溶氧的影響及控制VIP

溶氧(DO)是需氧微生物生長所必需。在發(fā)酵過程中有多方面的限制因素，而溶氧往往是最易成為控制因素。

在28℃氧在發(fā)酵液中的100％的空氣飽和濃度只有0.25mmol.L-1左右，比糖的溶解度小7000倍。在對數(shù)生長期即使發(fā)酵液中的溶氧能達到100％空氣飽和度，若此時中止供氧，發(fā)酵液中溶氧可在幾分鐘之內(nèi)便耗竭，使溶氧成為限制因素。第六節(jié)溶氧(DO)對發(fā)酵的影響及控制發(fā)酵生產(chǎn)中用空氣飽和度百分數(shù)來表示溶氧濃度。臨界氧濃度：不影響呼吸所允許的最低溶氧濃度，如對產(chǎn)物而言，便是不影響產(chǎn)物合成所允許的最低濃度。一臨界氧各種微生物的呼吸強度是不同的，并且呼吸強度是隨著培養(yǎng)液中溶解氧濃度的增加而加強，直至達到一個臨界值為止。這個臨界值稱為“臨界氧濃度”。微生物的臨界氧濃度大約是飽和濃度的1%~25%。

某些微生物的臨界氧濃度微生物名稱溫度/℃C臨界/mmol/L固氮菌大腸桿菌大腸桿菌粘性賽氏桿菌粘性賽氏桿菌酵母酵母橄欖型青霉菌橄欖型青霉菌3037.815313034.82024301.8～4.9×10-28.2×10-33.1×10-31.5×10-29×10-34.6×10-33.7×10-32.2×10-29×10-3不同種類的微生物的需氧量不同，一般為25～100mmolO2/（L·h），同一種微生物的需氧量，隨菌齡和培養(yǎng)條件不同而異。菌體生長和形成代謝產(chǎn)物時的耗氧量也往往不同。

微生物菌體在不同時期不同階段的耗氧速度[mmolO2/（L·h）]生長產(chǎn)α-淀粉酶種子培養(yǎng)7h發(fā)酵13h黑曲霉50～55201350谷氨酸生產(chǎn)菌當不存在其他限制性基質(zhì)時，溶解氧濃度高于臨界值，細胞的比耗氧速率保持恒定；如果溶解氧濃度低于臨界值，細胞的比耗氧速率就會大大下降，或者是微生物的呼吸速率隨溶解氧濃度降低而顯著下降，細胞處于半?yún)挌鉅顟B(tài)，代謝活動受到阻礙。呼吸臨界氧值可用尾氣O2含量變化和通氣量測定，也可用溶氧電極測定。方法：通氣攪拌，溶氧升到最高；中止通氣，繼續(xù)攪拌，頂部充氮氣，溶氧迅速下降。各種微生物的呼吸臨界氧值：

細菌和酵母：3~10%放線菌：5~30%霉菌：10~15%合成的臨界氧值：考察不同溶氧濃度對生產(chǎn)的影響，便可求得合成的臨界氧值。注意：●實際上，呼吸臨界氧值不一定與產(chǎn)物合成臨界氧值相同?！裆锖铣膳R界氧濃度并不等于其最適氧濃度?！裨谂囵B(yǎng)過程中并不是維持溶氧越高越好。過高的溶氧對生長可能不利。二發(fā)酵過程中的溶氧變化（一）、發(fā)酵過程中溶氧濃度變化的一般規(guī)律發(fā)酵前期：由于微生物大量繁殖，需氧量不斷大幅度增加，此時需氧超過供氧，溶氧明顯下降發(fā)酵中期：溶氧濃度明顯地受工藝控制手段的影響，如補料的數(shù)量、時機和方式等發(fā)酵后期：由于菌體衰老，呼吸減弱，溶氧濃度也會逐步上升，一旦菌體自溶，溶氧就會明顯地上升

（二）、溶氧異常的原因1、引起溶氧異常下降的可能原因（1）污染好氣性雜菌，消耗大量溶氧，使溶氧在短時間內(nèi)下降到零附近（2）菌體代謝發(fā)生異?，F(xiàn)象，需氧要求增加，使溶氧下降（3）某些設(shè)備或工藝控制發(fā)生故障或變化，也能引起溶氧下降，如攪拌功率消耗變小或攪拌轉(zhuǎn)速變慢、消沫油因自動加油器失靈或人為加量過多、停止攪拌、悶罐（關(guān)閉排氣閥）等。2、引起溶氧異常上升的可能原因：（1）污染烈性噬菌體（2）菌體代謝出現(xiàn)異常，耗氧能力下降（3）補料時間和間隔不當：赤霉素發(fā)酵發(fā)酸現(xiàn)象根據(jù)發(fā)酵液中的溶解氧濃度的變化來判斷微生物生長代謝是否正常，工藝控制是否合理，設(shè)備供氧能力是否充足等問題，有助于查找發(fā)酵不正常的原因和控制好發(fā)酵生產(chǎn)。（三）溶氧濃度的控制

發(fā)酵液中的溶氧濃度取決于氧的傳遞（即供氧方面）和被微生物利用（即耗氧方面）兩個方面。氧的傳遞方程

NV

＝KLa(c*－cL)式中：NV——單位體積液體的傳氧速率；

KLa——以濃度差為推動力的體積溶氧系數(shù)；

cL——溶液中氧的實際濃度；

c*——氧在水中的飽和濃度。1、影響氧傳遞的因素（1）影響推動力(c*－cL)的因素①溫度：溫度升高，氧的溶解度降低

可在不影響菌體生長和產(chǎn)物合成情況下，采取降低溫度的措施。②pH：氧在酸性溶液中的溶解度一般表現(xiàn)為酸的強度大、濃度高，則氧溶解度低。③電解質(zhì)濃度：電解質(zhì)濃度大，氧的溶解度低④溶劑：氧在有機溶劑中的溶解度比水中大。實際發(fā)酵過程中也可通過合理添加有機溶劑來降低水的極性從而增加氧的溶解度。⑤氧分壓：增加分壓可提高氧的溶解度。方法一是提高空氣總壓，方法二是提高氧分壓。

Kla反映了設(shè)備的供氧能力，發(fā)酵常用的設(shè)備為搖瓶與發(fā)酵罐。影響搖瓶kla的因素為裝液量和搖瓶機的種類搖瓶機往復(fù)，頻率80-120分/次，振幅8cm旋轉(zhuǎn)，偏心距25、12,轉(zhuǎn)述250rpm裝液量，一般取1/10左右：

250ml15-25ml500ml30ml750ml80ml例：

500ml搖瓶中生產(chǎn)蛋白酶，考察裝液量對酶活的影響裝液量30ml60ml90ml120ml

酶活力71373425392（2）發(fā)酵罐中影響KLa的因素①攪拌作用：打散氣泡，增大氣液接觸面；

形成渦流，延長氣泡在液體中停留時間；

形成湍流，減小氣泡外的液膜阻力；

避免菌絲結(jié)團，減少菌絲團阻力；使培養(yǎng)液中的成分分布均勻，細胞均勻懸浮，有利于營養(yǎng)物的吸收和代謝物的分散。

但是攪拌轉(zhuǎn)速并非越大越好，過度強烈的攪拌會有很多不利作用。②空氣線速度

KLa隨空氣流速的增加而增大，但空氣速度過大，則可使葉輪發(fā)生過載，即葉輪不能分散空氣，氣體不經(jīng)分散而沿攪拌器緩慢運動的中心迅速上升而逸出?？諝夥植计靼l(fā)酵罐中裝有多孔分布器和單孔分布器，在氣流速度很低時，多孔分布器有較高的通氣效率。但兩者的區(qū)別隨著氣流速度的增加而逐漸減少?？赡苁堑蜌饬鲿r多孔分布器可形成更大的傳遞面積，而當通氣量增大時，單孔分布器能更大的增加發(fā)酵液的湍動程度。④發(fā)酵液的性質(zhì)

發(fā)酵液的性質(zhì)特別是黏度、pH、極性、表面張力、離子濃度、菌體濃度等，都會影響氣泡的大小、穩(wěn)定性和氧的傳遞速率。黏度增大，KLa下降；泡沫過多，黏度增加，KLa下降；表面活性劑（如消泡劑）使KLa下降；離子強度大使KLa增加；菌體濃度增加使KLa下降。發(fā)酵過程中添加糖、花生餅粉等營養(yǎng)物質(zhì)、前體或無菌水、消泡劑等均可改變培養(yǎng)液的理化性質(zhì)。項目設(shè)備條件項目設(shè)備條件攪拌器空氣流量類型；封閉或開放式葉片形狀；彎葉、平葉或箭葉攪拌器直徑/罐直徑擋板數(shù)和擋板寬度攪拌器檔數(shù)和位置每分鐘體積比[(V/V)/min]空氣分布器的類型和位置攪拌轉(zhuǎn)速罐壓雷諾準數(shù)“K”因子功率準數(shù)弗羅德準數(shù)Pa與氧傳質(zhì)有關(guān)的工程參數(shù)2、影響微生物耗氧的因素

微生物的“需氧”可用耗氧速率或呼吸強度來表示：

耗氧速率（oxygenuptakerate)：指單位體積的培養(yǎng)液在單位時間的耗氧量。單位為mmolO2/(L·

h)，用r表示或OUR

呼吸強度（respiratorystrength)：單位質(zhì)量的干菌體在單位時間的耗氧量。單位為mmolO2/(g·干細胞

·h)，用Ｑo2表示兩者的關(guān)系：P188①微生物本身遺傳特征：不同種類耗氧量不同②培養(yǎng)基的成分和濃度：

培養(yǎng)基成分尤其是碳源對細胞耗氧影響大，耗氧由大到?。河唾|(zhì)或烴類>G>蔗糖>乳糖培養(yǎng)基濃度大，耗氧增加培養(yǎng)液營養(yǎng)豐富，菌體生長快，耗氧量大；發(fā)酵濃度高，耗氧量大；發(fā)酵過程補料或補糖，微生物對氧的攝取量隨著增大。

③菌齡：幼齡菌生長旺盛，耗氧大④發(fā)酵條件：pH、溫度⑤代謝類型：若產(chǎn)物通過TCA循環(huán)獲取，則耗氧大；若產(chǎn)物通過EMP途徑獲取，則耗氧量小

項目工藝條件項目工藝條件菌種特性培養(yǎng)基的性能好氣程度菌齡、數(shù)量菌的聚集狀態(tài)，絮狀或小球狀基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成、配比物理性質(zhì)；粘度、表面張力等補料或加糖溫度溶氧與尾氣O2及CO2水平消泡劑或油表面活性劑配方、方式、次數(shù)和時機恒溫或階段變溫控制按生長或產(chǎn)物合成的臨界值控制種類、數(shù)量、次數(shù)和時機種類、數(shù)量、次數(shù)和時機影響需氧的工藝條件3控制溶氧的工藝手段（1）改變通氣速率（增大通風(fēng)量）：增大KLa值。注意，過分增大通氣速率會產(chǎn)生副作用，如泡沫生成、罐溫增高等。（2）改變攪拌速度：轉(zhuǎn)速較低時，增大攪拌速度對提高溶氧濃度有明顯作用；當轉(zhuǎn)速很高時，再增大攪拌速度起不到調(diào)節(jié)作用，反而打碎菌絲體，使菌體自溶并減少產(chǎn)量。（3）改變氣體組成中的氧分壓（4）改變罐壓：提高C*。不是十分有效（5）改變發(fā)酵液的理化性質(zhì)：如加消沫劑、補加無菌水、改變培養(yǎng)基的成分等（6）加入傳氧中間介質(zhì)：一般是不溶于培養(yǎng)液的液體，呈乳化狀態(tài)來提高氣液相之間的傳遞。傳氧中間介質(zhì)有：血紅蛋白、烴類碳氫化合物（煤油、石蠟等）、含