人粒細(xì)胞無(wú)形體病預(yù)防控制技術(shù)指引-望江疾病預(yù)防控制中心

#人粒細(xì)胞無(wú)形體病預(yù)防控制技術(shù)指南

（試行）人粒細(xì)胞無(wú)形體?。℉umangranulo, ）是由嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體（,曾稱為“人粒細(xì)胞埃立克體，）侵染人末梢血中性粒細(xì)胞引起，以發(fā)熱伴白細(xì)胞、血小板減少和多臟器功能損害為主要臨床表現(xiàn)的蜱傳疾病。自199年4美國(guó)報(bào)告首例人粒細(xì)胞無(wú)形體病病例以來(lái)，近年來(lái)美國(guó)每年報(bào)告的病例約600~8人0。2000年，我國(guó)在安徽省發(fā)現(xiàn)人粒細(xì)胞無(wú)形體病病例，其他部分省份也有疑似病例發(fā)生。該病臨床癥狀與某些病毒性疾病相似，容易發(fā)生誤診，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。為指導(dǎo)臨床醫(yī)生和疾病預(yù)防控制專業(yè)人員做好該病的發(fā)現(xiàn)、報(bào)告、診斷、治療、個(gè)人防護(hù)、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和疫情防控與應(yīng)急處置工作，加強(qiáng)公眾健康教育，制定本技術(shù)指南。一、目的（一）指導(dǎo)各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)正確開(kāi)展人粒細(xì)胞無(wú)形體病的診斷和治療，及時(shí)報(bào)告病例并做好個(gè)人防護(hù)和院內(nèi)感染的控制工作。（二）指導(dǎo)各級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)開(kāi)展人粒細(xì)胞無(wú)形體病流行病學(xué)調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和疫情監(jiān)測(cè)控制工作。（三）指導(dǎo)各地開(kāi)展人粒細(xì)胞無(wú)形體病流行病學(xué)、病原學(xué)及防控策略的研究。（四）指導(dǎo)各地做好預(yù)防人粒細(xì)胞無(wú)形體病的健康教育工作。二、疾病概述（一）病原學(xué)。嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體屬于立克次體目、無(wú)形體科、無(wú)形體屬。無(wú)形體科是一類主要感染白細(xì)胞的專性細(xì)胞內(nèi)寄生革蘭陰性小球桿菌，其中對(duì)人致病的病原體主要包括無(wú)形體屬（ ）的嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體、埃立克體屬的查菲埃立克體（ ）和埃文氏埃立克體（ i新立克次體屬 的腺熱新立克次體（ ）n分別引起人粒細(xì)胞無(wú)形體病、人單核細(xì)胞埃立克體病 、埃文氏埃立克體感染、腺熱新立克次體病。90年代初期，美國(guó)在多例急性發(fā)熱病人的中性粒細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)埃立克體樣包涵體。年，等從病人的血標(biāo)本分離到該種嗜粒細(xì)胞病原體，將它非正式命名為人粒細(xì)胞埃立克體，其所致疾病稱為人粒細(xì)胞埃立克體病。后經(jīng)基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析，發(fā)現(xiàn)該種嗜粒細(xì)胞病原體與無(wú)形體屬最相關(guān)，因此，將其歸于無(wú)形體屬的一個(gè)新種，命名為嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體，其所致疾病也改稱為人粒

細(xì)胞無(wú)形體病。1.形態(tài)結(jié)構(gòu)及培養(yǎng)特性嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體呈球狀多型性，革蘭氏染色陰性，主要寄生在粒細(xì)胞的胞質(zhì)空泡內(nèi)，以膜包裹的包涵體形式繁殖。用法染色，嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體包涵體在胞質(zhì)內(nèi)染成紫色，呈桑葚狀（圖-）1。嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體為專性細(xì)胞內(nèi)寄生菌，缺乏經(jīng)典糖代謝途徑，依賴宿主酶系統(tǒng)進(jìn)行代謝及生長(zhǎng)繁殖，主要侵染人中性粒細(xì)胞。嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的體外分離培養(yǎng)使用人粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系（）,主要存在于細(xì)胞內(nèi)與膜結(jié)構(gòu)相連的空泡內(nèi)，生長(zhǎng)繁殖迅速。其感染的空泡內(nèi)無(wú)查菲埃立克體感染所形成的纖維樣結(jié)構(gòu)。嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體早期的形態(tài)多為圓形、密度較大的網(wǎng)狀體，后期菌體變小且密度增大。嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的外膜比查菲埃立克體外膜有更多的皺折（圖-）2。圖1人血液中性粒細(xì)胞內(nèi)無(wú)形體包涵體（X1000,JSDumler）圖圖1人血液中性粒細(xì)胞內(nèi)無(wú)形體包涵體（X1000,JSDumler）圖2電鏡下的無(wú)形體包涵體（X21960,JSDumler）遺傳及表型特征嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的基因組為1,471個(gè),2堿8基2對(duì)，含量為，含有 個(gè)編碼框（ F特征性基因?yàn)橐?及基因，的%菌株具有基因?yàn)橐?及基因，的%菌株具有的菌株具有基因。（二）流行病學(xué)。1.宿主動(dòng)物與傳播媒介動(dòng)物宿主持續(xù)感染是病原體維持自然循環(huán)的基本條件。國(guó)外報(bào)道，嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的儲(chǔ)存宿主包括白足鼠等野鼠類以及其他動(dòng)物。在歐洲，紅鹿、牛、山羊均可持續(xù)感染嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體。國(guó)外報(bào)道，嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的傳播媒介主要是硬蜱屬的某些種（如肩突硬蜱、篦子硬蜱等）。我國(guó)曾在黑龍江、內(nèi)蒙古及新疆等地的全溝硬蜱中檢測(cè)到嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體核酸。我國(guó)的儲(chǔ)存宿主、媒介種類及其分布尚需做進(jìn)一步調(diào)查。.傳播途徑（1）主要通過(guò)蜱叮咬傳播。蜱叮咬攜帶病原體的宿主動(dòng)物后，再叮咬人時(shí)，病原體可隨之進(jìn)入人體引起發(fā)病。）直接接觸危重病人或帶菌動(dòng)物的血液等體液，有可能會(huì)導(dǎo)致傳播，但具體傳播機(jī)制尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。國(guó)外曾有屠宰場(chǎng)工人因接觸鹿血經(jīng)傷口感染該病的報(bào)道。.人群易感性人對(duì)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體普遍易感，各年齡組均可感染發(fā)病。高危人群主要為接觸蜱等傳播媒介的人群，如疫源地（主要為森林、丘陵地區(qū)）的居民、勞動(dòng)者及旅游者等。與人粒細(xì)胞無(wú)形體病危重患者密切接觸、直接接觸病人血液等體液的醫(yī)務(wù)人員或其陪護(hù)者，如不注意防護(hù)，也有感染的可能。.地理分布和發(fā)病季節(jié)特點(diǎn)目前，已報(bào)道有人粒細(xì)胞無(wú)形體病的國(guó)家有美國(guó)、斯洛文尼亞、法國(guó)、英國(guó)、德國(guó)、澳大利亞、意大利及韓國(guó)等，但僅美國(guó)和斯洛文尼亞分離到病原體。根據(jù)國(guó)外研究，該病與萊姆病的地區(qū)分布相似，我國(guó)萊姆病流行區(qū)亦應(yīng)關(guān)注此病。該病全年均有發(fā)病，發(fā)病高峰為5-1月0。不同國(guó)家的報(bào)道略有差異，多集中在當(dāng)?shù)仳缁顒?dòng)較為活躍的月份。（三）主要病理改變及臨床表現(xiàn)。病理改變包括多臟器周圍血管淋巴組織炎癥浸潤(rùn)、壞死性肝炎、脾及淋巴結(jié)單核吞噬系統(tǒng)增生等，主要與免疫損傷有關(guān)。嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體感染中性粒細(xì)胞后，可影響宿主細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞凋亡，細(xì)胞因子產(chǎn)生紊亂、吞噬功能缺陷，進(jìn)而造成免疫病理?yè)p傷。潛伏期一般為7-1天4（平均9天）。急性起病，主要癥狀為發(fā)熱、全身不適、乏力、頭痛、肌肉酸痛，以及惡心、嘔吐、厭食、腹瀉等。實(shí)驗(yàn)室檢查外周血象白細(xì)胞、血小板降低，肝酶升高。嚴(yán)重者可發(fā)展為多臟器功能衰竭、彌漫性血管內(nèi)凝血，甚至死亡。老年患者及免疫缺陷患者感染本病后病情多較危重。三、診斷、治療和報(bào)告醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)按照《人粒細(xì)胞無(wú)形體病診療方案（試行）》（附件1）做好診斷和治療。同時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)醫(yī)務(wù)人員的個(gè)人防護(hù)和院內(nèi)感染控制工作。各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)符合病例定義的人粒細(xì)胞無(wú)形體病疑似、臨床診斷或確診病例時(shí)，應(yīng)參照乙、丙類傳染病的報(bào)告要求于24小時(shí)內(nèi)通過(guò)國(guó)家疾病監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理系統(tǒng)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)，報(bào)告疾病類別選擇“其它傳染病”。符合《國(guó)家突發(fā)公共衛(wèi)生事件相關(guān)信息報(bào)告管理工作規(guī)范（試行）》要求的，按照相應(yīng)的規(guī)定進(jìn)行報(bào)告。四、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)各級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)專業(yè)人員和臨床醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)疑似病例時(shí)，應(yīng)認(rèn)真按照《人粒細(xì)胞無(wú)形體病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（試行）》（附件3）進(jìn)行標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。省級(jí)實(shí)驗(yàn)室無(wú)檢測(cè)條件或無(wú)法鑒定時(shí)，應(yīng)將原始標(biāo)本及病原分離物送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行檢測(cè)。五、流行病學(xué)調(diào)查疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)接到疫情報(bào)告后，應(yīng)按照《人粒細(xì)胞無(wú)形體病流行病學(xué)調(diào)查方案（試行）》（附件2），立即組織專業(yè)人員開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查，追溯可能的感染來(lái)源，調(diào)查傳播途徑及相關(guān)影響因素，填寫(xiě)《人粒細(xì)胞無(wú)形體病個(gè)案調(diào)查表》（見(jiàn)附件2附表）。出現(xiàn)聚集性病例時(shí)，應(yīng)開(kāi)展病例的主動(dòng)搜索，并通過(guò)對(duì)傳染源、傳播途徑、傳播媒介及相關(guān)影響因素等的調(diào)查分析，及時(shí)提出有針對(duì)性的預(yù)防控制措施。六、專題調(diào)查有條件的地區(qū)，疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)可根據(jù)當(dāng)?shù)匾咔榈奶攸c(diǎn)，參照《人粒細(xì)胞無(wú)形體病專題調(diào)查方案（試行）》（附件4），組織開(kāi)展人群血清流行病學(xué)、宿主動(dòng)物和傳播媒介等方面的專題調(diào)查。七、預(yù)防控制措施（一）做好公眾預(yù)防的指導(dǎo)和健康教育。避免蜱叮咬是降低感染風(fēng)險(xiǎn)的主要措施。預(yù)防該病的主要策略是指導(dǎo)公眾、特別是高危人群減少或避免蜱的暴露。有蜱叮咬史或野外活動(dòng)史者，一旦出現(xiàn)疑似癥狀或體征，應(yīng)及早就醫(yī)，并告知醫(yī)生相關(guān)暴露史。蜱主要棲息在草地、樹(shù)林等環(huán)境中，應(yīng)盡量避免在此類環(huán)境中長(zhǎng)時(shí)間坐臥。如需進(jìn)入此類地區(qū)，尤其是已發(fā)現(xiàn)過(guò)病人的地區(qū)，應(yīng)注意做好個(gè)人防護(hù)，穿著緊口、淺色、光滑的長(zhǎng)袖衣服，可防止蜱的附著或叮咬，且容易發(fā)現(xiàn)附著的蜱。也可在暴露的皮膚和衣服上噴涂避蚊胺（ ）等驅(qū)避劑進(jìn)行防護(hù)。在蜱棲息地活動(dòng)時(shí)或活動(dòng)后，應(yīng)仔細(xì)檢查身體上有無(wú)蜱附著。蜱常附著在人體的頭皮、腰部、腋窩、腹股溝及腳踝下方等部位。如發(fā)現(xiàn)蜱附著在身體上，應(yīng)立即用鑷子等工具將蜱除去。因蜱體上或皮膚破損處的液體可能含有傳染性病原體，不要直接用手將蜱摘除或用手指將蜱捏碎。蜱可寄生在家畜或?qū)櫸锏捏w表。如發(fā)現(xiàn)動(dòng)物體表有蜱寄生時(shí)，應(yīng)減少與動(dòng)物的接觸，避免被蜱叮咬。（二）開(kāi)展醫(yī)療衛(wèi)生專業(yè)人員培訓(xùn)。各地應(yīng)開(kāi)展對(duì)醫(yī)務(wù)人員和疾控人員的培訓(xùn)工作，提高醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)、識(shí)別人粒細(xì)胞無(wú)形體病的能力，規(guī)范其治療行為，以降低病死率；提高疾控人員的流行病學(xué)調(diào)查和疫情處置能力，控制疫情的蔓延和流行。（三）提高實(shí)驗(yàn)室診斷能力。發(fā)現(xiàn)疑似病例時(shí)，應(yīng)及時(shí)采集標(biāo)本開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心應(yīng)逐步提高對(duì)該病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，建立實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的相關(guān)技術(shù)和方法。已發(fā)生或可能發(fā)生疫情的地區(qū)及有條件的地市級(jí)疾病預(yù)防控制中心和醫(yī)療機(jī)構(gòu)也應(yīng)逐步建立該病的實(shí)驗(yàn)室診斷能力。（四）媒介與宿主動(dòng)物的控制。出現(xiàn)暴發(fā)疫情時(shí)，應(yīng)采取滅殺蜱、鼠和環(huán)境清理等措施，降低環(huán)境中蜱和鼠的密度。（五）病人的管理。對(duì)病人的血液、分泌物、排泄物及被其污染的環(huán)境和物品，應(yīng)進(jìn)行消毒處理。一般不需要對(duì)病人實(shí)施隔離。附件：1.人粒細(xì)胞無(wú)形體病診療方案（試行）2.人粒細(xì)胞無(wú)形體病流行病學(xué)調(diào)查方案（試行）3.人粒細(xì)胞無(wú)形體病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（試行）4.人粒細(xì)胞無(wú)形體病專題調(diào)查方案（試行）附件1人粒細(xì)胞無(wú)形體病診療方案

（試行）為指導(dǎo)各地及時(shí)、有效地開(kāi)展人粒細(xì)胞無(wú)形體病的診斷和救治工作，減少危重和死亡病例，防止院內(nèi)感染的發(fā)生，特制定本方案。一、臨床表現(xiàn)潛伏期一般為7-1天4（平均9天）。急性起病，主要癥狀為發(fā)熱（多為持續(xù)性高熱，可高達(dá)40℃以上）、全身不適、乏力、頭痛、肌肉酸痛，以及惡心、嘔吐、厭食、腹瀉等。部分患者伴有咳嗽、咽痛。體格檢查可見(jiàn)表情淡漠，相對(duì)緩脈，少數(shù)病人可有淺表淋巴結(jié)腫大及皮疹。可伴有心、肝、腎等多臟器功能損害，并出現(xiàn)相應(yīng)的臨床表現(xiàn)。重癥患者可有間質(zhì)性肺炎、肺水腫、急性呼吸窘迫綜合癥以及繼發(fā)細(xì)菌、病毒及真菌等感染。少數(shù)病人可因嚴(yán)重的血小板減少及凝血功能異常，出現(xiàn)皮膚、肺、消化道等出血表現(xiàn)，如不及時(shí)救治，可因呼吸衰竭、急性腎衰等多臟器功能衰竭以及彌漫性血管內(nèi)凝血死亡。老年患者、免疫缺陷患者及進(jìn)行激素治療者感染本病后病情多較危重。二、實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查外周血象白細(xì)胞、血小板降低，異型淋巴細(xì)胞增多。合并臟器損害的患者，心、肝、腎功能檢測(cè)異常。病原學(xué)和血清學(xué)檢查陽(yáng)性。其中：血常規(guī)：白細(xì)胞、血小板減少可作為早期診斷的重要線索。病人發(fā)病第一周即表現(xiàn)有白細(xì)胞減少，多為X血小板降低，多為 X。可見(jiàn)異型淋巴細(xì)胞。尿常規(guī)：蛋白尿、血尿、管形尿。血生化檢查:肝、腎功能異常；心肌酶譜升高；少數(shù)患者出現(xiàn)血淀粉酶、尿淀粉酶和血糖升高。部分患者凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)，纖維蛋白原降解產(chǎn)物升高?？捎醒娊赓|(zhì)紊亂，如低鈉、低氯、低鈣等。少數(shù)病人還有膽紅素及血清蛋白降低。三、并發(fā)癥如延誤治療，患者可出現(xiàn)機(jī)會(huì)性感染、敗血癥、中毒性休克、中毒性心肌炎、急性腎衰、呼吸窘迫綜合癥、彌漫性血管內(nèi)凝血及多臟器功能衰竭等，直接影響病情和預(yù)后。四、病例診斷依據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行診斷。（一）流行病學(xué)史。.發(fā)病前2周內(nèi)有被蜱叮咬史;.在有蜱活動(dòng)的丘陵、山區(qū)（林區(qū)）工作或生活史;.直接接觸過(guò)危重患者的血液等體液。（二）臨床表現(xiàn)。急性起病，主要癥狀為發(fā)熱（多為持續(xù)性高熱，可高達(dá)40℃以上）、全身不適、乏力、頭痛、肌肉酸痛，以及惡心、嘔吐、厭食、腹瀉等。個(gè)別重癥病例可出現(xiàn)皮膚瘀斑、出血，伴多臟器損傷、彌漫性血管內(nèi)凝血等。（三）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。1.血常規(guī)及生化檢查（1）早期外周血象白細(xì)胞、血小板降低，嚴(yán)重者呈進(jìn)行性減少，異型淋巴細(xì)胞增多。（2）末梢血涂片鏡檢中性粒細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)桑葚狀包涵體。（）谷丙（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶， ）和或谷草（天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶， ）轉(zhuǎn)氨酶升高。2.血清及病原學(xué)檢測(cè)（）急性期血清間接免疫熒光抗體（ ）檢測(cè)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體 抗體陽(yáng)性。（）急性期血清 檢測(cè)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體 抗體陽(yáng)性。（）恢復(fù)期血清 檢測(cè)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體 抗體滴度較急性期有4倍及以上升高。（）全血或血細(xì)胞標(biāo)本 檢測(cè)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體特異性核酸陽(yáng)性，且序列分析證實(shí)與嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的同源性達(dá)99%以上。（5）分離到病原體。（四）診斷標(biāo)準(zhǔn)。疑似病例：具有上述（一）、（二）項(xiàng)和（三）項(xiàng)1項(xiàng)中的（1）、（3）。部分病例可能無(wú)法獲得明確的流行病學(xué)史。臨床診斷病例：疑似病例同時(shí)具備（三）項(xiàng)1項(xiàng)中的（2），或（三）項(xiàng)2項(xiàng)中的（1）或（2）。確診病例：疑似病例或臨床診斷病例同時(shí)具備（三）項(xiàng)2項(xiàng)中（3）、（4）、（5）中的任一項(xiàng)。五、鑒別診斷（一）與其他蜱傳疾病、立克次體病的鑒別：人單核細(xì)胞埃立克體?。ú钒哒顐?、恙蟲(chóng)病、斑點(diǎn)熱以及萊姆病等。（二）與發(fā)熱、出血及酶學(xué)指標(biāo)升高的感染性疾病的鑒別：主要是病毒性出血性疾病，如流行性出血熱、登革熱等。（三）與發(fā)熱、血白細(xì)胞、血小板降低的胃腸道疾病的鑒別：傷寒、急性胃腸炎、病毒性肝炎。（四）與發(fā)熱及血白細(xì)胞、血小板降低或有出血傾向的內(nèi)科疾病的鑒別：主要是血液系統(tǒng)疾病，如血小板減少性紫癜，粒細(xì)胞減少、骨髓異常增生綜合征?？赏ㄟ^(guò)骨髓穿刺及相應(yīng)病原體檢測(cè)進(jìn)行鑒別。（五）與發(fā)熱伴多項(xiàng)酶學(xué)指標(biāo)升高的內(nèi)科疾病鑒別：主要是免疫系統(tǒng)疾病，如皮肌炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕熱?？赏ㄟ^(guò)自身抗體等免疫學(xué)指標(biāo)進(jìn)行鑒別。（六）其他：如支原體感染、鉤端螺旋體病、鼠咬熱、藥物反應(yīng)等。六、治療及早使用抗生素，避免出現(xiàn)并發(fā)癥。對(duì)疑似病例可進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)性治療。一般慎用激素類藥物，以免加重病情。（一）病原治療。1.四環(huán)素類抗生素（1）強(qiáng)力霉素。為首選藥物，應(yīng)早期、足量使用。成人口服：次1日2次必要時(shí)首劑可加倍。8歲以上兒童常用量：首劑4 ;之后，每次2 1日2次。一般病例口服即可，重癥患者可考慮靜脈給藥。（）四環(huán)素。口服：成人常用量為 次，每小時(shí)次；歲以上兒童常用量為一日 ，分次服用。靜脈滴注：成人一日 ，分次給藥；歲以上兒童為一日 ，分次給藥，每日劑量不超過(guò)。住院患者主張靜脈給藥。四環(huán)素毒副作用較多，孕婦和兒童慎用。強(qiáng)力霉素或四環(huán)素治療療程不少于7天。一般用至退熱后至少3天，或白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)回升，各種酶學(xué)指標(biāo)基本正常，癥狀完全改善。早期使用強(qiáng)力霉素或四環(huán)素等藥物，一般可在24-小4時(shí)8內(nèi)退熱。因人粒細(xì)胞無(wú)形體病臨床表現(xiàn)無(wú)特異性，尚缺乏快速的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，可對(duì)疑似病例進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)性治療，一般用藥3-天4仍不見(jiàn)效者，可考慮排除人粒細(xì)胞無(wú)形體病的診斷。2．利福平：兒童、對(duì)強(qiáng)力霉素過(guò)敏或不宜使用四環(huán)素類抗生素者選用利福平。成人 ，兒童 ，每日一次口服。3．喹諾酮類：如左氧氟沙星等?；前奉愃幱写龠M(jìn)病原體繁殖作用，應(yīng)禁用。（二）一般治療。患者應(yīng)臥床休息，高熱量、適量維生素、流食或半流食，多飲水，注意口腔衛(wèi)生，保持皮膚清潔。對(duì)病情較重患者，應(yīng)補(bǔ)充足夠的液體和電解質(zhì)，以保持水、電解質(zhì)和酸堿平衡；體弱或營(yíng)養(yǎng)不良、低蛋白血癥者可給予胃腸營(yíng)養(yǎng)、新鮮血漿、白蛋白、丙種球蛋白等治療，以改善全身機(jī)能狀態(tài)、提高機(jī)體抵抗力。（三）對(duì)癥支持治療。.對(duì)高熱者可物理降溫，必要時(shí)使用藥物退熱。.對(duì)有明顯出血者，可輸血小板、血漿。.對(duì)合并有彌漫性血管內(nèi)凝血者，可早期使用肝素。.對(duì)粒細(xì)胞嚴(yán)重低下患者，可用粒細(xì)胞集落刺激因子。.對(duì)少尿患者，應(yīng)堿化尿液，注意監(jiān)測(cè)血壓和血容量變化。對(duì)足量補(bǔ)液后仍少尿者，可用利尿劑。如出現(xiàn)急性腎衰時(shí)，可進(jìn)行相應(yīng)處理。.心功能不全者，應(yīng)絕對(duì)臥床休息，可用強(qiáng)心藥、利尿劑控制心衰。.應(yīng)慎用激素。國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道，人粒細(xì)胞無(wú)形體病患者使用糖皮質(zhì)激素后可能會(huì)加重病情并增強(qiáng)疾病的傳染性，故應(yīng)慎用。對(duì)中毒癥狀明顯的重癥患者，在使用有效抗生素進(jìn)行治療的情況下，可適當(dāng)使用糖皮質(zhì)激素。（四）隔離及防護(hù)。對(duì)于一般病例，按照蟲(chóng)媒傳染病進(jìn)行常規(guī)防護(hù)。在治療或護(hù)理危重病人時(shí)，尤其病人有出血現(xiàn)象時(shí)，醫(yī)務(wù)人員及陪護(hù)人員應(yīng)加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)。做好病人血液、分泌物、排泄物及其污染環(huán)境和物品的消毒處理。（五）出院標(biāo)準(zhǔn)。體溫正常、癥狀消失、臨床實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)基本正常或明顯改善后，可出院。（六）預(yù)后。據(jù)國(guó)外報(bào)道，病死率低于1%。如能及時(shí)處理，絕大多數(shù)患者預(yù)后良好。如出現(xiàn)敗血癥、中毒性休克、中毒性心肌炎、急性腎衰、呼吸窘迫綜合癥、彌漫性血管內(nèi)凝血及多臟器功能衰竭等嚴(yán)重并發(fā)癥的患者，易導(dǎo)致死亡。附件人粒細(xì)胞無(wú)形體病流行病學(xué)調(diào)查方案（試行）為做好人粒細(xì)胞無(wú)形體病疫情的流行病學(xué)調(diào)查，準(zhǔn)確描述和分析疫情特征，科學(xué)制訂防控策略和措施，特制定本方案。一、調(diào)查目的（一）為病例的核實(shí)診斷提供流行病學(xué)證據(jù)。（二）為了解該病在我國(guó)的流行病學(xué)及臨床特征積累數(shù)據(jù)。二、調(diào)查對(duì)象（一）散發(fā)病例：包括疑似病例、臨床診斷病例、實(shí)驗(yàn)室確診病例。（二）聚集性病例：在同一村莊，或在同一山坡、樹(shù)林、茶園、景區(qū)等地勞動(dòng)或旅游的人員中，2周內(nèi)出現(xiàn)2例及以上人粒細(xì)胞無(wú)形體病（疑似）病例，或在病例的密切接觸者中出現(xiàn)類似病例。三、調(diào)查內(nèi)容和方法（一）個(gè)案調(diào)查和標(biāo)本采集。發(fā)現(xiàn)人粒細(xì)胞無(wú)形體病病例后，應(yīng)及時(shí)開(kāi)展流行病學(xué)個(gè)案調(diào)查。調(diào)查內(nèi)容包括病例的基本情況、家庭及居住環(huán)境、暴露史、發(fā)病經(jīng)過(guò)、就診情況、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、診斷、轉(zhuǎn)歸、密切接觸者情況等（見(jiàn)附表《人粒細(xì)胞無(wú)形體病個(gè)案調(diào)查表》），并采集相關(guān)標(biāo)本（見(jiàn)附件3《人粒細(xì)胞無(wú)形體病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（試行）》）。1.基本情況包括年齡、性別、住址、職業(yè)、文化程度、旅行史等。2．臨床資料通過(guò)查閱病歷及化驗(yàn)記錄、詢問(wèn)經(jīng)治醫(yī)生及病例、病例家屬等方法，詳細(xì)了解病例的發(fā)病經(jīng)過(guò)、就診情況、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果、診斷、治療、疾病進(jìn)展、轉(zhuǎn)歸等情況。.病例家庭及居住環(huán)境情況通過(guò)詢問(wèn)及現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，了解病例及其家庭成員情況、家庭居住位置、環(huán)境、家禽及家畜飼養(yǎng)情況等。.暴露史及病例發(fā)病前活動(dòng)范圍詢問(wèn)病例發(fā)病前2周內(nèi)勞動(dòng)、旅行或可疑暴露史，了解其是否到過(guò)有蜱生長(zhǎng)的場(chǎng)所，是否有蜱叮咬史。詢問(wèn)病例發(fā)病前2周內(nèi)與類似病例的接觸情況，包括接觸時(shí)間、方式、頻率、地點(diǎn)、接觸時(shí)采取的防護(hù)措施等。5.密切接觸者如病例出現(xiàn)出血并污染周圍環(huán)境、物品時(shí)，應(yīng)對(duì)醫(yī)務(wù)人員、陪護(hù)人員或其他密切接觸者開(kāi)展追蹤調(diào)查，必要時(shí)應(yīng)采集相關(guān)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。（二）聚集性病例的調(diào)查。在出現(xiàn)聚集性病例或暴發(fā)疫情時(shí)，應(yīng)注意調(diào)查感染來(lái)源。如懷疑有人傳人可能時(shí)，應(yīng)評(píng)估人群感染及人傳人的風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)組織疾控人員或醫(yī)務(wù)人員，采用查看當(dāng)?shù)蒯t(yī)療機(jī)構(gòu)門(mén)診日志、住院病歷等臨床資料、入戶調(diào)查等方式，開(kāi)展病例的主動(dòng)搜索，并對(duì)搜索出的疑似病例進(jìn)行篩查、隨訪。追蹤疑似病例、臨床診斷病例及實(shí)驗(yàn)室確診病例的密切接觸者，必要時(shí)采集相關(guān)樣本進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)查閱資料、咨詢當(dāng)?shù)叵嚓P(guān)部門(mén)等方法，了解當(dāng)?shù)刈匀簧鷳B(tài)環(huán)境、媒介分布，以及相關(guān)的人口、氣象、生產(chǎn)、生活資料等情況。四、調(diào)查要求（一）調(diào)查者及調(diào)查對(duì)象。應(yīng)由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的縣（區(qū)）級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)專業(yè)人員擔(dān)任調(diào)查員?，F(xiàn)場(chǎng)調(diào)查時(shí)，應(yīng)盡可能直接對(duì)病人進(jìn)行訪視、詢問(wèn)。如病人病情較重，或病人已死亡，或其他原因無(wú)法直接調(diào)查時(shí)，可通過(guò)其醫(yī)生、親友、同事或其他知情者進(jìn)行調(diào)查、核實(shí)或補(bǔ)充。（二）調(diào)查時(shí)間及調(diào)查內(nèi)容。應(yīng)在接到疫情報(bào)告后迅速開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容見(jiàn)附表《人粒細(xì)胞無(wú)形體病個(gè)案調(diào)查表》。調(diào)查表應(yīng)填寫(xiě)完整，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果、病人轉(zhuǎn)歸等情況應(yīng)及時(shí)填補(bǔ)到調(diào)查表中，以完善相關(guān)信息。（三）調(diào)查者的個(gè)人防護(hù)。在流行病學(xué)調(diào)查及標(biāo)本采集過(guò)程中，調(diào)查者應(yīng)采取相應(yīng)的個(gè)人防護(hù)措施，尤其應(yīng)注意避免被蜱叮咬或直接接觸病人的血液、分泌物或排泄物等。五、調(diào)查資料的分析、總結(jié)和利用（一）在疫情調(diào)查處理進(jìn)程中或結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)對(duì)流行病學(xué)資料進(jìn)行整理、分析，撰寫(xiě)流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告，并及時(shí)向上級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)及同級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)報(bào)告。（二）疫情調(diào)查結(jié)束后，各省級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)應(yīng)及時(shí)將人粒細(xì)胞無(wú)形體病流行病學(xué)個(gè)案調(diào)查表及流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告上報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。（三）疫情調(diào)查結(jié)束后，各地疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)應(yīng)將流行病學(xué)調(diào)查的原始資料、分析結(jié)果及調(diào)查報(bào)告及時(shí)整理歸檔。附表附表人粒細(xì)胞無(wú)形體病個(gè)案調(diào)查表編碼□□□□□□□□一般情況姓名：(14歲以下同時(shí)填寫(xiě)家長(zhǎng)姓名)性別：①男②女□1.3出生日期：年月日(若無(wú)詳細(xì)日期,填寫(xiě)實(shí)足年齡一歲)1.4職業(yè)：(1)幼托兒童 (1)幼托兒童 (2)散居兒童(6)餐飲業(yè) (7)公共場(chǎng)所服務(wù)業(yè)(9)醫(yī)務(wù)人員 (13)干部職員(16)林業(yè) (20)采茶(19)銷售/加工野生動(dòng)物(22)不詳 (23)其他1.5工作單位： (3)學(xué)生 (4)教師 (5)保育員/保姆(8)商業(yè)服務(wù)業(yè)(17)旅游服務(wù)業(yè)(10)工人 (11)民工 (12)農(nóng)民(21)牧民 (18)狩獵(14)離退人員(15)家務(wù)待業(yè)□現(xiàn)住址：省市(地、州)縣(市、區(qū))鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道) 村(居委會(huì))組(門(mén)牌)聯(lián)系電話：聯(lián)系人：與患者關(guān)系：發(fā)病情況發(fā)病時(shí)間：年月日2.2就診情況^診次數(shù)^診日期就診醫(yī)療機(jī)構(gòu)^斷使用抗生素名稱使用激素名稱第1次第2次第3次第4次現(xiàn)住醫(yī)院入院時(shí)間：年月日住院號(hào)： 入院診斷： 是否出院:①是 ②否 口如已出院：出院診斷： 出院時(shí)間：年月日本次調(diào)查時(shí)病人情況：①痊愈②好轉(zhuǎn)③惡化④死亡2.8最后轉(zhuǎn)歸：2.8最后轉(zhuǎn)歸：①痊愈②死亡③其它臨床表現(xiàn)首發(fā)癥狀、體征： 主要癥狀、體征：3.2.1發(fā)熱 最高：℃入院時(shí)：℃□3.2.2畏寒 ①有②無(wú)□3.2.3頭痛 ①有②無(wú)□3.2.4頭暈 ①有②無(wú)□3.2.5乏力 ①有②無(wú)□3.2.6全身酸痛①有②無(wú)□3.2.7淋巴結(jié)腫大①有②無(wú)□3.2.7.1若有，月腫大部位及大?。?.2.8鞏膜黃染①有②無(wú)□3.2.8.1若有，出現(xiàn)時(shí)間：. 年—_月 日3.2.9眼結(jié)膜充①有②無(wú)□3.2.10皮膚淤點(diǎn)①有②無(wú)□3.2.10.1若有,出現(xiàn)部位：3.2.10.2出現(xiàn)時(shí)間： 一年 月——日3.2.11皮膚淤斑①有②無(wú)□3.2.11.1若有,出現(xiàn)部位：3.2.11.2出現(xiàn)時(shí)間： 一年 月——日3.2.12牙齦出血①有②無(wú)□3.2.13有無(wú)皮疹①有②無(wú)□3.2.13.1若有,出現(xiàn)部位：3.2.13.2皮疹性質(zhì)：3.2.13.3出現(xiàn)時(shí)間： 一年 月——日3.3呼吸系統(tǒng)癥狀3.3.1咳嗽①有②無(wú)□3.3.2咳痰①有②無(wú)□3.3.3咯血①有②無(wú)□3.3.4呼吸困難①有②無(wú)□3.4消化系統(tǒng)癥狀3.4.1食欲減退①輕度②厭食③無(wú)□3.4.2惡心①有②無(wú)□3.4.3嘔吐①有②無(wú)□3.4.4嘔血①有②無(wú)□3.4.5腹痛①有②無(wú)□

3.4.5.1腹痛部位①上腹部②下腹部③其它—□3.4.5.2腹痛性質(zhì)①絞痛②灼燒樣痛③鈍痛④壓痛⑤其它—□3.4.6腹脹①有②無(wú)□3.4.7腹瀉①有，—次/天 ②無(wú)□3.4.8大便性狀①血便②黑便③水樣便④其它_ □3.4.9口腔潰瘍①有3.5運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)癥狀②無(wú)□3.5.1關(guān)節(jié)疼痛①有3.5.1.1部位：②無(wú)□3.5.2肌肉疼痛①有3.5.2.1部位：②無(wú)□3.6循環(huán)系統(tǒng)癥狀3.6.1心慌 ①有②無(wú)□3.6.2相對(duì)緩脈①有②無(wú)□3.6.3胸悶 ①有②無(wú)□3.6.4胸痛 ①有3.7泌尿系統(tǒng)癥狀②無(wú)□3.7.1尿急、尿頻①有②無(wú)□3.7.2腎區(qū)疼痛①有3.8精神神經(jīng)癥狀②無(wú)□3.8.1表情淡漠①有②無(wú)□3.8.2煩躁 ①有②無(wú)□3.8.3抽搐 ①有②無(wú)□3.8.4昏迷 ①有3.9其它：②無(wú)□4實(shí)驗(yàn)室檢查4.1血常規(guī)序次檢查日期WBC(109/L)N(%)L(%)異型淋巴細(xì)胞PLT(109/L)檢測(cè)單位4.3肝功能

4.4其它檢測(cè)序次檢查日期X一線腎功能血糖出凝血時(shí)間其他檢炳立4.5血清學(xué)和病原學(xué)檢查標(biāo)本類型采集時(shí)間檢測(cè)時(shí)間檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)單位5住院用藥情況（抗生素、激素、生白藥）用藥名稱劑量起始日期終止日期6流行病學(xué)調(diào)查6.1發(fā)病前兩周活動(dòng)史日期所到地點(diǎn)從事活動(dòng)種類1頻次累計(jì)停留時(shí)間（小時(shí)）暴露方式2注：1.活動(dòng)種類（可重復(fù)、多選）：①采茶②割草③打獵④放牧TOC\o"1-5"\h\z⑤采伐⑥旅游⑦其它： □2.暴露方式:①草地休息②草叢、灌木叢行走③與動(dòng)物接觸④其它□當(dāng)?shù)厥欠裼序纾绲漠?dāng)?shù)厮酌?）：①有 ②無(wú) ③不知道 口是否見(jiàn)過(guò)蜱（蜱的當(dāng)?shù)厮酌海孩偈?②否 ③不認(rèn)識(shí) 口若見(jiàn)過(guò)，地點(diǎn)： 是否被蜱叮咬過(guò)①是②否③不知道 口若被叮咬過(guò)，時(shí)間及次數(shù)：①1個(gè)月前，次數(shù)

②1個(gè)月內(nèi)，次數(shù)第一次叮咬時(shí)間：年月日第二次叮咬時(shí)間：年月日叮咬部位（可多選）：①腳②腿③腹部④背部⑤頸部⑥其他口TOC\o"1-5"\h\z叮咬時(shí)有無(wú)疼痛感？①有②無(wú) 口發(fā)病前兩周有無(wú)皮膚破損：①有②無(wú) □是否聽(tīng)說(shuō)過(guò)類似病例： ①是②否 □若聽(tīng)說(shuō)過(guò)，病例姓名：病例具體住址： 姓名性別年齡現(xiàn)住址關(guān)系姓名性別年齡現(xiàn)住址關(guān)系診斷接觸時(shí)間（最早?最晚）接觸頻次接觸方式聯(lián)系方式6.7發(fā)病前是否接觸過(guò)類似病人：①是②否 □6.7.1所接觸病人情況注：接觸方式（可多選）：①直接接觸病人血液 ②直接接觸病人分泌物、排泄物③救治/護(hù)理④同處一室 ⑤其它（在表中注明） 口所接觸病人情況6.8飼養(yǎng)與接觸動(dòng)物情況動(dòng)物種類數(shù)量動(dòng)物身上是否有蜱附著發(fā)病前2周是否與動(dòng)物接觸TOC\o"1-5"\h\z患者家庭居住地地理環(huán)境描述（地形地貌及附近有無(wú)蜱類生長(zhǎng)）住宅周圍環(huán)境有無(wú)雜草灌木生長(zhǎng)： ①有②無(wú) □住室內(nèi)衛(wèi)生狀況： ①好②一般③差 □病前一個(gè)月家中是否發(fā)現(xiàn)過(guò)老鼠？ ①有②無(wú)③不知道 □病前一個(gè)月內(nèi)是否接觸其它野生動(dòng)物？①是②否③不知道 口如是，接觸時(shí)間：年月日接觸方式： 7.調(diào)查小結(jié)：調(diào)查單位： 調(diào)查人員簽名： 調(diào)查時(shí)間：年月日附件人粒細(xì)胞無(wú)形體病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（試行）為保證及時(shí)、科學(xué)地采集、運(yùn)送人粒細(xì)胞無(wú)形體病病例（包括疑似病例）及疫源地調(diào)查的各種類型標(biāo)本，規(guī)范人粒細(xì)胞無(wú)形體病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)程序，提高檢測(cè)質(zhì)量，為明確診斷或開(kāi)展相關(guān)的科學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，特制定本方案。一、樣本采集對(duì)象人粒細(xì)胞無(wú)形體病病例（包括疑似病例，以下同）。病例密切接觸者或其他健康人群。疫源地可疑宿主動(dòng)物（野生動(dòng)物及狗、羊、牛等家畜）、媒介蜱。二、標(biāo)本種類及采集方法（一）抗凝血。常用 抗凝管或枸櫞酸鹽抗凝管采集血液 ，用于病原分離。應(yīng)盡可能在病人使用抗生素前進(jìn)行血液的采集。（二）非抗凝血。用無(wú)菌真空管，采集病例、健康人群及宿主動(dòng)物非抗凝血 ，用于血清抗體及 檢測(cè)。采集后，應(yīng)及時(shí)分離

血清，將血清、血球分別保存。急性期抗體及 檢測(cè)用血液采集盡可能在發(fā)病后1周內(nèi)，恢復(fù)期抗體檢測(cè)標(biāo)本采集至少間隔2-周3。如第2份血清在1個(gè)月之內(nèi)抗體升高不明顯的，應(yīng)建議間隔2-周4后采集第3份血液標(biāo)本。（三）包涵體檢測(cè)血涂片的制備。采集血液標(biāo)本后，制作厚血片，進(jìn)行紅細(xì)胞裂解處理等。（四）媒介蜱標(biāo)本的采集。采集動(dòng)物體表媒介蜱，用鑷子夾取，放入鋪墊有潮濕濾紙或紗布的青霉素小瓶或試管中，用紗布包緊瓶口以防止蜱爬出。實(shí)驗(yàn)室接到蜱標(biāo)本后，首先應(yīng)進(jìn)行種屬鑒定，然后按類別分組（只蜱組），采用 酒精浸泡 后，用無(wú)菌蒸餾水反復(fù)沖洗次。最后進(jìn)行分組研磨，研磨液用于無(wú)菌蒸餾水反復(fù)沖洗次。最后進(jìn)行分組研磨，研磨液用于提取 ，進(jìn)行 擴(kuò)增。（五）有條件時(shí)，可采集活檢或尸檢標(biāo)本，冰凍、福爾馬林固定或石蠟包埋后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。具體方法參照病理實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求和衛(wèi)生部《傳染病人或疑似傳染病人尸體解剖查驗(yàn)規(guī)定》的相關(guān)要求。三、標(biāo)本采集和保存注意事項(xiàng)標(biāo)本采集應(yīng)符合無(wú)菌操作要求。抗凝血如不能立即床邊接種，應(yīng)置于4℃環(huán)境保存，避免冰凍（不超過(guò)2周）。非抗凝血應(yīng)及時(shí)進(jìn)行無(wú)菌分離血清，血清用于抗體檢測(cè)，血球部分研磨后提取 用于 檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè)，可暫置于－20℃環(huán)境保存。所有標(biāo)本應(yīng)置入大小適合、帶螺旋蓋、內(nèi)有墊圈的凍存管內(nèi)，擰緊管口。標(biāo)本采集后，應(yīng)認(rèn)真填寫(xiě)采樣登記表。四、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)（一）包涵體的檢測(cè)。1.血片及白細(xì)胞涂片制備采集的抗凝血標(biāo)本盡快用血球?qū)油蒲?，待干燥后冷丙酮固?；或提取抗凝血中的白細(xì)胞并進(jìn)行涂片，待干燥后冷丙酮固定。2.染色通常采用瑞氏（ ）染色法、姬氏染色法及瑞-姬混合染色法。有條件的實(shí)驗(yàn)室，可使用美國(guó)推薦的染色方法。3.染液配置方法（）瑞-姬染液：取瑞氏染料和姬氏染料各，以甲醇研溶，加甲醇保存，每天搖勻1次，1周后可使用。（）改良 法瑞-姬染色劑： 甘油（分析純）中加入磷酸鹽緩沖液（ 和 ）g以 蒸餾水溶解， ℃水浴 溶解混勻，用濾紙過(guò)濾，保存于密封的棕色瓶中備用。上述甘油緩沖液加瑞-姬染色劑 ，混勻后備用。4.染色步驟血推片或白細(xì)胞涂片分別以兩種染色劑染色 ，再加蒸餾水作用 ，用自來(lái)水沖洗。5.結(jié)果觀察中性粒細(xì)胞中可見(jiàn)桑葚狀包涵體（見(jiàn)圖1），并注意保存相關(guān)標(biāo)本，以便進(jìn)行復(fù)核。（二）血清學(xué)檢測(cè)。常用血清學(xué)方法為間接免疫熒光（）法。采集急性期（發(fā)熱初期，一般發(fā)病1周內(nèi)）與恢復(fù)期（至少間隔2-周）雙份血清。如恢復(fù)期血清抗體檢測(cè)陰性，應(yīng)建議醫(yī)生采集第3份血液樣本（間隔2-周4）。.試劑使用國(guó)際推薦的、經(jīng)過(guò) 質(zhì)量認(rèn)證的產(chǎn)品。.方法及操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。.結(jié)果解釋檢測(cè)結(jié)果解釋按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。如果同時(shí)檢測(cè)雙份血清，抗體倍升高，則結(jié)果強(qiáng)烈支持嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體感染。如果急性期抗體升高，而恢復(fù)期沒(méi)有升高或輕微升高，則應(yīng)采集第3份血液樣本（間隔2-周4）進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。（三）嗜粒細(xì)胞無(wú)形體核酸 檢測(cè)。目前，國(guó)際推薦使用 基因檢測(cè)方法，有條件

的實(shí)驗(yàn)室，可進(jìn)一步選用熱休克蛋白基因擴(kuò)增方法。的實(shí)驗(yàn)室，可進(jìn)一步選用熱休克蛋白基因擴(kuò)增方法。提取用急性期、未使用抗生素的抗凝血或非抗凝血血球部分、白細(xì)胞及蜱研磨液提取。最后，以緩沖液0抽濾以提高回收的濃度。如采用血液白細(xì)胞層提取，可明顯提高陽(yáng)性檢出率。實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)采集當(dāng)?shù)卣Ｈ搜和瑫r(shí)提取，作為的陰性對(duì)照。擴(kuò)增（） 基因檢測(cè)： 高度保守，是檢測(cè)最常用的擴(kuò)增靶基因，巢式檢測(cè)可提高檢測(cè)靈敏度和特異度，采用屬特異及種特異引物同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)應(yīng)分區(qū)進(jìn)行，避免污染。使用引物序列見(jiàn)表。表巢式 檢測(cè)無(wú)形體及埃立克體 基因常用引物引物名稱序歹u片段長(zhǎng)度Eh-out1(AF414399)5'-TTGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACG-3'653Eh-out2(AF414399)5'-CACCTCTACACTAGGAATTCCGCTATC-3'Eh-gs1(AF414399)5'-GTAATACTGTATAATCCCTG-3'282Eh-gs2(AF414399)5'-GTACCGTCATTATCTTCCCTA-3'HGA15'-GTCGAACGGATTATTCTTTATAGCTTG-3'389HGA25'-TATAGGTACCGTCATTATCTTCCCTAC-3'反應(yīng)混合物的準(zhǔn)備按常規(guī)進(jìn)行。第一輪反應(yīng)采用外引物對(duì)和 ，模板0（白細(xì)胞提取的可適當(dāng)減少）b 反應(yīng)體系總體積為 5或0（需

要進(jìn)行測(cè)序或克隆時(shí)，應(yīng)適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系），其它成分的濃度按常規(guī)進(jìn)行。反應(yīng)程序如下：94℃5min40循環(huán)：94℃45sec55℃50sec72℃1min72℃總延伸5min第二輪反應(yīng)使用對(duì)引物分別進(jìn)行巢式R對(duì)引物分別是無(wú)形體屬及埃立克體屬通用內(nèi)引物（ g工以及種特異性引物（及2檢測(cè)樣本取第一輪產(chǎn)物-為模板陽(yáng)性對(duì)照取.為模板。反應(yīng)程序同第一輪反應(yīng)。（）熱休克蛋白基因擴(kuò)增與 基因的應(yīng)用相比，基因的應(yīng)用更為與 基因的應(yīng)用相比，基因的應(yīng)用更為廣泛，但 基因在不同種屬間具有較大的變異性。因此，對(duì)于診斷及菌株的鑒定，基因均具有重要意義。該基對(duì)于診斷及菌株的鑒定，基因均具有重要意義。該基因擴(kuò)增使用巢式 ，引物序列見(jiàn)表。表 基因擴(kuò)增常用引物引物名稱序歹U退火溫度片段長(zhǎng)度HS15'-TGGGCTGGTA（A/C）TGAAAT52℃1431HS65'-CCICCIGGIACIA（C/T）ACCTTCHS435'-AT（A/T）GC（A/T）AA（G/A）GAAGCATAGTC55℃HGA480HS455'-ACTTCACG（C/T）（C/T）TCATAGACHME528

提取同上。檢測(cè)時(shí)，反應(yīng)混合物的準(zhǔn)備按常規(guī)進(jìn)行。 模板量同基因檢測(cè)。巢式第一輪反應(yīng)采用外引物對(duì) 及提取同上。檢測(cè)時(shí)，反應(yīng)混合物的準(zhǔn)備按常規(guī)進(jìn)行。 模板量同基因檢測(cè)。巢式第反應(yīng)程序如下：循環(huán)：循環(huán)：4℃循環(huán)：循環(huán)：8℃0℃8℃2℃0℃第二輪引物采用及。檢測(cè)樣本取第一8℃總延伸第二輪引物采用及。檢測(cè)樣本取第一輪產(chǎn)物-為模板，陽(yáng)性對(duì)照取.為模板。反應(yīng)程序同第一輪反應(yīng)。反應(yīng)程序同第一輪反應(yīng)，但退火溫度由52℃改為55℃。3．測(cè)序及分析對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序并進(jìn)行同源比較，分析當(dāng)?shù)亓餍兄昱c其它地區(qū)的變異性。（四）病原體分離培養(yǎng)。多用進(jìn)行嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的分離培養(yǎng)。最常用的分離方法是將白細(xì)胞部分接種培養(yǎng)基，然后將 N抗凝血接種到懸浮有X或X細(xì)胞內(nèi)每天染色檢查包涵體，一般5-1天0可查見(jiàn)包涵體。由于分離可能受到紅細(xì)胞的影響，因此，建議使用以下方法：白細(xì)胞分離：采用密度梯度離心方法（ -一般采用抗凝血用倍體積的無(wú)菌一般采用抗凝血用倍體積的無(wú)菌衡鹽溶液稀釋最后采用 （ ， ）密度梯度離心分離白細(xì)胞，可以獲得較高的白細(xì)胞，用以分離A采用白細(xì)胞分離方法進(jìn)行接種時(shí)，應(yīng)注意防止操作過(guò)程中的污染。紅細(xì)胞裂解后收集白細(xì)胞（ 裂解法）b3.在使用含有紅細(xì)胞的標(biāo)本培養(yǎng)后，另加入宿主未感染的細(xì)胞，建立混合培養(yǎng)。血液白細(xì)胞懸浮于體積、含有胎牛血清的培養(yǎng)基中且在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)與培養(yǎng)細(xì)胞作用小時(shí)?！妗l件下振搖孵育，可增加病原體與細(xì)胞的作用。病原體的鑒定：可通過(guò)種特異引物進(jìn)行 鑒定。五、生物安全在標(biāo)本采集、運(yùn)輸及實(shí)驗(yàn)室工作過(guò)程中，生物安全應(yīng)參照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)要求進(jìn)行。（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全。標(biāo)本滅活、病原標(biāo)本提取及病原體分離操作應(yīng)在生物安全I(xiàn)I級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。非感染性材料的檢測(cè)可在生物安全級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。（二）血液標(biāo)本采集安全注意事項(xiàng)。采集病例的標(biāo)本時(shí)，應(yīng)做好個(gè)人防護(hù)。采集者應(yīng)戴乳膠手套，盡量避免病例的血液外溢或直接接觸。如發(fā)生血液外溢污染環(huán)境時(shí)，應(yīng)及時(shí)采用75%酒精或常用消毒劑進(jìn)行消毒處理。應(yīng)按照對(duì)傳染性樣本的要求，對(duì)采集標(biāo)本的器具及病人止血棉球及時(shí)進(jìn)行消毒處理。防止銳器扎傷皮膚，一旦發(fā)生，應(yīng)按臨床外科要求，及時(shí)進(jìn)行傷口清創(chuàng)。如直接沾染了臨床診斷病例或確診病例的血液，除及時(shí)消毒皮膚外，應(yīng)口服強(qiáng)力霉素預(yù)防感染，服用劑量參照《人粒細(xì)胞無(wú)形體病診療方案（試行）》（附件1）。（三）采集動(dòng)物宿主與媒介蜱標(biāo)本個(gè)人防護(hù)。野外采集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)穿著顏色明亮的防護(hù)服，并將衣袖或褲管口扎緊以防蜱叮咬人體，且容易發(fā)現(xiàn)蜱的附著。一旦發(fā)現(xiàn)有蜱附著體表，應(yīng)用鑷子夾取，不要用手直接摘除。野外作業(yè)或活動(dòng)的人員可使用驅(qū)避劑或防蚊油噴涂皮膚，也可用硫化鉀代替防蚊油。（四）標(biāo)本運(yùn)輸安全注意事項(xiàng)。應(yīng)參照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)要求（類）進(jìn)行。（五）在診療及標(biāo)本的采集、包裝和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等過(guò)程中所產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，應(yīng)按照《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》和《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》等相關(guān)規(guī)定處理。附件4人粒細(xì)胞無(wú)形體病專題調(diào)查方案（試行）為指導(dǎo)發(fā)生疫情的地區(qū)開(kāi)展人粒細(xì)胞無(wú)形體病的調(diào)查，增進(jìn)對(duì)該病病原學(xué)、傳播機(jī)制、危險(xiǎn)因素及臨床診斷等的認(rèn)識(shí)，為制訂相應(yīng)的防控策略和措施提供科學(xué)依據(jù)，特制訂本方案。一、調(diào)查目的（一）了解人粒細(xì)胞無(wú)形體病疫區(qū)人群感染狀況及抗體水平。（二）了解人粒細(xì)胞無(wú)形體病主要的潛在傳播媒介的種類、分布及帶菌狀況。（三）了解人粒細(xì)胞無(wú)形體病常見(jiàn)的動(dòng)物宿主種類、分布及帶菌狀況。二、調(diào)查內(nèi)容與方法（一）血清流行病學(xué)調(diào)查。1.調(diào)查對(duì)象（1）可能暴露者：與患者有類似暴露史的人員（暴露于有可疑野生動(dòng)物或蜱的生境）。（2）密切接觸者：與患者密切接觸者（參與救治的醫(yī)護(hù)人員、護(hù)理患者的家屬等）。（3）一般人群：與患者無(wú)密切接觸，也無(wú)可疑生境暴露者。2.標(biāo)本采集對(duì)所有密切接觸者應(yīng)采集雙份血清，間隔3-周4，另應(yīng)采集可能暴露者及一般人群血清各30-份5。0每次采集靜脈血，分離血清送檢。血清標(biāo)本的包裝、貯存及運(yùn)送見(jiàn)《人粒細(xì)胞無(wú)形體病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（試行）》（附件3）。3.標(biāo)本檢測(cè)采集的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送有條件的省級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行抗體檢測(cè)。如當(dāng)?shù)責(zé)o檢測(cè)條件，應(yīng)送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)方法及注意事項(xiàng)見(jiàn)《人粒細(xì)胞無(wú)形體病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（試行）》（附件3）。（二）宿主動(dòng)物調(diào)查。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查的線索，確定是否進(jìn)行宿主動(dòng)物的調(diào)查。.調(diào)查地點(diǎn)和時(shí)間在病例可能感染的地點(diǎn)，或根據(jù)當(dāng)?shù)氐牡乩砭坝^，選擇宿主動(dòng)物調(diào)查的地點(diǎn)。調(diào)查時(shí)間可選擇在疫情發(fā)生后或宿主動(dòng)物活動(dòng)高峰季節(jié)。.捕獲方法（1）居民區(qū)采用籠夜法。在鼠類經(jīng)常出沒(méi)的場(chǎng)所，于傍晚時(shí)在每 的房間放置鼠籠一個(gè)，并做好標(biāo)記。誘餌用花生米或油條、油餅等（同一地區(qū)應(yīng)選用同一種誘餌）。次日清晨取回鼠籠，將捕獲鼠的鼠籠放入布鼠袋內(nèi)，系緊袋口，做好記錄，并編號(hào)。（2）野外采用夾（籠）夜法。在有鼠活動(dòng)的場(chǎng)所，于傍晚時(shí)布放鼠夾（籠），夾（籠）的行距應(yīng)在以上，夾（籠）間距為，并做好標(biāo)記。誘餌應(yīng)統(tǒng)一。次日清晨取回夾（籠），將捕獲鼠放入布鼠袋內(nèi)，系緊袋口，做好標(biāo)記，并編號(hào)。如捕白天活動(dòng)的鼠，采用夾（籠）日法。（3）鼠類以外的其它野生宿主動(dòng)物（如野兔等）可通過(guò)有關(guān)渠道獲取。標(biāo)本處理（1）采集動(dòng)物血標(biāo)本待檢。（2）解剖前，將所捕宿主動(dòng)物（如鼠等）置于密閉容器內(nèi)，用乙醚深度麻醉。將動(dòng)物（鼠）置于白瓷盤(pán)中，先用鑷子夾取盤(pán)中和動(dòng)物（鼠）體表的寄生物，如蜱、螨、蚤等，寄生物按鼠只分別置入盛有75％酒精的密閉容器中，并標(biāo)記相應(yīng)鼠只的編號(hào)；然后，采用無(wú)菌方法解剖動(dòng)物（鼠），取其脾、肝、腎標(biāo)本，置入相應(yīng)編號(hào)的無(wú)菌凍存管內(nèi)，于液氮罐內(nèi)保存。無(wú)液氮罐保存條件的，應(yīng)置－20℃環(huán)境保存。上述標(biāo)本送回實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)盡快檢測(cè)。否則，應(yīng)置－80℃超低溫、或－20℃低溫冰箱內(nèi)保存。．動(dòng)物的分類、鑒定

參考《醫(yī)學(xué)動(dòng)物鑒定手冊(cè)》等相關(guān)專業(yè)資料，鑒定宿主動(dòng)物的種類、學(xué)名等。5.核酸檢測(cè)