明顯改變（我親自測(cè)過(guò)偏酸）。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了，PH值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣，要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問(wèn)題。每次使用前最好用試紙測(cè)一下過(guò)夜了的PBS，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。PBS緩沖液稱取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO4?12H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4，加水定容至1L,常溫保存?zhèn)溆?。PBST緩沖液取300plTween-20加入PBS100ml中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時(shí)候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時(shí)，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。十倍稀釋以后，PH自動(dòng)升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個(gè)可以先取少量試一試，配好之后再測(cè)一次~PH8.0的PBS配方詳細(xì)NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至8.0,然后加入去離子水將溶液定容至1L。高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意:上述PBSBuffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子,如需要，可在配方中補(bǔ)充1mMCaCI2和0.5mMMgCl2。0.05mol/LPBS（磷酸緩沖液PhosphateBufferSolution,PBS）的配制：甲液：0.05mol/LNa2HPO4溶液：稱取磷酸氫二鈉9.465g7.099g,加蒸餾水至1000ml;乙液：0.05mol/LKH2P04溶液：稱取磷酸二氫鉀，9.07g6.803g,加蒸餾水至1000m1。將甲乙液分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于4°C冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見(jiàn)下表：pH甲液ml乙液ml5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。1、哪種濃度的酒精消毒效果最好？75%酒精殺菌力最強(qiáng)，它能使蛋白質(zhì)脫水和變性，在3?5分鐘內(nèi)殺死細(xì)菌。因此，它用于消毒和防腐，適用于皮膚和器械、塑料制品等的消毒。高濃度的酒精（95?100%）能引起菌體表層蛋白質(zhì)凝固，形成保護(hù)層，使酒精分子不易透入，因此殺菌能力反而弱。2、試劑的等級(jí)有哪些？根據(jù)化學(xué)試劑的純度，按雜質(zhì)含量的多少可分為四級(jí)：一級(jí)試劑為優(yōu)質(zhì)純?cè)噭?，通常用G?R表示；二級(jí)試劑為分析純?cè)噭ǔＳ肁?R表示；三級(jí)試劑為化學(xué)純?cè)噭?，通常用C?R表示；四級(jí)試劑為實(shí)驗(yàn)或工業(yè)試劑，通常用L?R表示。此外，根據(jù)特殊的工作目的，還有一些特殊的純度標(biāo)準(zhǔn)，例如光譜純、熒光純、半導(dǎo)體純等。使用時(shí)應(yīng)按不同的實(shí)驗(yàn)要求，選用不同規(guī)格的試劑。3、固體試劑的溶解知多少？較大的固體顆粒溶解前，應(yīng)該先粉碎固體。固體的粉碎是在洗凈和干燥的研缽中進(jìn)行的。研缽中所盛固體的量不要超過(guò)研缽總?cè)萘康娜种?。溶解固體時(shí),常用攪拌，加熱等方法來(lái)加快溶解速度。攪拌液體應(yīng)手持?jǐn)嚢璋舨⑥D(zhuǎn)動(dòng)手腕，轉(zhuǎn)動(dòng)速度不要太快，也不要使攪拌棒碰在器壁上。攪拌試管中的液體時(shí)，攪拌棒可以轉(zhuǎn)動(dòng)，也可輕輕上下攪動(dòng)，但不要用力過(guò)大，以免將試管弄破。還可用振蕩試管的方法代替攪拌。加熱以加速固體溶解的方法與加熱液體時(shí)相同，即一般有直接加熱方法和水浴加熱方法等。要視被加熱物質(zhì)的穩(wěn)定性，而選用不同的加熱方法。另外還要注意在容器上蓋表面皿，以防止液體蒸發(fā)。4、下面這些你注意了嗎？稱量試劑的天平應(yīng)保持清潔、干燥，避免潮濕及腐蝕性氣體的侵蝕。在進(jìn)行稱量操作時(shí)，被稱取的試劑應(yīng)置于稱量紙上或其它器皿內(nèi)，不可在盤(pán)中直接稱量。在配制強(qiáng)酸、強(qiáng)堿溶液或接觸有毒性藥物時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行。如稀釋硫酸時(shí)，應(yīng)謹(jǐn)慎的將濃硫酸緩緩傾注水中，切不可把水倒入濃硫酸中。在配制藥物溶液時(shí)，某種動(dòng)物注入藥液的最大容量決定所配藥物溶液的濃度。如靜脈注射藥液容量過(guò)大，可影響其循環(huán)系統(tǒng)的正常功能。故靜脈注射容量最好在體重的1/100以下；靜脈外（皮下、肌肉及腹腔）注射容量最好在體重的1/40以下；因此，可根據(jù)動(dòng)物的體重，選擇所配藥物溶液的適當(dāng)濃度。在配制藥物溶液時(shí)，應(yīng)考慮到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性以及動(dòng)物離體器官或組織在實(shí)驗(yàn)條件下的正常功能。應(yīng)力求達(dá)到與血液及體液呈等滲與等張以及等pH值和離子平衡狀態(tài)，應(yīng)使用生理鹽水配制（溫血?jiǎng)游镉?.9%NaCl,冷血?jiǎng)游镉?.6%NaCl）。離體器官灌流液或營(yíng)養(yǎng)液因用量大，應(yīng)嚴(yán)格計(jì)算滲透壓、pH值與各種離子濃度，有時(shí)還要考慮營(yíng)養(yǎng)成分如葡萄糖的含量等，根據(jù)動(dòng)物離體器官的不同而使用不同的生理溶液。5、常用的抗凝劑有哪些？肝素（Heparin）肝素的抗凝血作用很強(qiáng)，常用來(lái)作為全身抗凝劑，特別是在進(jìn)行微循環(huán)方面動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)的肝素應(yīng)用更有重要意義。純的肝素10mg能抗凝100ml血液（按1mg等于100個(gè)國(guó)際單位，10個(gè)國(guó)際單位能抗凝lml血液計(jì)）。如果肝素的純度不高，或過(guò)期，所用的劑量應(yīng)增大2?3倍。用于試管內(nèi)抗凝時(shí)，一般可配成1%肝素生理鹽水溶液，取0.1ml加入試管內(nèi)，加熱80°C烘干，每管能使5?10ml血液不凝固。作全身抗凝時(shí)，一般劑量為：大鼠2.5?3mg?（200?300g體重）-1,兔或貓10mg?kg-1，狗5?10mg?kg-1。如果肝素的純度不高，或過(guò)期，所用的劑量應(yīng)增大2?3倍。草酸鹽合劑配方：草酸銨1.2g草酸鉀0.8g福爾馬林1.0ml蒸餾水加至100ml配成2%溶液，每1ml血加草酸鹽2mg（相當(dāng)于草酸銨1.2mg，草酸鉀0.8mg）。用前根據(jù)取血量將計(jì)算好的量加入玻璃容器內(nèi)烤干備用。如取0.5ml于試管中，烘干后每管可使5ml血不凝固。此抗凝劑量適于作紅細(xì)胞比容測(cè)定。能使血凝過(guò)程中所必須的鈣離子沉淀達(dá)到抗凝的目的。枸櫞酸鈉常配成3%?8%水溶液，也可直接用粉劑。枸櫞酸鈉可使鈣失去活性，故能防止血凝。但其抗凝作用較差，其堿性較強(qiáng)，不適作化學(xué)檢驗(yàn)之用。一般用1：9（即1份溶液，9份血）用于紅細(xì)胞沉降和動(dòng)物急性血壓實(shí)驗(yàn)（用于連接血壓計(jì)時(shí)的抗凝）。不同動(dòng)物，其濃度也不同：狗為6%，貓為2%+硫酸鈉25%，兔為5%。草酸鉀每1ml血需加1-2mg草酸鉀。如配制10%水溶液，每管加0.1ml則可使5-10ml血液不凝固。1、30%丙烯酰胺⑴配制方法：將29G丙烯酰胺和lgN,N'-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中，加熱至37°C溶解之，補(bǔ)加水至終體積為100ml,用Nalgene濾器(0.45um孔徑)過(guò)濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置之不理棕色瓶中保存于室溫。(2)說(shuō)明：小心丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可通過(guò)皮膚吸收，其作用具螺積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具?？烧J(rèn)為聚丙烯酰胺無(wú)毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)樗€可能會(huì)含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹(shù)脂(MB-1Mallinckrodt)，攪拌過(guò)夜，然后用Whatman1號(hào)濾紙以純化之。在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酸和雙丙烯酸。2、10%過(guò)濾酸銨(1)配制方法:把1g過(guò)硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4C保存數(shù)周。3、1mol/L氯化鈣配制方法：在20ml純水中(Milli-Ce水或相當(dāng)級(jí)別的水)溶解54gCacl2?6H20用0.22um濾器過(guò)濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20C。說(shuō)明：制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，取出一小份解凍并用純水稀釋至100ml,用Nalgene濾器(0.45um孔徑)過(guò)濾除菌，然后聚冷至0C。4、1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)配制方法：用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,過(guò)濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20C。說(shuō)明：DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理。5、0?5mol/LEDTA(pH8?0)配制方法：在800ml水中加入186.1g=水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?2H2O)，在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0(約需20gNaoh顆粒)然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。說(shuō)明：EDTA二鈉鹽需加入NaoH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0時(shí)，才能完全溶解。6、10mg/ml溴化乙錠配制方法：在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容光煥發(fā)器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。說(shuō)明：小心：溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時(shí)務(wù)必戴上手套，稱量染料時(shí)要戴面罩。這些溶液使用后應(yīng)按附錄E提供的方法之一進(jìn)行凈化處理。7、100mmol/LIPTG配制方法：IPTG為異丙基硫式-B-D-半乳糖苷(分子量為238.3D)，在8ml蒸餾水中溶解2gIPTG后，用蒸餾水定容至10ml，用0.22um濾器過(guò)濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20°C。8、1mol/L硫酸酶(1)配制方法：在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至1L,過(guò)濾殺菌。9、B巰基乙醇(BME)配制方法：一般得到的是14.4mol/L溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4C；說(shuō)明：BME或含有BME的溶液不能高壓處理10、酚/氯仿配制方法：一般得到的是14.4mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層，保存于4C。說(shuō)明：小心，酚腐蝕性很強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡，穿防護(hù)服。所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行。與酚接觸過(guò)的皮膚部位應(yīng)用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。11、10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)配制方法：用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L)，分裝成小份貯存于-20C,如有必要可配成濃度高達(dá)17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)。說(shuō)明：小心：PMSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸和，吞進(jìn)或通過(guò)皮膚吸收后有致命危險(xiǎn)。一旦眼睛或皮膚接觸3PMSF，應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣服應(yīng)予丟棄。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定，應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加入裂解緩沖液中oPMSF在水溶液中的活性喪失速率高于4C。pH值為8.0時(shí)，20umol/L的PMSF溶液的半壽期大約為35分鐘(James，1978)，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數(shù)小時(shí)后，可安全地予以丟棄。12、磷酸鹽緩沖溶液(PBS)(1)配制方法：在800ml蒸餾水中溶解8gNacl、0.2gKcl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCL調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4加水定容至IL，在1516f/in2(1.034X105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鐘，保存于室溫。13、乙酸鉀溶液(用于堿裂解)(1)配制方法：在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成鉀濃度為3mol/L，而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。14、3mol/L乙酸鈉(1)配制方法：在800ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或同稀乙烯調(diào)節(jié)pH值至7.0,加水定容到1L，分裝后高壓滅菌。15、5mol/L氯化鈉(1)配制方法：在800ml水中溶解292.2gNacl加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。16、10%十二烷基硫酸鈉(SDS)配制方法：在900ml水中溶解100g電泳級(jí)SDS,加熱至68°C助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2，加水定容至1L,分裝備用。說(shuō)明：SDS的微細(xì)晶粒易于擴(kuò)散，因此稱量時(shí)要戴口罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS，10%SDS溶液無(wú)須滅菌。17、20XSSC(1)配制方法：在800ml水中溶解175.3gNacl和88.2g檸檬酸鈉，加入數(shù)滴10mol/LNach溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0加水定量至1L,分裝后高壓滅菌。18、100%三氯乙酸(1)配制方法：在裝有500gTCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%(W/V)TCA。19、1mol/LTris(1)配制方法：在800ml水中溶解121.1gTris堿，加入濃HCL調(diào)節(jié)pH值至所需值。pHHCL7.470ml7.6?60ml8.0?42ml應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定pH值，加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。(2)說(shuō)明：如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄，并置備質(zhì)量更好的Tris。盡管多種類(lèi)型的電級(jí)均不能準(zhǔn)確測(cè)量Tris溶液的pH值，但仍可向大多數(shù)廠商購(gòu)得適合的電極°Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每升高1C,pH值大約降低.03個(gè)單位。例如：0.05mol/L的溶液在5C、25C和37C時(shí)的pH值分別為9.5、8.9和8.6。

20、Tris緩沖液溶液(1)配制方法：在800ml蒸餾水中溶解8gNacl、0.2Kcl和3gTris堿，加

入0.015g酚紅并用Hcl調(diào)pH值至7.4,用蒸餾水定容至1L，分裝后在15lbf/in2(1.034X105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鐘，于室溫保存。21、X-gal(1)配制方法：X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-B-D-半乳糖苷，用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應(yīng)貯存于-20°C,X-gal溶液無(wú)須過(guò)濾除菌。

3.45.7014.306.413.8413.566.614.555.453.87.1012.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55Na2HP04分子量:—141.980.2M溶液含28.40g/LNa2HPO4?2H20分子量一178.050.2M溶液含35.61g/LC6H8O7?H20分子量一210.140.1M溶液含21.01g/L4.檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液pH鈉離子濃度/M檸檬酸C6H8O7?H20/g氫氧化鈉NaOH/g濃鹽酸HCl/ml終體積/L2.20.2021084160103.10.2021083116103.30.2021083106104.30.202108345105.30.3524514468105.80.45285186105106.50.3826615612610使用時(shí)可以每升中加入1g酚，若最后pH有變化，再用少量50%氫氧化鈉溶液或濃鹽酸調(diào)節(jié)，冰箱保存。風(fēng)之飄渺2008-12-2514:10檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（0.1M）pH0.1M檸檬酸/ml0.1M檸檬酸鈉/mlpH0.1M檸檬酸/ml0.1M檸檬酸鈉/ml3.07.312.73.416.04.05.46.413.63.65.514.53.814.06.05.84.715.34.03.817.24.42.018.04.610410.8C6H807?H20分子量=210.140.1M溶液含21.01g/L

Na3C6H507?2H20分子量=294.120.1M溶液含29.41g/L乙酸-乙酸鈉緩沖液（0.2M）pH0.2MNaAc/ml0.2MHAC/mlpH0.2MNaAc/ml0.2MHAC/ml3.60.7008.805.07.003.004.01.80057.355.48.601.404.43.706.3004.64.9000.60NaAc分子量—：136.090.2M溶液為27.22g/L磷酸鹽緩沖液(1)磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液(0.2M)pH0.2MNa2HPO4/ml0.2MNaH2PO4/mlpH0.2MNa2HPO4/ml0.2MNaH2PO4/ml5.88.092.07.061.039.05.910.090.07.167.033.06.012.387.77.272.028.06.115.085.07.377.023.06.218.581.57.481.019.06.322.577.57.584.016.06.426.573.57.687.013.06.531.568.57.789.510.56.637.562.57.843.556.57.993.07.06.849.551.08.055.045.0Na2HPO4?2H20分子量-：178.050.2M溶液含35.61g/LNa2HPO4?12H20分子量=358.220.2M溶液含71.64g/LNaH2PO4?H20分子量=138.010.2M溶液含27.6g/LNaH2PO4?2H20分子量=156.030.2M溶液含31.21g/L（2）磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液（1/15M）pH1/15MNa2HPO4/ml1/15MKH2P04/mlpH1/15MNa2HPO4/ml1/15MKH2PO4/ml4.920.109.907.177.003.005.290.509.507.388.002.005.911.009.007.739.001.00

6.242.008.008