社區(qū)獲得性細菌性腹瀉病原菌分布及耐藥特點分析

社區(qū)獲得性細菌性腹瀉病原菌分布及耐藥特點分析

腹瀉是世界上的一個問題。據(jù)估計，每年該國腹瀉患者數(shù)量為30億至50億人，每年已有500萬人死亡。1材料和方法1.1第三二醫(yī)院及軍隊疾病預(yù)防控制中心組織實施本研究按照軍隊“十二五”重點課題“腹瀉病原監(jiān)測、快速診斷及治療研究”的設(shè)計方案,由解放軍第三○二醫(yī)院及軍隊疾病預(yù)防控制中心組織實施。收集2009—2013年我國包括沿海和內(nèi)陸地區(qū)16省市的分離自門診和住院腹瀉患者的腹瀉病原菌,新鮮大便標本接種沙門、志賀菌屬(SS)瓊脂培養(yǎng)基、慶大霉素培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基篩選腹瀉病原菌,統(tǒng)一進行藥物敏感性(藥敏)試驗。1.2抗菌、生化鑒定儀器SS瓊脂培養(yǎng)基、克氏雙糖鐵培養(yǎng)基、慶大霉素培養(yǎng)基和山梨醇麥康凱培養(yǎng)基購自北京天壇生物技術(shù)公司和杭州天和生物制品有限公司,微量生化編碼管和氧化酶紙片購自杭州天和生物制品有限公司和天津金章醫(yī)用新技術(shù)研究所,MH瓊脂和藥敏紙片購自英國Oxoid公司和北京天壇生物技術(shù)公司,VITEK濁度儀和VITEK全自動生化鑒定儀購自法國bioMerieux公司,沙門菌、志賀菌、致瀉性大腸埃希菌和霍亂弧菌診斷血清購自蘭州生物研究所、寧波天潤生物藥業(yè)有限公司和丹麥SSI公司。1.3半固體培養(yǎng)基從SS平板、山梨醇麥康凱平板或慶大霉素平板上直接挑取2~3個可疑菌落,接種在克氏雙糖鐵瓊脂和尿素酶半固體培養(yǎng)基上,(36±1)℃培養(yǎng)過夜。用微量生化編碼管或VITEK全自動生化分析儀進行鑒定,如果細菌為沙門菌、志賀菌、致瀉性大腸埃希菌或霍亂弧菌,則用相應(yīng)的診斷血清進行分型,同時用0.9%氯化鈉溶液作為陰性質(zhì)控,從而確定菌株血清型別。1.4藥物的藥敏試驗選用美國臨床和實驗室標準協(xié)會(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI)推薦的K-B法,選擇氨芐西林、哌拉西林、頭孢噻肟、頭孢曲松、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、氯霉素、復(fù)方磺胺甲噁唑、磷霉素、頭孢吡肟和頭孢美唑這13種抗生素進行藥敏試驗,操作及結(jié)果判讀參照CLSI標準進行2結(jié)果2.1沿海地區(qū)省份本研究收集到的腹瀉病原菌分布于我國的16個省市,按地區(qū)特點分為內(nèi)陸地區(qū)(北京市、河北省、河南省、湖北省、廣西壯族自治區(qū)、云南省、四川省、甘肅省、內(nèi)蒙古自治區(qū)、新疆維吾爾自治區(qū))和沿海地區(qū)(遼寧省、山東省、江蘇省、上海市、浙江省、廣東省)。在10881株腹瀉病原菌中,分離自沿海地區(qū)的為1640株,以弧菌、氣單胞菌和致瀉性大腸埃希菌為主,所占比例分別為45.10%、14.20%和13.00%,其次是志賀菌、沙門菌和鄰單胞菌,所占比例分別為10.50%、9.20%和8.00%。分離自內(nèi)陸地區(qū)的為9241株,主要是志賀菌、沙門菌和弧菌,所占比例分別為80.70%、9.00%和6.60%,其次是鄰單胞菌、致瀉性大腸埃希菌、氣單胞菌和小腸結(jié)腸耶爾森菌,所占比例分別為1.50%、1.40%、0.75%和0.05%。2.2細菌分離株的分離及鑒定5年間收集到的10881株腹瀉病原菌包括7個菌屬、22個菌種和90個血清型。其中志賀菌7632株(70.14%),弧菌1351株(12.42%),沙門菌981株(9.02%),致瀉性大腸埃希菌341株(3.13%),氣單胞菌302株(2.78%),鄰單胞菌269株(2.47%),小腸結(jié)腸耶爾森菌5株(0.05%)。2.2.2c、d群結(jié)構(gòu)981株沙門菌包括7個群、6個亞群和61個血清型。其中A群11株(1.12%),B群333株(33.94%),C群96株(9.79%),D群492株(50.15%),E群30株(3.06%),I群2株(0.20%),F群6株(0.61%),未分群11株(1.12%)。各群及血清型具體分布見表2。2.2.3非o1非o139群弧菌屬的1352株包括10個種,其中副溶血弧菌1065株(78.77%),霍亂弧菌(O1群12株、O139群5株、非O1非O139群193株)210株(15.53%),溶藻弧菌17株(1.26%),鯊魚弧菌16株(1.18%),辛辛那提弧菌14株(1.04%),麥奇尼科夫弧菌12株(0.89%),河弧菌10株(0.74%),霍氏弧菌4株(0.30%),擬態(tài)弧菌2株(0.15%),嗜鹽弧菌2株(0.15%)。2.2.4單胞菌種類型,出現(xiàn)了5.氣單胞菌屬的302株包括嗜水氣單胞菌143株(47.35%),溫和氣單胞菌80株(26.49%),豚鼠氣單胞菌64株(21.19%),維隆氣單胞菌10株(3.31%),舒伯特氣單胞菌5株(1.66%)。2.2.5致病菌東北部-內(nèi)酰胺腸毒素型大腸桿菌埃希菌/分離菌株致瀉性大腸埃希菌156株,包括侵襲性大腸埃希菌71株(45.51%),致病大腸埃希菌68株(43.59%),腸毒素型大腸埃希菌17株(10.90%)。2.3對抗菌藥物的敏感性不同菌屬對抗生素的敏感性有所不同。弧菌的敏感性普遍高于其他菌屬,特別是對復(fù)方磺胺甲噁唑和氯霉素的敏感性明顯高于其他菌屬;致瀉性大腸埃希菌對抗生素的敏感性較差;志賀菌和沙門菌對抗生素的敏感性比較一致,除對氨芐西林、哌拉西林和復(fù)方磺胺甲噁唑外,對其他抗生素的敏感性普遍較高(表3)。3沙門菌的血清型分布感染性腹瀉是一組由多病原體、多因素引起的腸道傳染病,與食品安全、突發(fā)公共衛(wèi)生事件密切相關(guān),隨著旅游業(yè)、國際商貿(mào)的發(fā)展,腹瀉病原菌的遠距離傳播和暴發(fā)流行難以避免本研究首次對5年收集的超過萬余株遍及我國16個省市的腹瀉病原菌菌譜進行分析,涉及7個菌屬、22個菌種和90個血清型,證明我國引起腹瀉的細菌性病原菌種類繁多,本研究代表性較好。本研究結(jié)果表明,我國腹瀉病原菌中以志賀菌占絕對優(yōu)勢,其次是弧菌和沙門菌,也存在致瀉性大腸埃希菌、氣單胞菌、鄰單胞菌及小腸結(jié)腸耶爾森菌等,而美國和新西蘭的腹瀉病原菌以彎曲菌屬為最多,其次是非傷寒沙門菌、志賀菌和產(chǎn)毒素大腸埃希菌此外,研究表明,我國的志賀菌群及血清型構(gòu)成特點鮮明,共檢出4個群和27個血清型。B群占絕對優(yōu)勢,B群中以F2a、F4a和F1a血清型占絕大多數(shù);其次是D群,A群和C群極少。而歐洲以及美國、伊朗、澳大利亞等國家以D群為主,其他依次為B群、C群和A群(3%)我國腹瀉患者沙門菌的群、亞群和血清型種類繁多,本研究的7群、6個亞群和61個血清型是目前報道最多的,體現(xiàn)了我國沙門菌種類分布的廣泛性,也與長期細致的監(jiān)測有關(guān)。其中沙門菌新的血清型弗吉尼亞沙門菌(Salmonellavirginia)、人感染布雷登尼沙門菌(Salmonellabredeney)、吉偉沙門菌(Salmonellagive)、埃班道夫沙門菌(Salmonellaeppendorf)和維爾伏爾德沙門菌(Salmonellavilvoorde)均為我們首次報道。我國沙門菌血清型分布以腸炎沙門菌和鼠傷寒沙門菌為主,其次為傷寒沙門菌和阿哥那沙門菌,與全球的沙門菌分布以腸炎沙門菌和鼠傷寒沙門菌為主相一致,但其他沙門菌血清型分布有差異。其他國家和地區(qū)報道的沙門菌血清型種類遠較本研究的少,如歐洲報道沙門菌分離率較高的血清型為腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌和嬰兒沙門菌在我國沿海地區(qū)腹瀉病原菌以弧菌和氣單胞菌為主,致瀉性弧菌主要是副溶血弧菌,其次是非O1非O139群霍亂弧菌、溶藻弧菌等,臺灣報道的以嗜鹽弧菌為主我國腹瀉病原菌對氨芐西林、哌拉西林和復(fù)方磺胺甲噁唑耐藥率較高,對頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、左旋氧氟沙星、頭孢美唑、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、磷霉素和氧氟沙星敏感性較好。但不同菌屬的腹瀉病原菌對抗生素的敏感率也有所不同。哌拉西林和復(fù)方磺胺甲噁唑?qū)χ举R菌、沙門菌、致瀉性大腸埃希菌等敏感性均較差,但對弧菌敏感性卻較好;依據(jù)CLSI標準,沙門菌和志賀菌僅報告對氨芐西林、一種氟喹諾酮類和復(fù)方磺胺甲噁唑有敏感性,但從我們檢測的藥敏結(jié)果分析,這幾類抗生素不適合我國腹瀉患者特別是兒童的實際情況,因為氨芐西林和復(fù)方磺胺甲噁唑的耐藥率為70%~80%,而喹諾酮類藥物因?qū)ξ闯赡耆说能浌嵌拘远?。我國的弧菌對抗生素敏感性普遍較好,明顯高于國外報道我國腹瀉病原菌地域分布廣泛,菌群及血清型種類繁多,抗生素敏感性存在差異,因此重視和規(guī)范監(jiān)測工作,并發(fā)布病原菌分布和耐藥的信息,可及時對癥治療、降低病原體的擴散和控制疫情,還可控制醫(yī)療和管理成本,也能為針對性的疫苗開發(fā)和有效預(yù)防提供客觀依據(jù)。1.5統(tǒng)計處理采用WHONET5.3軟件進行耐藥性分析。2.2.1b群和d群的血清型7632株志