細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)課件

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院病理科舒紅

第八章細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院第八章細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)1第一節(jié)細(xì)胞病理學(xué)

基本檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)細(xì)胞病理學(xué)

基本檢驗(yàn)2定義細(xì)胞病理學(xué)

采集、制備、染色觀察

是通過(guò)檢查細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，進(jìn)行健康和疾病的篩查、診斷和研究體檢、普查診斷、鑒別診斷定義細(xì)胞病理學(xué)3本節(jié)內(nèi)容提要一.標(biāo)本采集二.標(biāo)本涂片三.涂片固定四.涂片染色五.觀察涂片六.細(xì)胞學(xué)診斷七.細(xì)胞學(xué)診斷的質(zhì)量保證本節(jié)內(nèi)容提要一.標(biāo)本采集4一.標(biāo)本采集原則：準(zhǔn)確選擇采集部位標(biāo)本保持新鮮，盡快制片盡量避免血液及粘液等混入方法簡(jiǎn)便，操作輕柔，減少病人痛苦，防止并發(fā)癥和腫瘤擴(kuò)散采集、制備、染色、觀察原則：準(zhǔn)確選擇采集部位標(biāo)本保持新鮮，盡快制片盡量避免血液及粘液等混入（干凈）方法簡(jiǎn)便，操作輕柔，減少病人痛苦，防止并發(fā)癥和腫瘤擴(kuò)散一.標(biāo)本采集原則：采集、制備、染色、觀察原則：5標(biāo)本分類１.脫落細(xì)胞：自然脫落細(xì)胞非自然脫落細(xì)胞2.細(xì)針穿刺細(xì)胞標(biāo)本分類１.脫落細(xì)胞：自然脫落細(xì)胞6自然脫落細(xì)胞標(biāo)本：咳出：痰排出：尿、便擠出：乳頭分泌物等。非自然脫落細(xì)胞標(biāo)本：如氣管，宮頸，皮膚，乳頭等。穿刺細(xì)胞標(biāo)本：漿膜腔積液腫瘤穿刺采集、制備、染色、觀察自然脫落細(xì)胞標(biāo)本：咳出：痰采集、制備、染色、觀察7自然脫落細(xì)胞標(biāo)本特點(diǎn)包括痰，尿液，乳頭分泌物，精液等。容易獲取標(biāo)本能多次采樣成分復(fù)雜，含多種細(xì)胞成分，炎細(xì)胞，微生物及外源污染物細(xì)胞成分保存較差采集、制備、染色、觀察包括痰，尿液，乳頭分泌物，精液等。容易獲取標(biāo)本能多次采樣成分復(fù)雜，含多種細(xì)胞成分，炎細(xì)胞，微生物及外源污染物細(xì)胞成分保存較差自然脫落細(xì)胞標(biāo)本特點(diǎn)包括痰，尿液，乳頭分泌物，精液等。采集、8霉菌污染0926963,男,78歲,臨床診斷:肺炎送檢標(biāo)本:痰霉菌污染0926963,男,78歲,臨床診斷:肺炎9污染的蟲(chóng)卵0926965,男,79歲,臨床診斷:肺癌?送檢標(biāo)本：痰污染的蟲(chóng)卵0926965,男,79歲,臨床診斷:肺癌?10痰細(xì)胞退變痰細(xì)胞退變11非自然脫落細(xì)胞標(biāo)本特點(diǎn)包括氣管刷，宮頸刷，支氣管灌洗液及皮膚乳頭等刮取標(biāo)本。直接從病變器官表面采樣纖維鏡能從器官內(nèi)部獲取標(biāo)本能獲取上皮下的病變標(biāo)本細(xì)胞成分保存良好，但診斷標(biāo)準(zhǔn)不同于脫落細(xì)胞采集、制備、染色、觀察非自然脫落細(xì)胞標(biāo)本特點(diǎn)包括氣管刷，宮頸刷，支氣管灌洗液12宮頸細(xì)胞學(xué)的取材與制片方法刮取法刷取法宮頸細(xì)胞學(xué)的取材與制片方法13氣管刷細(xì)胞涂片氣管刷細(xì)胞涂片14肺泡灌洗液0925790,男,66歲CT：左肺上葉尖后段不整形實(shí)變影氣管鏡：未見(jiàn)病變細(xì)胞學(xué)診斷：腺癌肺泡灌洗液0925790,男,66歲15穿刺細(xì)胞標(biāo)本1體腔抽出液：胸腹水、心包液、腦脊液等；2細(xì)針穿刺吸取液：如體表腫物穿刺液，超聲定位下肝、胰腺和腎臟穿刺液；借助內(nèi)窺鏡技術(shù)穿刺等。理論上適用于任何器官簡(jiǎn)便，費(fèi)用低，創(chuàng)傷小良好的穿刺和制片技術(shù)可獲得最佳結(jié)果需外科病理學(xué)知識(shí)有一定局限性，如采樣不足等采集、制備、染色、觀察穿刺細(xì)胞標(biāo)本1體腔抽出液：胸腹水、心包液、腦脊液等；采集、制16二.涂片制備

原則標(biāo)本新鮮玻片清潔操作輕柔涂片牢固涂片數(shù)量采集、制備、染色、觀察二.涂片制備

原則采集、制備、染色、觀察17方法直接涂片：將新鮮標(biāo)本直接涂在載玻片上１.推片法２.涂抹法３.壓拉涂片法間接涂片：將各種液體標(biāo)本進(jìn)行濃縮處理后再涂片４.離心法５.液基薄層法６.細(xì)胞塊法方法直接涂片：將新鮮標(biāo)本直接涂在載玻片上18１.推片法采集、制備、染色、觀察１.推片法采集、制備、染色、觀察19２.涂抹法采集、制備、染色、觀察２.涂抹法采集、制備、染色、觀察20３.壓拉涂片法采集、制備、染色、觀察３.壓拉涂片法采集、制備、染色、觀察21４.離心法和細(xì)胞離心法離心法：大量液體標(biāo)本，如漿膜腔積液、尿液、灌洗液。細(xì)胞離心法：將細(xì)胞直接離心到載玻片上，制成單層細(xì)胞涂片。適用于少量液體、中等量細(xì)胞。采集、制備、染色、觀察４.離心法和細(xì)胞離心法離心法：大量液體標(biāo)本，如漿膜腔積液、尿22５.液基細(xì)胞學(xué)

（1）薄層法ThinPrep采集、制備、染色、觀察５.液基細(xì)胞學(xué)

（1）薄層法ThinPrep采集、制備、染色23宮頸病變好發(fā)部位宮頸病變好發(fā)部位24細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)ppt課件25細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)ppt課件26細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)ppt課件27(2)SurePathPrep法標(biāo)本乙醇固定

懸浮于密度梯度溶液中渦旋法使聚集的細(xì)胞團(tuán)和粘液分開(kāi)

密度梯度離心法使細(xì)胞成分和非上皮細(xì)胞成分分開(kāi)細(xì)胞在重力作用下沉淀到載玻片上(2)SurePathPrep法28傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)狀況傳統(tǒng)的制備方法（一般是涂抹法）標(biāo)本質(zhì)量不一致細(xì)胞分布不均雜質(zhì)成分阻礙視線一個(gè)樣本需涂多張涂片傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)狀況傳統(tǒng)的制備方法（一般是涂抹法）29標(biāo)準(zhǔn)化的細(xì)胞學(xué)技術(shù)液基細(xì)胞學(xué)卓越的標(biāo)本質(zhì)量清晰的背景標(biāo)準(zhǔn)化的標(biāo)本制備過(guò)程均勻的細(xì)胞分布一個(gè)樣本只需一張具有代表性的標(biāo)本剩余樣本可進(jìn)行其它多種測(cè)試（免疫組化等）提高細(xì)胞學(xué)測(cè)試的敏感性和特異性標(biāo)準(zhǔn)化的細(xì)胞學(xué)技術(shù)液基細(xì)胞學(xué)提高細(xì)胞學(xué)測(cè)試的敏感性和特異性30痰低分化鱗癌

改善背景細(xì)胞清晰度TCTTCT痰低分化鱗癌TCTTCT316.細(xì)胞塊法將標(biāo)本中的細(xì)胞聚集成團(tuán)，形成與傳統(tǒng)組織塊類似的細(xì)胞塊，制成細(xì)胞切片，然后可以進(jìn)行特殊染色。6.細(xì)胞塊法將標(biāo)本中的細(xì)胞聚集成團(tuán)，形成與傳統(tǒng)組織塊類似的細(xì)32三.涂片的固定※目的：是保持細(xì)胞的自然狀態(tài)，防止細(xì)胞自溶和細(xì)菌導(dǎo)致的腐敗。固定液能凝固和沉淀細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和破壞細(xì)胞內(nèi)的溶酶體酶，保持細(xì)胞自然狀態(tài)，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，易于著色。因此標(biāo)本愈新鮮，固定愈及時(shí)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)愈清晰，染色效果愈好。采集、制備、染色、觀察三.涂片的固定※目的：采集、制備、染色、觀察33固定不及時(shí)的腺癌細(xì)胞固定及時(shí)的腺癌細(xì)胞固定不及時(shí)的腺癌細(xì)胞固定及時(shí)的腺癌細(xì)胞34固定方法：濕固定：是使細(xì)胞的原生質(zhì)脫水、蛋白質(zhì)凝固達(dá)到固定的目的?？梢鸺?xì)胞皺縮。

干燥固定：是通過(guò)空氣蒸發(fā)的方式達(dá)到固定目的。細(xì)胞有增大的趨勢(shì)。固定方法：35固定方法的比較A未固定細(xì)胞B平鋪在玻片上C濕固定D干固定固定方法的比較A未固定細(xì)胞36固定液種類：乙醚乙醇固定液；氯仿乙醇固定液；95%乙醇固定液。固定時(shí)間：15－30分鐘固定液種類：乙醚乙醇固定液；37四.常用染色方法巴氏染色法（papanicolaoustain）（濕固定）蘇木素-伊紅（H-E）染色法瑞氏-吉姆薩染色法采集、制備、染色、觀察四.常用染色方法巴氏染色法（papanicolaousta38巴氏染色法（Pap)巴氏染色法（Pap)39巴氏染色的來(lái)歷

Papanicolaou(帕帕尼古拉烏)子宮頸抹片這個(gè)檢驗(yàn)是Papanicolaou醫(yī)生在公元1928年在美國(guó)首度提出。因?yàn)楹?jiǎn)便易行，而且可以早期發(fā)現(xiàn)子宮頸癌或不正常細(xì)胞以便早期治療，而后風(fēng)行全世界，成為一個(gè)婦科不可或缺的重要例行檢查。為了紀(jì)念這位醫(yī)師的貢獻(xiàn)，在國(guó)際上這個(gè)檢查就叫作Paptest或者Papsmear。

巴氏染色的來(lái)歷Papanicolaou(帕40Papanicolaou醫(yī)生1883年生于希臘。他的父親也是一位醫(yī)生，曾經(jīng)當(dāng)過(guò)Kymi市的市長(zhǎng)。他21歲時(shí)完成醫(yī)學(xué)教育，到德國(guó)留學(xué)研究生殖細(xì)胞學(xué)，1913年移民美國(guó)。他最初研究天竺鼠陰道分泌物內(nèi)的細(xì)胞周期變化。以后用相似的方法去研究婦女陰道內(nèi)分泌物及細(xì)胞的變化。據(jù)說(shuō)全世界第一個(gè)Paptest就是用在她的妻子身上。Papanicolaou醫(yī)生1883年生于希臘。他的父41于1925年在紐約以一群自愿的婦女做研究時(shí)，在一個(gè)婦女的子宮頸抹片上偶然發(fā)現(xiàn)一些癌細(xì)胞。這個(gè)發(fā)現(xiàn)使他異常振奮，而后經(jīng)一系列研究后，于1928年發(fā)表一個(gè)學(xué)術(shù)演講：陰道內(nèi)的細(xì)胞可以用來(lái)早期診斷婦女的癌癥。于1925年在紐約以一群自愿的婦女做研究時(shí)，在一個(gè)婦女的42Papanicolaou醫(yī)生因心臟病病逝于1962年。他的妻子Mary，也是一位偉大的、自我犧牲的婦人，她是Papanicolaou醫(yī)生第一個(gè)Paptest的婦人，她曾經(jīng)作過(guò)他的細(xì)胞檢查員，幫忙訓(xùn)練許多技術(shù)人員。以后20年時(shí)間，Papanicolaou醫(yī)生基本上以她作定期的陰道細(xì)胞檢查，而后完成一本婦人周期性陰道細(xì)胞變化的著作。每次Papanicolaou醫(yī)生介紹他的妻子時(shí)，總是說(shuō)：這是我的太太也是我的受害者?？傊?，一個(gè)成功的男人背后，常常會(huì)有一個(gè)偉大無(wú)私的女人。Papanicolaou醫(yī)生因心臟病病逝于1962年。43細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)ppt課件44蘇木素-伊紅（H-E）染色法蘇木素-伊紅（H-E）染色法45瑞氏-吉姆薩染色法瑞氏-吉姆薩染色法46其它特殊染色組織細(xì)胞化學(xué)染色：過(guò)碘酸Schiff染色（PAS糖原）、三色染色、普魯氏藍(lán)染色等。免疫細(xì)胞染色：識(shí)別細(xì)胞類型、來(lái)源等。識(shí)別微生物的染色：Gram染色，PAS，六胺銀，Ziehl-Neelsen染色（抗酸染色）等。其它特殊染色組織細(xì)胞化學(xué)染色：過(guò)碘酸Schiff染色（PAS47胸水細(xì)胞塊免疫組化染色BerEp4染色胸水細(xì)胞塊免疫組化染色BerEp4染色48五.顯微鏡觀察方法○○視野采集、制備、染色、觀察五.顯微鏡觀察方法○○視野采集、制備、染色、觀察49用10倍物鏡進(jìn)行瀏覽用10倍物鏡進(jìn)行瀏覽50發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞后，用40倍觀察發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞后，用40倍觀察51六.細(xì)胞病理學(xué)診斷細(xì)胞形態(tài)學(xué)判斷的基本原則1細(xì)胞數(shù)量2細(xì)胞排列的結(jié)構(gòu)特征3細(xì)胞核的特征4細(xì)胞質(zhì)的特征5背景6人為因素六.細(xì)胞病理學(xué)診斷細(xì)胞形態(tài)學(xué)判斷的基本原則52１.細(xì)胞數(shù)量多－增殖指數(shù)增加（腫瘤或增生）少－荒涼，注意觀察１.細(xì)胞數(shù)量多－增殖指數(shù)增加（腫瘤或增生）530926164,女，65歲，臨床診斷：胸水

既往史：骨髓瘤細(xì)胞量多0926164,女，65歲，臨床診斷：胸水

既往史：骨髓瘤細(xì)54宮頸TCT涂片細(xì)胞量正常細(xì)胞量少宮頸TCT涂片細(xì)胞量正常552.細(xì)胞結(jié)構(gòu)特征涂片中的細(xì)胞常常缺乏結(jié)構(gòu)特征

正常細(xì)胞－有極向、平鋪惡性細(xì)胞－重疊：異常粘附性、異常聚集性。2.細(xì)胞結(jié)構(gòu)特征56宮頸涂片中正常的宮頸柱上皮

宮頸涂片中正常的宮頸柱上皮

57腺癌C0924833，女，65歲，腹水腺癌C0924833，女，65歲，腹水583.細(xì)胞核特征

良性－大小一致，核質(zhì)細(xì)，核膜光。惡性－大小不一，核質(zhì)粗，核膜厚。3.細(xì)胞核特征

良性－大小一致，核質(zhì)細(xì)，核膜59宮頸TCT涂片正常高度病變宮頸TCT涂片正常60胸水涂片腺癌胸水涂片腺癌614.細(xì)胞質(zhì)的特征核質(zhì)比增加嗜堿、粘液、空泡、吞噬4.細(xì)胞質(zhì)的特征核質(zhì)比增加62胞漿內(nèi)粘液胞漿內(nèi)粘液635.涂片背景：包括細(xì)胞成分和非細(xì)胞成分（血、粘液、炎癥、微生物）惡性－壞死背景（腫瘤素質(zhì)）6.人為因素：制片不佳；污染。5.涂片背景：64七細(xì)胞學(xué)診斷的質(zhì)量保證標(biāo)本采集：塵細(xì)胞，宮頸細(xì)胞數(shù)量制片過(guò)程：離心，固定，染色閱片診斷：全面，結(jié)合臨床及組織學(xué)不斷理論學(xué)習(xí)復(fù)查會(huì)診（IQAM,EQAM.P274）定期隨訪：金標(biāo)準(zhǔn)七細(xì)胞學(xué)診斷的質(zhì)量保證標(biāo)本采集：塵細(xì)胞，宮頸細(xì)胞數(shù)量65痰中的塵細(xì)胞痰中的塵細(xì)胞66宮頸涂片上的柱上皮宮頸涂片上的柱上皮67細(xì)胞病理學(xué)診斷的優(yōu)勢(shì)安全簡(jiǎn)便，痛苦少，不良反應(yīng)少，可重復(fù)取材，設(shè)備要求低，費(fèi)用廉。快速準(zhǔn)確，檢出率約60%，適合大規(guī)模防癌普查及高危人群的隨訪觀察，可發(fā)現(xiàn)早期癌和原位癌。檢查范圍大細(xì)胞病理學(xué)診斷的優(yōu)勢(shì)安全簡(jiǎn)便，痛苦少，不良反應(yīng)少，可重復(fù)取材68病例舉例12007年3月檢查病理號(hào)200704767女，51歲臨床診斷：宮頸炎宮頸TCT：細(xì)胞量＜5000，診斷:ASC-H病例舉例12007年3月檢查692007年8月活檢病理號(hào)200719604：ABCDE共5點(diǎn)活檢病理診斷：慢性宮頸炎2007年8月活檢702009年9月復(fù)查細(xì)胞號(hào)0926170診斷:上皮內(nèi)高度病變2009年9月復(fù)查712009年9月手術(shù)病理診斷：宮頸CINⅢ累及腺體2009年9月手術(shù)72病例舉例2TCT診斷：高度病變病理活檢：慢性宮頸炎半年后：病理活檢：宮頸鱗狀細(xì)胞癌病例舉例2TCT診斷：高度病變73脫落細(xì)胞學(xué)診斷的不足有一定的誤診率：細(xì)針吸取可有10%假陰性，痰細(xì)胞學(xué)檢查可有20%假陰性，少數(shù)出現(xiàn)假陽(yáng)性。具體部位難確定腫瘤分型困難非腫瘤性疾病診斷研究少細(xì)胞學(xué)診斷為二級(jí)診斷，需經(jīng)活檢組織學(xué)證實(shí)后，方可進(jìn)行治療。脫落細(xì)胞學(xué)診斷的不足有一定的誤診率：細(xì)針吸取可有10%假陰性74細(xì)胞病理學(xué)診斷是一