煙草基因型對煙氣中sod,gsh-px和mda的影響

煙草基因型對煙氣中sod,gsh-px和mda的影響

中國的卷煙生產(chǎn)和消費是世界上最重要的。有研究表明,吸煙與慢性阻塞性肺疾病、心血管疾病、肺癌等存在密切的相關(guān)性本研究采用體外細(xì)菌誘變分析(Ames試驗)和大鼠亞慢性毒性試驗,初步分析了新型煙草的毒理學(xué)效應(yīng),旨在為指導(dǎo)煙草品種的遺傳改良提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗CS-1為我國煙草栽培品種,CS-2為山西農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草育種室培育的新型煙草品種,這2種測試所用的單料煙,均由山西昆明煙草有限責(zé)任公司卷制;鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型標(biāo)準(zhǔn)菌株TA97,TA98,TA100和TA102,均由中國檢驗檢疫研究院提供。健康、清潔級SD大鼠(雄性,6周齡,體質(zhì)量約180g),購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實驗中心。1.2試劑SOD,GSH-Px和MDA檢測試劑盒,購自南京建成生物工程研究所。1.3多功能酶標(biāo)儀;高速冷凍離心檢驗光學(xué)顯微鏡(OlympusBX51,日本);石蠟切片機(LeicaRM2255,德國);多功能酶標(biāo)儀(SpectraMaxM5,美國);高速冷凍離心機(KDC-140HR,安徽中科中佳);高速勻漿機(S10,寧波新芝)等。1.4方法參考GB15193.4—2003《鼠傷寒沙氏菌門/哺乳動物微粒體酶試驗》其制備參照ISO標(biāo)準(zhǔn)1.4.1.肝組織勻漿s的制備多氯聯(lián)苯溶于玉米油中,大鼠腹腔注射(劑量為500mg/kg),5d后頸椎脫臼處死。在無菌超凈工作臺內(nèi),解剖取出肝臟,去除肝臟周圍的結(jié)締組織,用冰冷的0.15mol/LKCl溶液清洗,稱質(zhì)量,用電動勻漿器將其制成肝組織勻漿,4℃,9000r/min離心10min,吸出上清液即為S依據(jù)GB15193.4—2003CSE設(shè)5個劑量組(分別稀釋0,2,4,8,16倍),另外設(shè)置酒精和無菌水混合液為陰性對照(V∶V=1∶1),敵克松和2-氨基芴為陽性對照。在添加代謝活化物(+S1.4.2亞慢性毒性試驗參考Zeng等按照試劑盒說明書進行SOD,GSH-Px和MDA含量測定。1.5均值標(biāo)準(zhǔn)差表示采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析處理,所有數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用One-wayANOVA進行單因素方差分析和差異顯著性檢驗,P<0.05為差異顯著。2結(jié)果與分析2.1生物學(xué)特征的測定試驗菌株生物學(xué)特性鑒定結(jié)果表明,各菌株均符合生物學(xué)特性的要求。2.2同時，由于平板攝入試驗的再現(xiàn)突變結(jié)果采用平板摻入法分別檢測2種CSE對鼠傷寒沙門氏菌TA97,TA98,TA100和TA102菌株在-S2.3農(nóng)機病理改變病理觀察結(jié)果顯示,對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常,肺組織中無明顯炎癥細(xì)胞浸潤;小支氣管壁結(jié)構(gòu)完整且無增厚現(xiàn)象(圖2-A)。試驗大鼠煙熏暴露14d后呈現(xiàn)出病理改變,支氣管壁周圍及肺間質(zhì)間有炎癥細(xì)胞浸潤(圖2-B,E)。煙氣暴露時間延長至28d后,炎癥細(xì)胞聚集、浸潤愈加嚴(yán)重,肺泡腔不規(guī)則擴大,部分肺泡間隔斷裂,但支氣管管壁無明顯變化(圖2-C,F)。煙熏56d后,肺泡結(jié)構(gòu)紊亂,肺泡間隔斷裂愈加嚴(yán)重,形成較大的囊腔。支氣管管壁黏膜皺壁增多并突入管腔內(nèi),導(dǎo)致官腔狹窄。CS-1組肺泡腔擴大損傷程度明顯比CS-2組嚴(yán)重(圖2-D,G)。2.4不同煙氣暴露對大鼠sod,gsh-px活力的影響從圖3可以看出,煙氣暴露56d后,CS-1組SOD活性顯著低于對照組,而CS-1和CS-2組的GSH-Px活力均顯著高于對照組(P<0.05);但試驗組CS-1與CS-2組的SOD,GSH-Px活力差異均不顯著(P>0.05)。煙氣暴露28d后,試驗組大鼠血清中的MDA含量,隨著煙氣暴露時間的延長均顯著高于對照組(P<0.05)。煙氣暴露56d后,CS-1組的MDA含量較CS-2組提高了14.5%,表明CS-1組大鼠脂質(zhì)損傷程度比CS-2組嚴(yán)重。3吸煙和自由基有研究顯示,香煙煙霧含多種誘變劑和致癌劑,吸煙與人類30%的腫瘤發(fā)生密切相關(guān)有研究表明,香煙煙霧中富含自由基,每噴出的一口煙霧中大約含101.4.1測試方法ase1.4.1.1.香煙煙霧提取物cse的制備1.4.1.3.真菌生物學(xué)特性的測定1.4.1.4采用平板混合法[12]進行檢測1.4.2.1.香煙暴露1.4.2.組織病理學(xué)觀察收集肺組織,用預(yù)冷的0.9%生理鹽水清