檢驗基礎(chǔ)知識培訓(xùn)課件

檢驗基礎(chǔ)知識講座株式會社日立高新技術(shù)1檢驗基礎(chǔ)知識講座株式會社日立高新技術(shù)1問題：1、檢驗科是做什么的？工作流程如何？2、生化儀的用途是什么？3、生化儀分析的是什么？2問題：1、檢驗科是做什么的？2檢驗科科室工作分布情況臨檢室微生物室生化室免疫室血液室血常規(guī)小便常規(guī)大便常規(guī)肝功能腎功能血脂心肌酶譜電解質(zhì)糖類腦脊液、體液常規(guī)肝炎類部分免疫項目腫瘤標志物腎炎類心肌損傷標志物愛滋病風濕類急性時相蛋白培養(yǎng)鑒定藥敏骨髓涂片鑒別實驗3檢驗科科室工作分布情況臨檢室微生物室生化室免疫室血液室血常規(guī)檢驗科科室工作流程朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定結(jié)果審核上級主管報告發(fā)出填寫記錄維護保養(yǎng)關(guān)機異常告知復(fù)查4檢驗科科室工作流程朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定結(jié)果審核上級主管報告發(fā)出填寫記錄維護保養(yǎng)關(guān)機異常告知復(fù)查檢驗科科室工作流程（朝會交接工作）5朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定結(jié)果審核上級主管報告發(fā)出填寫記錄維護保養(yǎng)關(guān)機異常告知復(fù)查檢驗科科室工作流程（接收標本整理分類）6朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定標本分類血清血漿尿液腦脊液體液（胸水、腹水）檢驗科科室工作流程（接收標本整理分類）7標本分類血清檢驗科科室工作流程（接收標本整理分類）7采血針分類：末梢采血針靜脈采血針8采血針分類：末梢采血針靜脈采血針8真空管采血管分類：1.(普通血清管)-紅色頭蓋，采血管中不含添加劑，用于常規(guī)血清生化，血庫和血清學(xué)相關(guān)檢驗。

2.(惰性分離膠促凝管)-金黃頭蓋，采血管內(nèi)添加有惰性分離膠和促凝劑。標本離心后，惰性分離膠能夠?qū)⒀褐械囊后w成分（血清或血漿）和固體成分（紅細胞，白細胞，血小板，纖維蛋白等）徹底分開并完全積聚在試管中央而形成屏障，標本在48小時內(nèi)保持穩(wěn)定。促凝劑可快速激活凝血機制，加速凝血過程，適用于急診血清生化試驗。

3.(肝素抗凝管)-綠色頭蓋，采血管內(nèi)添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延長標本凝血時間。適用于紅細胞脆性試驗，血氣分析，紅細胞壓積試驗，血沉及普能生化測定，不適于做血凝試驗。過量的肝素會引起白細胞的聚集，不能用于白細胞計數(shù)。因其可使血片染色后背景呈淡藍色，故也不適于白細胞分類。

4.(血漿分離管)-淺綠色頭蓋，在惰性分離膠管內(nèi)加入肝素鋰抗凝劑，可達到快速分離血漿的目的，是電解質(zhì)檢測的最佳選擇，也可用于常規(guī)血漿生化測定和ICU等急診血漿生化檢測。血漿標本可直接上機并在冷藏狀態(tài)下保持48小時穩(wěn)定。

5.(EDTA抗凝管)-紫色頭蓋，乙二胺四乙酸（EDTA，分子量292）及其鹽是一種氨基多羧基酸，可以有效地螯合血液標本中鈣離子，螯合鈣或?qū)⑩}反應(yīng)位點移去將阻滯和終止內(nèi)源性或外源性凝過程，從而防止血液標本凝固。適用于一般血液學(xué)檢驗，不適用于凝血試驗及血小板功能檢查，亦不適用于鈣離子，鉀離子，鈉離子，鐵離子，堿性磷酸酶，肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的測定及PCR試驗。

6.(枸櫞酸鈉凝血試驗管)-淺藍頭蓋，枸櫞酸鈉主要通過與血樣中鈣離子螯合而起抗凝作用。適用于凝血實驗，國家臨訂實驗室標準化委員會（NCCLS)推薦的抗凝劑濃度是3.2%或3.8%（相當于0.109mol/L或0.129mol/L),抗凝劑與血液的比例為1：9。

7.(枸櫞酸鈉血沉試驗管)-黑色頭蓋，血沉試驗要求的枸櫞酸鈉濃度是3.2%(相當于0.109mol/L)抗凝劑與血液的比例為1：4。

8.(草酸鉀/氟化鈉)-灰色頭蓋，氟化鈉是一種弱效抗凝劑，一般常同草酸鉀或乙碘酸鈉合并使用，其比例為氟化鈉1份，草酸鉀3份。此混合物4mg可使1ml血液在23天內(nèi)不凝固和抑制糖分解，它是血糖測定的估良保存劑，不能用于尿素酶法測定尿素，也不有用于堿性磷酸酶和淀粉酶的測定，推薦用于血糖檢測。（目前樹蘭不使用）9真空管采血管分類：1.(普通血清管)-紅色頭蓋，采血管中血清與血漿的成分區(qū)別血清纖維蛋白原血細胞血漿血細胞不抗凝管抗凝管10血清與血漿的成分區(qū)別血清纖維蛋白原血細胞血漿血細胞不抗凝管抗檢驗科科室工作流程（接收標本整理分類）標本具備患者信息及編號姓名門診病歷號/住院病歷號年齡性別臨床診斷/表現(xiàn)開單日期檢查項目采樣日期及時間編號時，觀察樣本狀況，可添加以下信息作為該標本注釋：1、標本量（是否足夠）2、是否正確使用盛器3、有無溶血（溶血—紅細胞破裂）4、有無黃疸（黃疸—血清中膽紅素含量達到一定范圍，所呈現(xiàn)類似金黃色）5、有無脂血（脂血—血清中脂類含量達到一定范圍，呈牛奶狀）11檢驗科科室工作流程（接收標本整理分類）標本具備患者血清/血漿標本測定項目生化項目

1、肝功能：ALT、AST、TP、ALB、TBIL、DBIL、ALP、GGT、CHE、TBA、PA2、腎功能：BUN、CRE、UA、CO2-CP3、血脂：TCHO、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB、Lp（a）4、心肌酶譜：AST、LDH、HBDH、CK、CK-MB、LDH-15、電解質(zhì)：K、Na、Cl、Ca、Mg、P、Fe、Cu、Zn6、免疫類：ASO、RF、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP7、其他特殊項目：免疫項目血液病檢查項目微生物項目

根據(jù)項目分類后，送各科室，各科室進行樣本編號。檢驗科科室工作流程（接收標本整理分類）12血清/血漿標本測定項目生化項目檢驗科科室工作流

ALT（GPT）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶—谷丙轉(zhuǎn)氨酶AST（GOT）天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶—谷草轉(zhuǎn)氨酶

ALT/AST谷丙/谷草ALP（AKP）堿性磷酸酶—堿磷酶GGT（γ-GT）γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶—轉(zhuǎn)肽酶TBIL總膽紅素DBIL直接膽紅素

IDBIL間接膽紅素TP總蛋白ALB白蛋白

GLO球蛋白

A/G白球比值CHE膽堿酯酶TBA總膽汁酸PA前白蛋白肝功能生化項目13ALT（GPT）丙氨酸氨基1、肝細胞的損害情況2、肝細胞參與的代謝功能3、肝細胞的合成功能為什么選用以下項目作為肝功能指標？

ALT（GPT）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶—谷丙轉(zhuǎn)氨酶AST（GOT）天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶—谷草轉(zhuǎn)氨酶

ALT/AST谷丙/谷草ALP（AKP）堿性磷酸酶—堿磷酶GGT（γ-GT）γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶—轉(zhuǎn)肽酶TBIL總膽紅素DBIL直接膽紅素

IDBIL間接膽紅素TP總蛋白ALB白蛋白

GLO球蛋白

A/G白球比值CHE膽堿酯酶TBA總膽汁酸PA前白蛋白141、肝細胞的損害情況為什么選用以下項目作為肝功能指標？肝功能生化項目臨床意義檢查亞臨床肝病估計肝組織損害程度觀察黃疸性質(zhì)和程度判斷肝病以便擬訂治療措施檢測肝病病程、評價療效估計病人能否接受某種治療措施，如手術(shù)等常規(guī)體檢15肝功能生化項目臨床意義15腎功能生化項目BUN/UREA尿素氮/尿素CRE肌酐UA尿酸CO2-CP二氧化碳結(jié)合力U-TP尿蛋白U-ALB尿白蛋白臨床意義：用于排除和發(fā)現(xiàn)腎臟和泌尿道疾病。16腎功能生化項目BUN/UREA血脂生化項目TCHO總膽固醇TG甘油三酯HDL-C高密度脂蛋白-膽固醇LDL-C低密度脂蛋白-膽固醇ApoA1載脂蛋白A1ApoB載脂蛋白BLp（a）脂蛋白a臨床意義：用于心血管疾病的臨床觀察、干預(yù)研究、實驗室和流行病學(xué)調(diào)查。17血脂生化項目TCHO心肌酶譜生化項目AST（GPT）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶—谷丙轉(zhuǎn)氨酶LDH乳酸脫氫酶LDH-1乳酸脫氫酶-1CK肌酸激酶CK-MB肌酸激酶同工酶MBα-HBDHα-羥丁酸脫氫酶臨床意義：用于診斷急、慢性心臟疾病。注：同功酶是指同一種屬酶分子結(jié)構(gòu)組成不同能催化同一種化學(xué)反應(yīng)的一組酶，其物理、化學(xué)性質(zhì)乃至生物學(xué)功能均可有所差異。由于分子結(jié)構(gòu)的差異，雖然催化同一種反應(yīng)，但其底物專一性與親和力，乃至酶的動力學(xué)都可能存在差異，在代謝過程中的功能也有所不同。18心肌酶譜生化項目AST（GPT）電解質(zhì)和微量元素生化項目K鉀Na鈉Cl氯Ca鈣Mg鎂P磷Fe鐵Cu銅Zn鋅19電解質(zhì)和微量元素生化項目K免疫類生化項目IgG免疫球蛋白GIgA免疫球蛋白AIgM免疫球蛋白MC3補體C3C4補體C4CRP（hsCRP）C-反應(yīng)蛋白（超敏C-反應(yīng)蛋白）臨床意義：用于診斷、監(jiān)測感染、免疫性疾病和急性炎癥。20免疫類生化項目IgG糖類生化項目GLU葡萄糖HBA1C糖化血紅蛋白

FMN果糖胺/糖化血清蛋白臨床意義：用于診斷糖尿病、監(jiān)測治療過程。21糖類生化項目GLU尿液標本測定項目臨檢項目（尿常規(guī)、尿沉渣檢查）生化項目（尿淀粉酶、尿肌酐、尿尿酸等）免疫項目（尿β2-微球蛋白等）微生物項目（培養(yǎng)、鑒定、藥敏）血液病檢查項目22尿液標本測定項目臨檢項目（尿常規(guī)、尿沉渣檢查）腦脊液標本測定項目臨檢項目（細胞計數(shù)、分類等）生化項目（葡萄糖、乳酸脫氫酶、氯化物、蛋白等）免疫項目（免疫球蛋白等）微生物項目（培養(yǎng)、鑒定、藥敏）23腦脊液標本測定項目臨檢項目（細胞計數(shù)、分類等胸腹水標本測定項目臨檢項目（細胞計數(shù)、分類等）生化項目（葡萄糖、乳酸脫氫酶、氯化物、蛋白等）免疫項目（免疫球蛋白等）微生物項目（培養(yǎng)、鑒定、藥敏）24胸腹水標本測定項目臨檢項目（細胞計數(shù)、分類等檢驗科科室工作流程（樣本前處理準備）朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定結(jié)果審核上級主管報告發(fā)出填寫記錄維護保養(yǎng)關(guān)機異常告知復(fù)查25檢驗科科室工作流程（樣本前處理準備）朝會交接工作接收標本整理檢驗科科室工作流程（樣本前處理準備）生化室

1、血清/血漿：離心、分注2、尿液/腦脊液/胸/腹水：離心，取上清液免疫室1、同上2、抗凝血：細胞分離使用微生物室：直接使用臨檢室：

1、全血：直接使用2、血清/血漿：離心、分注3、尿液/腦脊液/胸/腹水：直接使用或離心，取上清液/沉渣血液室：

1、血液/骨髓：涂片使用2、血清：離心、分注3、抗凝血：細胞分離使用26檢驗科科室工作流程（樣本前處理準備）生化室26影響測定的樣本因素溶血：K、LDH、AST、ALT抗凝劑：樣本的穩(wěn)定性：GLU、K樣本稀釋：因大多數(shù)蛋白質(zhì)在濃溶液中的分子構(gòu)象比稀溶液中穩(wěn)定；檢驗科科室工作流程（樣本前處理準備）27影響測定的樣本因素溶血：K、LDH、AST、ALT檢驗科科室朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定結(jié)果審核上級主管報告發(fā)出填寫記錄維護保養(yǎng)關(guān)機異常告知復(fù)查檢驗科科室工作流程（工作前準備）28朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定檢驗科科室工作流程（工作前準備）29檢驗科科室工作流程（工作前準備）29檢驗科科室工作流程（工作前準備）試劑種類介紹干粉試劑液體試劑單試劑雙試劑單試劑雙試劑試劑30檢驗科科室工作流程（工作前準備）試劑種類介紹干粉試檢驗科科室工作流程（工作前準備）液體試劑與干粉試劑的比較31檢驗科科室工作流程（工作前準備）液體試劑與干粉試劑的比較31檢驗科科室工作流程（工作前準備）單試劑與雙試劑的比較時間吸光度A1A’1時間吸光度A1A’1S+R1S+R1R2A2A’2—：表示正常顏色樣本反應(yīng)曲線；—：表示樣本本底顏色高的標本32檢驗科科室工作流程（工作前準備）單試劑與雙試劑的比較時間吸光檢驗科科室工作流程（工作前準備）單試劑與雙試劑的比較

ALTα-酮戊二酸+L-丙氨酸L-谷氨酸+丙酮酸

LDH丙酮酸+NADH+HL-乳酸+NAD原理：試劑成分：R1：Tris緩沖液L-丙氨酸NADHLDHR2：Tris緩沖液L-丙氨酸a-酮戊二酸33檢驗科科室工作流程（工作前準備）單試劑與雙試劑的比較檢驗科科室工作流程（工作前準備）使用雙試劑的優(yōu)點扣除樣本空白的影響（R1多為緩沖液，R2多為啟動試劑）去除內(nèi)源性干擾物質(zhì)（R1含與內(nèi)源性干擾物質(zhì)反應(yīng)的物質(zhì)，R2為啟動試劑）使用方便，不易造成浪費34檢驗科科室工作流程（工作前準備）使用雙試劑的優(yōu)點扣除檢驗科科室工作流程（工作前準備）使用雙波長的優(yōu)點λ波長吸光度λ1λ2主波長付波長A’1A’2A1A21、使用單波長λ1測定時，待測物的吸光度A為：A=A1+A’12、使用雙波長測定時，待測物的吸光度A為：A=（A1+A’1）-（A2+A’2）—：待測物的吸收曲線；—：干擾物的吸收曲線35檢驗科科室工作流程（工作前準備）使用雙波長的優(yōu)檢驗科科室工作流程（工作前準備）使用雙波長的優(yōu)點1、補償由于樣本溶血、黃疸、脂血造成的樣本本底顏色增高的影響；2、補償由于電壓波動造成的影響。36檢驗科科室工作流程（工作前準備）使用雙波長的優(yōu)朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定結(jié)果審核上級主管報告發(fā)出填寫記錄維護保養(yǎng)關(guān)機異常告知復(fù)查檢驗科科室工作流程（上機測定）37朝會交接工作接收標本整理分類樣本前處理準備工作前準備上機測定朗伯--比爾定律（Lamber-Beer定律）比色分析的基礎(chǔ)入射光Ⅰ0出射光ⅠtL當一束強度為Ⅰ0的平行單色光通過一個含有濃度為C的吸收物質(zhì)、厚度為L的吸收池時，一些光子被物質(zhì)吸收，光強從Ⅰ0減少至Ⅰt。經(jīng)數(shù)學(xué)推導(dǎo)，可用以下數(shù)學(xué)公式表示:-lg—=ε×C×LⅠtⅠ038朗伯--比爾定律（Lamber-Beer定律）比色分析的基礎(chǔ)-lg—=ε×C×LⅠtⅠ0朗伯--比爾定律（Lamber-Beer定律）比色分析的基礎(chǔ)—ⅠtⅠ0用T表示，稱為透光率。-lg—用A表示，稱為吸光度。ε是摩爾消光系數(shù)，在給定條件（單色光波長、溶劑、溫度），ε是物質(zhì)的特性常數(shù)，它只和該物質(zhì)分子在基態(tài)和激發(fā)態(tài)的躍遷幾率有關(guān)。在A與C或L之間的直線關(guān)系中，ε是斜率，值越大，測定的靈敏度越高。ⅠtⅠ0A=ε×C×L39-lg—=ε×C×LⅠtⅠ0朗伯--比爾定律（Lambe檢驗科科室工作流程（上機測定）分析方法簡介時間吸光度A1t終點法時間吸光度A1t速率法t2t1t3t4△A1△A2△A3S+RS+R利用反應(yīng)到達終點時的吸光度A1來計算物質(zhì)濃度。利用0級反應(yīng)期，用最小二乘法計算出單位時間的吸光度變化△A/min，來反應(yīng)酶的活性。40檢驗科科室工作流程（上機測定）分析方法簡介時間吸光檢驗科科室工作流程（上機測定）酶測定簡介酶是生物體內(nèi)具有催化活性的一類蛋白質(zhì)，具有高效性和專一性。例：

酶

葡萄糖+BC+D測量對象不同：1、葡萄糖是待測物，B和酶是試劑，充分反應(yīng)后，測定B的減少量或C、D的生成量，就可以反映葡萄糖的濃度。2、酶是待測物，葡萄糖和B是試劑，測定葡萄糖、B減少的速度或測定C、D生成的速度，就可以反應(yīng)酶的活性。表示單位不同：1、酶以活性單位表示，如國際單位IU/L2、其他項目，多使用物質(zhì)的量作為單位：如國際單位mmol/L（國內(nèi)多用）或常用單位mg/dl（日本多用）41檢驗科科室工作流程（上機測定）酶測定簡介酶檢驗科科室工作流程（上機測定）標本測定物質(zhì)分類酶：ALT、AST、ALP、GGT、CHE、LDH、CK、CK-MB、HBDH、LDH1蛋白：TP、ALB、U-TP、U-ALB、PA糖類、小分子：GLU、BUN、CRE、UA離子：K、Na、Cl、Ca、Mg、P脂類：TCHO、TG、HDL、LDL、Apo1、ApoB、Lp（a）42檢驗科科室工作流程（上機測定）標本測定物質(zhì)分類檢驗科科室工作流程（上機測定）上機測定的流程質(zhì)控品測定檢查操作，新開一瓶質(zhì)控血清在控失控常規(guī)標本測定檢查試劑，重新校準在控失控重做質(zhì)控在控43檢驗科科室工作流程（上機測定）上機測定的流程質(zhì)控檢驗科科室工作流程（上機測定）質(zhì)控（QC）室內(nèi)質(zhì)控：1、質(zhì)控品來源：購買商品化質(zhì)控血清（定值或不定值）或科室自制（混合血清，分裝冰凍）；2、質(zhì)控品測定頻率：按科室質(zhì)控管理程序，每日或更小的時間間隔（每RUN或每？小時）測定一次；3、測定方式：混入常規(guī)樣本中測定；4、數(shù)據(jù)處理：繪制質(zhì)控圖，根據(jù)按科室質(zhì)控管理程序判斷在控或失控，以及是否或如何進行下一步工作。例：+3SD-3SD+2SD-2SD+1SDX-1SD檢查準確度，保持精度質(zhì)控數(shù)據(jù)超出±3SD的概率是0.3%,屬于小概率事件，可判斷為失控。Levey-Jennings質(zhì)控圖44檢驗科科室工作流程（上機測定）質(zhì)控（QC）室內(nèi)質(zhì)控：檢驗科科室工作流程（上機測定）日立生化儀上的實時質(zhì)控使用兩個不同濃度的質(zhì)控品，均值分別做為X、Y兩個濃度質(zhì)控品同時測定，數(shù)據(jù)即可在坐標圖上確定出位置+3SD-3SD+2SD-2SD+1SDY-1SD+3SD-3SD+2SD-2SD+1SDX-1SD數(shù)據(jù)點落在區(qū)域，表明系統(tǒng)誤差；數(shù)據(jù)點落在區(qū)域，表明系統(tǒng)偶然誤差45檢驗科科室工作流程（上機測定）日立生化儀上的實時質(zhì)控使用兩個室間質(zhì)評：實驗室間比對檢驗科科室工作流程（上機測定）質(zhì)控（QC）1、質(zhì)控品來源：由各級臨檢中心定期發(fā)放給各家醫(yī)院檢驗科2、質(zhì)控品測定頻率：一年兩次或三次3、測定方式：要求混入常規(guī)樣本中測定4、數(shù)據(jù)處理：科室將數(shù)據(jù)回報給臨檢中心。臨檢中心收到數(shù)據(jù)后經(jīng)過處理，將科室室間質(zhì)評成績發(fā)回科室。存在誤區(qū)：1、將室間質(zhì)評成績作為科室績效考核標準之一；2、將室間質(zhì)評成績作為醫(yī)院等級評審考核標準之一。結(jié)果：1、質(zhì)控品特殊處理（與常規(guī)標本待遇不同）；2、醫(yī)院之間互相通告室間質(zhì)評結(jié)果。重視室內(nèi)質(zhì)控正視室間質(zhì)評46室間質(zhì)評：實驗室間比對檢驗科科室工作流程（上機測定）質(zhì)檢驗科科室工作流程（上機測定）校準（Calibration）通過校準品將儀器和試劑聯(lián)系起來，建立一條濃度和吸光度的關(guān)系曲線（標準曲線），用于進行未知濃度標本的測定。吸光度濃度A1A2STD（1）STD（2）AXCX溯源47檢驗科科室工作流程（上機測定）校準（Calibrat檢驗科科室工作流程（上機測定）校準類型吸光度濃度A1A3S