常用的菌種保藏方法 課件

常用的菌種保藏方法主講教師：李蒙123斜面低溫保藏法液體石蠟保藏法沙土保藏法目錄CONTENTS4冷凍干燥保藏法5液氮冷凍保藏法Part01斜面低溫保藏法特點(diǎn)：傳代+低溫保存適用范圍：適合大多數(shù)微生物短期保存，如細(xì)菌、放線(xiàn)菌、酵母菌和霉菌等（實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用）保藏期：1-6個(gè)月（短期）放線(xiàn)菌、霉菌和有芽孢的細(xì)菌一般可保存6個(gè)月左右，無(wú)芽孢的細(xì)菌可保存1個(gè)月左右，酵母菌可保存3個(gè)月左右。1斜面低溫保藏法操作：將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上；放置于合適溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間，等待菌充分生長(zhǎng)，此階段不可太久，否則菌種易衰退；培養(yǎng)到菌體或孢子生長(zhǎng)豐滿(mǎn)后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2-8℃的冰箱中保藏；每間隔一段時(shí)間應(yīng)重新移植、培養(yǎng)一次，如此不斷更新。在一般情況下，各種微生物移植一次的時(shí)間依微生物的種類(lèi)而有不同：無(wú)芽孢細(xì)菌1～2個(gè)月，芽孢菌、放線(xiàn)菌、擔(dān)子菌3～6個(gè)月，酵母菌4～6個(gè)月，絲狀真菌4～8個(gè)月1斜面低溫保藏法優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，使用方便，不需特殊設(shè)備，能隨時(shí)接種和及時(shí)觀察菌種是否死亡或被污染等情況缺點(diǎn)：培養(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的，屢次傳代會(huì)使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀、導(dǎo)致變異或退化；污染雜菌機(jī)會(huì)增加；保藏時(shí)間短；人力、物力的花費(fèi)較大等。1斜面低溫保藏法Part02液體石蠟保藏法特點(diǎn)：石蠟油隔絕空氣適用范圍：各種微生物短期保藏（不適用于某些能夠分解烴類(lèi)的細(xì)菌）保藏期：1-2年液體石蠟具有隔絕空氣、防止水分揮發(fā)的作用，因此保藏期比斜面保藏法的效果好。較適合好氧微生物的保藏，如酵母菌、霉菌可保藏2年以上。2液體石蠟保藏法2液體石蠟保藏法操作：將液體石蠟分裝于三角燒瓶?jī)?nèi)，塞上棉塞，用牛皮紙包扎121.3℃滅菌30分鐘，然后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體或孢子用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長(zhǎng)好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時(shí)間還要長(zhǎng)）2液體石蠟保藏法優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：制作簡(jiǎn)單，不需特殊設(shè)備，且不需要經(jīng)常移種傳代缺點(diǎn)：保存時(shí)必須直立放置，所占位置較大，同時(shí)也不便攜帶；從液體石蠟下面取培養(yǎng)物移種后，接種環(huán)在火焰上燒灼時(shí)，培養(yǎng)物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺Part03沙土保藏法特點(diǎn)：沙土載體+干燥適用范圍：能產(chǎn)生孢子或芽孢的微生物如霉菌、放線(xiàn)菌（因此多用于抗生素工業(yè)生產(chǎn)中）保藏期：1-2年左右但應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞效果不佳3沙土保藏法3沙土保藏法操作：將沙與土酸洗后用自來(lái)水洗滌至中性烘干碾碎過(guò)篩，一般沙用80目過(guò)篩，土用30－100目過(guò)篩按沙與土的比例為1-2：1混合均勻，分裝于小試管中，裝料高度約為1厘米左右121°C間歇滅菌三次，滅菌試驗(yàn)合格后烘干備用。將斜面孢子制成孢子懸浮液接入沙土管中或?qū)⑿泵骀咦庸蜗轮苯优c沙土混合干燥器中用真空泵抽干，放在冰箱內(nèi)保存。3沙土保藏法優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：材料簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便，不需特殊設(shè)備，能隨時(shí)接種和及時(shí)觀察菌種是否死亡或被污染等情況缺點(diǎn)：適用范圍有限，只適宜于形成孢子和芽孢的菌種，不適用只有菌絲的真菌和無(wú)芽孢的細(xì)菌保存Part04冷凍干燥保藏法特點(diǎn)：低溫+無(wú)氧+干燥適用范圍：除了絲狀微生物的菌絲體不適宜于本法外，其它大多數(shù)微生物均可采用此法進(jìn)行菌種保藏保藏期：5-15年4冷凍干燥保藏法4冷凍干燥保藏法操作：微生物細(xì)胞與保護(hù)劑混合制成懸液，注入安瓿管中用低溫酒精或干冰，使其迅速凍結(jié)在冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行低溫減壓干燥，待水升華后制成固體菌塊（或菌粉）在真空條件下進(jìn)行熔封，置于低溫冰箱中保藏；保護(hù)劑一般采用脫脂牛奶或血清。保護(hù)劑的作用可能是在冷凍干燥的脫水過(guò)程中代替結(jié)合水而穩(wěn)定細(xì)胞成分（細(xì)胞膜）的構(gòu)型，防此細(xì)胞膜因?yàn)閮鼋Y(jié)而破壞。保護(hù)劑還可以起支持作用，使微生物疏松地固定在上面。4冷凍干燥保藏法優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：保存時(shí)間長(zhǎng)、適用范圍較廣缺點(diǎn)：需要專(zhuān)業(yè)設(shè)備、成本較高Part05液氮冷凍保藏法特點(diǎn)：超低溫適用范圍：適用于幾乎所有微生物保藏期：超過(guò)10年5液氮冷凍保藏法5液氮冷凍保藏法操作：將菌種與保護(hù)劑一起制備成濃度大于108個(gè)/mL的菌懸液或孢子懸液分裝于凍存管中，置于冰水浴中降溫到0℃左右使用程序降溫儀以1~2℃/min的速度降溫至-35℃左右迅速把凍存管置于液