中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座

第二章中藥制劑判別

藥品分析教研室中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第1頁第二章中藥制劑判別

1、概念：

中藥制劑判別是利用一定方法來確定中藥制劑中原料藥組成，從而判斷該制劑真?zhèn)巍?/p>

中藥制劑判別主要內(nèi)容包含性狀判別、顯微判別、理化判別等方面，有時(shí)在性狀判別中還應(yīng)作對應(yīng)物理常數(shù)測定。本章重點(diǎn)敘述顯微判別和理化判別。

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第2頁第一節(jié)性狀判別中藥制劑性狀是指除去包裝后性狀。中藥制劑性狀判別包含大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、氣味等方面。

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第3頁

性狀判別內(nèi)容及描述方法:一、性狀判別內(nèi)容：顏色：從單一色到組合色不等，如紅色、深褐色，黃棕色等。形態(tài)：如液體可分黏稠液體、液體、澄清液體、澄明液體等。形狀：如栓劑可分為球形、魚雷形、圓錐形、卵形、鴨嘴形等。氣：可分為香、芳香、清香、腥、臭、特異、氣微、芳香濃郁等。味：可分為甜、酸、苦、澀、辛、涼、咸、辣、麻等。其它：光澤感、滑膩感等。第一節(jié)性狀判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第4頁第一節(jié)性狀判別二、各種劑型性狀描述

在中藥制劑不一樣劑型，其性狀描述不一定相同。但在描述制劑性狀特征時(shí)，應(yīng)以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)。比如：水丸六味地黃丸：本品為灰棕色至黃棕色水丸；氣香，味微甜、苦。牛黃解毒片：本品為素片或包衣片，素片或除去包衣后片芯顯棕黃色；有冰片香氣，味微苦、辛。糖漿劑急支糖漿：本品為棕紅色粘稠液體；氣香，味甜、微苦、涼。

難點(diǎn)提醒：中藥制劑性狀判別描述應(yīng)注意以傳統(tǒng)中醫(yī)藥術(shù)語來描述。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第5頁三、物理常數(shù)測定一些中藥制劑，還測定一些物理常數(shù)（如折光率、旋光度、比旋度、凝點(diǎn)、熔點(diǎn)、相對密度等）。測定這些物理常數(shù)能夠作為定性判別一個(gè)伎倆。第一節(jié)性狀判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第6頁第二節(jié)顯微判別

中藥制劑顯微判別:利用顯微鏡來觀察中藥制劑中原藥材組織碎片、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征，從而判別制劑處方組成。凡以藥材粉碎成細(xì)粉后直接制成制劑或添加有部分藥材粉末制劑，因?yàn)槠湓谥谱鬟^程中原藥材顯微特征仍保留到制劑中去，所以均可用顯微定性判別法進(jìn)行判別。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第7頁第二節(jié)顯微判別

特點(diǎn)及制片方法：特點(diǎn)：中藥制劑普通多由二味以上中藥材制備而成，制劑中各原藥材和輔料顯微特征會產(chǎn)生相互影響或干擾。因?yàn)橹苽涔に嚥灰粯?，有些藥材本身原有組織結(jié)構(gòu)特征已不存在。在選擇制劑顯微判別指標(biāo)時(shí)，要對處方中各藥味逐一分析比較，考慮選取能相互區(qū)分，互不干擾，能表明該藥味存在顯微特征作為判別依據(jù)。如：“蛇膽川貝散”中，川貝母僅用淀粉粒作為指標(biāo)?！芭｜S解毒片”中大黃用草酸鈣簇晶作為判別特征。黃芩、甘草、桔梗系經(jīng)過水煎、過濾、濃縮至稠膏投料，因?yàn)樗鼈冿@微特征已不存在，故藥典沒有要求它們顯微特征作為該制劑判別特征。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第8頁制片方法：中藥制劑與中藥材粉末相比較在顯微判別時(shí)，制片方法也不盡相同。為了便于顯微觀察，制劑必須按不一樣劑型經(jīng)過適當(dāng)預(yù)處理，然后按藥材粉末方法裝片進(jìn)行觀察。散劑、膠囊劑：取粉末少許，選取適當(dāng)試液處理后直接進(jìn)行顯微觀察。片劑：切開，刮取少許樣品，觀察；粉末及粗則先研細(xì)；糖衣片除去糖衣再研細(xì)。水丸、顆粒劑：于乳缽內(nèi)研成粉末后觀察。蜜丸：可取1丸從正中切開后，刮取少許樣品進(jìn)行觀察第二節(jié)顯微判別

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第9頁

但因?yàn)榉涿壅辰Y(jié)藥材粉末細(xì)胞和組織，難于觀察，故普通可采取下面幾個(gè)方法使粘結(jié)組織解離后再進(jìn)行觀察：氫氧化鉀法：取蜜丸切開后，取適量于試管中，加5％氫氧化鉀溶液適量，加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去堿液，加水洗滌后，取出少許置載玻片上，用解剖針?biāo)洪_，再加適當(dāng)試液處理后觀察。硝鉻酸法：取適量樣品于試管中，加硝鉻酸試液適量，放置，至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照1法裝置。氯酸鉀法：取適量樣品于試管中，加硝酸溶液（1→2）及氯酸鉀少許，緩緩加熱，待產(chǎn)生氣泡漸少時(shí)，再及時(shí)加氯酸鉀少許，以維持氣泡穩(wěn)定地發(fā)生，至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照1法操作裝置。水溶法：把蜜丸切碎后，加水?dāng)嚢?、洗滌后，放置在離心管中離心分離沉淀，經(jīng)過屢次重復(fù)處理把蜂蜜除盡后再裝片觀察。第二節(jié)顯微判別

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第10頁第二節(jié)顯微判別

難點(diǎn)提醒：在本法判別中，只有藥材原有組織結(jié)構(gòu)特征能保留到制劑中，才有意義。故普通全部由溶劑提取制劑，不用此法進(jìn)行判別。不一樣劑型其制片方法不一樣。應(yīng)選擇在該制劑中沒有干擾又能表明該味藥存在顯微特征作為判別依據(jù)。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第11頁第三節(jié)理化判別

概念：中藥制劑理化判別：利用物理、化學(xué)或物理化學(xué)方法對制劑中所含化學(xué)成份進(jìn)行定性判別，從而判斷制劑真?zhèn)?。中藥制劑理化定性判別方法：有普通化學(xué)反應(yīng)法、升華法、光譜法和色譜法等。其中以薄層色譜法最慣用。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第12頁一、化學(xué)反應(yīng)法：樣品提?。?、以50%-70%乙醇回流提?。禾崛〕龆鄶?shù)化學(xué)成份；2、以酸性乙醇回流提?。簷z驗(yàn)酚類、有機(jī)酸、生物堿等；3、以水提取：①室溫浸泡：檢驗(yàn)氨基酸、蛋白質(zhì)。②60℃熱水提?。簷z驗(yàn)單糖、多糖、皂苷、鞣質(zhì)及其化苷類。4、以乙醚提?。孩贋V液檢驗(yàn)酯、內(nèi)酯、苷元；②藥渣揮去乙醚，甲醇回流提?。簷z驗(yàn)各種苷類。5、以升化法提?。荷A成份，如游離蒽醌苷元等。6、以水蒸氣蒸餾法提?。簱]了性成份。第三節(jié)理化判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第13頁

為了提升普通化學(xué)反應(yīng)法用于中藥制劑判別可靠性，改進(jìn)其專屬性，應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：①應(yīng)慎重使用專屬性不好化學(xué)反應(yīng)，如泡沫生成反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)等，因?yàn)橹兴幉闹械鞍踪|(zhì)、含酚羥基等類似成份存在較為普遍。②在分析前對樣品進(jìn)行分離、精制，除去干擾判別反應(yīng)物質(zhì)，借以改進(jìn)判別方法專屬性。詳細(xì)分離精制方法要與被判別成份性質(zhì)、干擾成份性質(zhì)和理化反應(yīng)對反應(yīng)條件要求相適應(yīng)等。③采取陰性對照和陽性對照方式，對確定判別方法進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證，預(yù)防出現(xiàn)假陽性。第三節(jié)理化判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第14頁二、升華法

利用升華法來進(jìn)行判別中藥制劑中一些含有升華性質(zhì)化學(xué)成份。這些成份，在一定溫度下能升華與其它成份分離，取升華物顯微鏡下觀察有一定形狀，在可見光下觀察有一定顏色，在紫外光下觀察顯出不一樣顏色熒光，或者加一定試劑處理后顯出不一樣顏色或熒光。

第三節(jié)理化判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第15頁

操作方法：取金屬片，安放在圓孔（直徑約2cm）石棉板上，在金屬片上放一小金屬圈（內(nèi)徑約1.5cm，高約0.8cm），對準(zhǔn)石棉板上圓孔，圈內(nèi)放入預(yù)先研細(xì)成粉末中藥制劑一薄層，圈上放一載玻片。在石棉板下圓孔處用酒精燈小心慢慢加熱，火焰距離石棉板約4cm，加熱至粉開開始變焦，即去火冷卻，可見有升華物附著于載玻片上，將載玻片取下反轉(zhuǎn)，在顯微鏡下觀察其結(jié)晶形狀或者加適當(dāng)試劑觀察其顏色反應(yīng)。除另外，尚可用其它裝置進(jìn)行判別。第三節(jié)理化判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第16頁三、光譜法

利用光譜法對中藥制劑進(jìn)行定性判別，主要有熒光判別法，可見—紫外分光光度法、紅外分光光度法，而其它判別法較少應(yīng)用。

（一）熒光法（二）可見—紫外分光光度法（三）紅外光光度法定性判別

第三節(jié)理化判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第17頁熒光法

1、適用范圍：組成中藥制劑中藥材中含有能產(chǎn)生熒光化學(xué)成份。

2、操作方法：取制劑提取液點(diǎn)在濾紙上或試紙上，置紫外光燈下（365nm或254nm）觀察，或加一定試劑后再進(jìn)行觀察。第三節(jié)理化判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第18頁第三節(jié)理化判別可見—紫外分光光度法中藥材中有些化學(xué)成份在可見紫外光區(qū)有選擇性吸收，顯示特征吸收光譜曲線，不一樣藥材所含成份不一樣，在一定條件下利用這些吸收光譜特征，以判別制劑中一些成份。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第19頁常見判別方法有：

1、要求吸收波長法：（最慣用）樣品經(jīng)適當(dāng)處理后，測定其吸收光譜，在一定波優(yōu)點(diǎn)有最大吸收；2、對照品對比法：取對照品或?qū)φ账幉募肮┰嚻方?jīng)處理后，制成對照品溶及供試品溶液，分別測定吸收光譜，比較二者吸收光譜一致性；3、要求吸收波長和吸收度法：取樣品經(jīng)處理后，測定吸收光譜，在吸收光譜要求波長下應(yīng)有若干個(gè)吸收峰，并有對應(yīng)吸收度值；4、要求吸收波長和吸收度比值法：樣品在一定波長下應(yīng)產(chǎn)生對應(yīng)吸收峰，而且吸收度與對照峰吸收度比值應(yīng)在一定范圍之內(nèi)，此法條件是要有對照品或參考物；5、多溶劑光譜法：選取不一樣極性溶劑按一定次序提取樣品，將樣品為分若干個(gè)溶劑組，然后測定各組吸收光譜，依據(jù)所得到特征吸收光譜或?qū)?shù)光譜進(jìn)行判別?？梢姟贤夥止夤舛确ㄖ兴幹苿┓治鰧I(yè)知識專家講座第20頁（三）紅外光光度法定性判別1、在4000-400cm-1范圍間測定中藥制劑樣品紅外吸收光譜。2、制樣方法：取樣品直接制樣，或經(jīng)溶劑提取后制樣。3、該法含有取樣少、快速、簡便、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，但當(dāng)前用于中藥制劑判別報(bào)道不多。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第21頁四、色譜法

㈠紙色譜法㈡薄層色譜法㈢薄層掃描法㈣氣相色譜法㈤高效液相色譜法第三節(jié)理化判別中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第22頁（一）紙色譜法

紙色譜法系以紙為載體，以紙上所含水或其它物質(zhì)為固定相，用展開劑進(jìn)行展開分配色譜。用比移值（Rf）表示各組成成份位置，但因?yàn)橛绊懕纫浦翟蜉^多，因而普通采取在相同試驗(yàn)條件下與對照物質(zhì)對比以確定其異同。

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第23頁

（二）薄層色譜法

薄層色譜法，系將適宜吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后，與適宜對照物按同法在同板上所得色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，用以進(jìn)行中藥制劑品判別方法。在中藥制劑判別，薄層色譜法為最慣用方法。為了提升試驗(yàn)主要性及分離度，所以薄層色譜有必要進(jìn)行規(guī)范化操作。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第24頁

樣品供試液制備薄層色譜法使用材料操作方法薄層色譜圖統(tǒng)計(jì)與保留影響薄層色譜分析主要原因?qū)φ掌愤x擇

（二）薄層色譜法中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第25頁1．樣品供試液制備1)樣品供試液制備：提取方法見第一章。2)凈化方法：單一溶劑萃取法分段萃取法液—液萃取法固—液萃取法（二）薄層色譜法中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第26頁（二）薄層色譜法2．薄層色譜法使用材料薄層板涂布器：點(diǎn)樣器材：展開箱（層析缸）顯色與檢測儀器中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第27頁①規(guī)格：用10cm×10cm，10cm×15cm，20cm×10cm或20cm×20cm規(guī)格，要求光滑平整，洗凈后不附水珠，晾干?？捎檬止ぷ灾瓢蹇深A(yù)制板，最好使用厚度為1～2mm優(yōu)質(zhì)平板玻璃，普通窗玻璃普通不宜用于制作薄層板。薄層板中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第28頁②吸附劑或載體：慣用有硅膠G、硅膠GF254，硅膠H、硅膠HF254，其次有硅藻土、硅藻土G，氧化鋁，氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小普通要求直徑為10～40μm。薄層板中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第29頁③最慣用吸附劑：加有石膏作粘合劑商品硅膠G，加有熒光劑硅膠GF254，有另加其它粘合劑如羧甲基纖維素鈉以加固薄層板面；有品種要求使用加有酸（如硼酸），堿（如氫氧化鈉）或緩沖溶液等薄層板。薄層板中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第30頁涂布器：

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上涂成一層符合厚度要求均勻薄層。商品有手工、半自動薄層板涂布器，涂布厚度有固定厚度（如25μm）或能夠調(diào)整兩種。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第31頁點(diǎn)樣器材：最慣用也最方便是定量點(diǎn)樣毛細(xì)管（微升毛細(xì)管），規(guī)格有0.5μl、1.0μl、2.0μl、3.0μl、4.0μl、5.0μl及l(fā)0μl等。要求是標(biāo)示容量準(zhǔn)確，管端平整光滑，管壁潔凈，液流通暢，無堵塞，無污染。微量注射器中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第32頁展開箱（層析缸）應(yīng)該用薄層色譜專用展開箱，有平底展開箱和雙槽展開箱，還有一個(gè)水平或展開箱。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第33頁顯色與檢測儀器噴霧法：噴霧瓶應(yīng)能在一定壓力下使試劑噴成均勻細(xì)霧狀。浸漬法用浸漬槽為特制浸漬槽，將展開后薄層板平穩(wěn)放入有顯色劑浸漬槽中數(shù)十秒至1分鐘后取出（揩凈薄層板背后殘余試劑）顯色。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第34頁

操作方法:

薄層板制備點(diǎn)樣展開檢測中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第35頁薄層板制備除另有要求外，普通制備方法為：將1份吸附劑（如硅膠G）加3份左右水在研缽中用研杵沿一個(gè)方向充分研磨，調(diào)成均勻糊狀物，倒入已準(zhǔn)備好涂布器中，在玻璃板上平穩(wěn)地以直線方向移動涂布器，使硅膠漿均勻地涂布。薄層厚度普通為0.2～0.3mm，涂布好薄層板于室溫下在水平臺上晾干，再在105～110℃活化約30分鐘，置干燥器中備用。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第36頁點(diǎn)樣

除另有要求外，點(diǎn)樣用定量微升毛細(xì)管，按要求吸收溶液后，以垂直方向小心接觸板面使成圓點(diǎn)狀，點(diǎn)樣基線與底邊距離，點(diǎn)樣距離底邊以1cm為宜，點(diǎn)間距離視情況為1、1.5或2cm，原點(diǎn)直徑應(yīng)小于3mm；如樣品容量較大，或?yàn)榱烁倪M(jìn)分離度，也可點(diǎn)寬約2～3mm不一樣長度條帶。點(diǎn)樣時(shí)須注意盡可能不要損害薄層表面。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第37頁展開

點(diǎn)樣后薄層板置入加有展開劑薄層展開箱中，密閉，普通采取上行展開，薄層板浸入展開劑濃度普通要求溶劑最初前沿距原點(diǎn)約5mm，展開至要求開距后馬上將薄層板取出，晾干，以備檢測。多數(shù)品種展距7～9cm已夠，需平衡者可在雙槽展開箱，如需到達(dá)飽和狀態(tài)，可在展開箱內(nèi)壁貼一被溶劑濕潤濾紙使展開箱易于被蒸氣平衡。展開劑要求新鮮配制。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第38頁檢測色譜斑點(diǎn)本身有顏色者可直接在日光下觀察色譜中色斑；本身在紫外光激發(fā)下可發(fā)射熒光者可直接置紫外光燈下觀察熒光色譜；需加試劑后方能顯色或發(fā)射熒光者，則可將試劑用噴霧器均勻噴灑于薄層板面（或用浸漬法），再按要求直接觀察或加熱后觀察。

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第39頁薄層色譜圖統(tǒng)計(jì)與保留

攝影、數(shù)碼攝影、復(fù)印、掃描或描畫。

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第40頁影響薄層色譜分析主要原因

常規(guī)薄層色譜因?yàn)槭且粋€(gè)“敞開系統(tǒng)”色譜技術(shù)，與柱色譜區(qū)分之一是除材料及器材以外，外界環(huán)境條件對被分離物質(zhì)層析行為影響很大，分離機(jī)制也很復(fù)雜；操作技巧也顯著影響色譜質(zhì)量；

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第41頁樣品預(yù)處理及供試液制備

中藥成份復(fù)雜，未知成份多，供試液中溶出物質(zhì)較多，其中有欲測成份也有其它“雜質(zhì)”，經(jīng)常因?yàn)橄嗷ジ蓴_或背景污染而難以得到滿意分離效果，故需對樣品進(jìn)行適當(dāng)提取凈化處理。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第42頁薄層色譜點(diǎn)樣技術(shù)

普通在常規(guī)薄層板上原點(diǎn)直徑小于3mm，高效薄層板要求原點(diǎn)直徑小于2mm；點(diǎn)樣量不宜過大，最好控制在10μl以下；如在一個(gè)位置重復(fù)屢次點(diǎn)樣時(shí)，須注意盡可能不要將原點(diǎn)點(diǎn)成一個(gè)空心圈；選取溶劑沸點(diǎn)不宜太高（如正丁醇）或太低（如乙醚）。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第43頁吸附劑活性與相對濕度影響

薄層板從干燥器中取出，自開始點(diǎn)樣到展開前，薄層板普通是暴露在試驗(yàn)室大氣中，其活性取決于試驗(yàn)室環(huán)境相對濕度；控制展開時(shí)相對濕度：采取一定濃度硫酸溶液或其它調(diào)整相對濕度無機(jī)鹽水溶液控制濕度。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第44頁溶劑蒸氣在薄層色譜中作用溶劑蒸氣相在展開箱中也參加色譜展開而形成三維層析過程，從而對薄色譜層析過程和結(jié)果有很大影響；可采取預(yù)平衡等方法進(jìn)行控制。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第45頁

溫度影響

最直觀影響是被分離物質(zhì)Rf值和物質(zhì)相互分離度以及斑點(diǎn)擴(kuò)散等，故試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意溫度控制。中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第46頁中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第47頁中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第48頁中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第49頁中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第50頁對照品選擇

標(biāo)準(zhǔn)品對照：用已知中藥制劑某一藥材某一有效成份標(biāo)準(zhǔn)品制成對照液，與樣品在同一條件下層析，比較在相同位置上有沒有同一顏色（或熒光）斑點(diǎn)，以此來控制制劑中這種有效成份。陰陽對照：因?yàn)橹兴幹苿┲性S多化學(xué)成份和有效成份不明確，有些已明確但又無標(biāo)準(zhǔn)品，能夠采取陰陽對照法處理。采取對照藥材和化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)對照。為了能夠準(zhǔn)確檢驗(yàn)出制劑投料真實(shí)性，有時(shí)只投化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品無法判別出來，假如增加原藥材陽性對照液對照就能夠克服這一不足之處。

中藥制劑分析專業(yè)知識專家講座第51頁

陽性對照液制備：把制劑中要判別某對照