培養(yǎng)基的制備

培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備一、 目的要求掌握一般培養(yǎng)基制備的原則和要求。熟悉一般培養(yǎng)基制備的過程。二、 實(shí)驗(yàn)器材藥品或試劑：1mol/LNaOH,1mol/LHCl;蛋白腺0.2、牛肉膏0.6、瓊脂，氯化鈉1,蒸餾水200。儀器或其他用具：試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻璃棒，培養(yǎng)基分裝器，天平，藥匙，高壓蒸氣滅菌鍋，pH測(cè)定儀或pH試紙(pH5.5?9.0)，棉花，濾紙，記號(hào)筆，麻繩，紗布等。實(shí)驗(yàn)方法：1稱量：準(zhǔn)確稱量所需藥品或試劑2溶解：將以上成分加溫溶于蒸餾水中3調(diào)節(jié)PH:用酸度計(jì)測(cè)定溶液PH并用1mol/LNaOH,1mol/LHCl調(diào)節(jié)PH7.4?7.64過濾：用濾紙過濾后取出50ML進(jìn)行封裝，每支試管裝入5ML5加塞：塞好棉塞用紙包好，準(zhǔn)備滅菌6滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，高壓蒸汽滅菌，一般采用15磅/平方(即1.05kg/cm2)壓力，此時(shí)的溫度是121.3°C。滅菌20?30分鐘后。7無菌檢驗(yàn)：將滅菌的培養(yǎng)基放入37C的恒溫箱中培養(yǎng)24?48h,以檢查滅菌是否徹底。二)普通瓊脂培養(yǎng)基1將以上過濾封裝后剩余的溶液加瓊脂溶解，補(bǔ)足水分2分裝于中三角瓶中。3加塞4高壓滅菌20?30分鐘后，制平板。5無菌檢驗(yàn)將滅菌的培養(yǎng)基放入371的恒溫箱中培養(yǎng)24?48h，以檢查滅菌是否徹底。保存?zhèn)溆?。思考題培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意些什么問題？管口、瓶口為什么要用棉塞？能否用橡皮塞代替？為什么？實(shí)驗(yàn)三理化因素對(duì)微生物的影響一、 目的要求掌握對(duì)微生物影響的因素熟悉溫度、紫外線對(duì)微生物的影響二、 實(shí)驗(yàn)器材普通肉湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基大腸桿菌、金黃色葡萄球菌儀器或其他用具：超凈工作臺(tái)，培養(yǎng)箱、接種環(huán)，鑷子，酒精燈、吸管、試管，記號(hào)筆等。三、 方法紫外線殺菌試驗(yàn)用接種環(huán)沾取大腸桿菌在瓊脂平板培養(yǎng)基表面來回密密涂滿整個(gè)平板。打開平板蓋，蓋上中空紙片，使其半暴露于紫外線燈下20-30cm處，照射30分鐘，取出紙片，蓋上蓋，置37^溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h,觀察平板表面細(xì)菌生長(zhǎng)的情況。溫度試驗(yàn)用接種環(huán)沾取大腸桿菌分別接種于4支裝有普通肉湯培養(yǎng)基的試管中，1支作為對(duì)照，1支不接入任何菌也作為對(duì)照，其余3支置于80^水浴鍋中，分別放置5分、10分、20分鐘，取出后，置37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)的情況。實(shí)驗(yàn)四自然界中微生物的分布一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼J(rèn)識(shí)微生物在自然界存在的普遍性了解細(xì)菌在自然界和人體的分布情況二、 實(shí)驗(yàn)器材普通瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)箱，接種環(huán)，鑷子，酒精燈、吸管、試管，記號(hào)筆等。三、方法1、 空氣中細(xì)菌的檢查（采用沉降法）取無菌普通平板1只，置一處，啟蓋10分，再蓋上蓋,"C培養(yǎng)24h，取出觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)。2、 咽喉部細(xì)菌檢查用無菌方法，向普通平板里吹氣2-3次，371培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)。3、 皮膚表面細(xì)菌的檢查（采用涂抹法）在普通培養(yǎng)基上分區(qū)后，直接用手指在無菌平板表面輕輕涂按1處，之后用自來水洗手指在平板表面2處輕輕涂按，371培養(yǎng)24h后，取出觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)五細(xì)菌分離技術(shù)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆瘴⑸锏姆蛛x與接種技術(shù)學(xué)會(huì)用平板劃線法分離微生物二、 實(shí)驗(yàn)器材樣品；MRS分離培養(yǎng)基;乳酸菌，大腸桿菌培養(yǎng)箱，搖床0.9%，接種環(huán)，記號(hào)筆，酒精燈，試管架，無菌生理鹽水等五、實(shí)驗(yàn)步驟采樣:無菌采集樣品，要有針對(duì)性分離：用乳酸菌分離培養(yǎng)基（MRS）采用劃線法進(jìn)行培養(yǎng)：平板倒置于37°C培養(yǎng)箱24h?48h，觀察菌落特征制備純培養(yǎng)：將培養(yǎng)后單個(gè)菌落釣出，劃線與平板上，37C培養(yǎng)48小時(shí)檢查菌落是否單純，也可用顯微鏡檢查是否是純的微生物2）釋液傾注平皿稱取樣1.0g，放入盛99mL無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩使樣品均勻分散成為懸液（10-2）。用1mL的無菌吸頭從中吸取0.5ml樣品懸液，注入分裝有4.5ml無菌水的試管中，吹吸3次，振蕩均勻(10-3)。同樣方法，配置成稀釋度為10-4，10-5，10-6的樣品溶液，各樣取ImL加在平皿中，傾注培養(yǎng)基.(3)涂布用一支新的無菌吸頭，分別由各濃度樣品稀釋液中各吸取100ul,對(duì)號(hào)較均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板上，用無菌玻璃涂棒涂勻。每個(gè)濃度做2個(gè)平板4.制備純培養(yǎng)：將培養(yǎng)后單個(gè)菌落釣出，劃線與平板上，371培養(yǎng)48小時(shí)檢查菌落是否單純，也可用顯微鏡檢查是否是純的微生物細(xì)菌的生理生化反應(yīng)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饧?xì)菌生理生化反應(yīng)原理掌握細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)的測(cè)定方法二、 實(shí)驗(yàn)器材37°C恒溫培養(yǎng)箱、接種環(huán)、酒精燈、試管架、記號(hào)筆等待測(cè)菌甲基紅試劑、V.P試劑、吲噪試劑。培養(yǎng)基：糖發(fā)酵培養(yǎng)基，用于糖類發(fā)酵試驗(yàn)葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，用于甲基紅和V.P試驗(yàn)蛋白胨水培養(yǎng)基，用于吲噪試驗(yàn)檸檬酸鐵銨或醋酸鉛的半固體培養(yǎng)基，用于硫化氫試驗(yàn)檸檬酸鈉培養(yǎng)基，用于檸檬酸鹽利用試驗(yàn)三、 實(shí)驗(yàn)方法方法(1)編號(hào)在各試管上分別標(biāo)明各種糖名稱，所接種的菌名和組號(hào)，下同。(2)接種（3）培養(yǎng)將已接種好的培養(yǎng)基置"C溫箱中培養(yǎng)24h。（4）觀察結(jié)果2甲基紅（Methylred）試驗(yàn)（簡(jiǎn)稱MR試驗(yàn)）某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再被分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基的pH降低到4.2以下，這時(shí)若加甲基紅指示劑呈現(xiàn)紅色。因甲基紅指示劑變色范圍是pH4.4（紅色）?pH6.2（黃色）方法將待檢菌分別接種到葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，371培養(yǎng)48h,加甲基紅指示劑數(shù)滴，觀察結(jié)果，呈現(xiàn)紅色者為陽性，呈現(xiàn)黃色者為陰性3伏一普二氏試驗(yàn)（V.P.試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌分解葡萄糖為丙酮酸，丙酮酸再被分解，變?yōu)橐阴＜谆状?；乙酰甲基甲醇，其在堿性條件下氧化成為二乙酰，二乙酰和蛋白胨中精氨酸胍基起作用產(chǎn)生粉紅色的化合物，此為VP試驗(yàn)4靛基質(zhì)（吲噪）試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌能分解蛋白質(zhì)中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)（吲噪），靛基質(zhì)與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成玫瑰色靛基質(zhì)（紅色化合物）方法：將被檢菌接種到胰蛋白胨水培養(yǎng)基中，371培養(yǎng)24h?48h后，沿試管壁滴加數(shù)滴吲噪試劑于培養(yǎng)物液面，觀察結(jié)果結(jié)果：出現(xiàn)紅色者為陽性出現(xiàn)黃色者為陰性。硫化氫試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），產(chǎn)生硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽，形成黑色沉淀硫化鉛或硫化鐵，為硫化氫試驗(yàn)陽性，可借以鑒別細(xì)菌方