篩選雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選

1、概念(gàiniàn)

動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞形成一個(yīɡè)細胞的過程一、動物(dòngwù)細胞融合2、原理：膜的流動性第二頁，共二十七頁。一、動物(dòngwù)細胞融合3、結(jié)果：形成雜交(zájiāo)細胞。雜交細胞：融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核

細胞。4、誘導(dǎo)(yòudǎo)方法：聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激等。第三頁，共二十七頁。5、過程(guòchéng)：第四頁，共二十七頁。3、過程(guòchéng)：細胞相互(xiānghù)凝集膜上蛋白質(zhì)分子(fēnzǐ)和脂質(zhì)分子(fēnzǐ)重新排布細胞膜打開細胞發(fā)生融合病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞相互凝集。第五頁，共二十七頁。6、優(yōu)點(yōudiǎn)：

突破了有性雜交的局限，使遠緣(yuǎnyuán)雜交成為可能7、應(yīng)用：用于研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培養(yǎng)(péiyǎng)等的重要手段。最重要的用途：制備單克隆抗體第六頁，共二十七頁。2、動植物細胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么(shénme)影響？3、植物體細胞雜交誘導(dǎo)(yòudǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、振動、電激等物理方法(fāngfǎ)；PEG等化學(xué)方法(fāngfǎ)問題討論動物細胞無細胞壁，動物細胞融合過程中不須去除細胞壁和再生出細胞壁。１、植物體細胞雜交最終得到的是完整的植物個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個體嗎？

不能，只能得到雜交細胞第七頁，共二十七頁。4、動物細胞融合能利用(lìyòng)上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？

能，還可以利用滅活的病毒（生物(shēngwù)方法）進行誘導(dǎo)問題(wèntí)討論５、動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？相同，都是細胞膜的流動性第八頁，共二十七頁。問題(wèntí)討論6、為什么要用滅活的病毒(bìngdú)？病毒(bìngdú)一般對生物體是有傷害的。仙臺病毒物理或化學(xué)方法喪失感染活性保留融合活性第九頁，共二十七頁。主要用于制備

單克隆抗體獲得(huòdé)雜種植株物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒

物理（離心、振蕩、電激）化學(xué)（聚乙二醇）使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細胞膜的流動性細胞膜的流動性用途

誘導(dǎo)方法步驟

融合的原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目8、植物、動物(dòngwù)細胞融合的比較第十頁，共二十七頁?？贵w(kàngtǐ)是由何種細胞產(chǎn)生的？2.抗體是如何產(chǎn)生的？？二、單克隆抗體(kàngtǐ)第十一頁，共二十七頁。（一）獲得抗體的傳統(tǒng)(chuántǒng)方法1、方法：向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原(kàngyuán)，使動物產(chǎn)生抗體，從動物血清中分離所需抗體。2、缺點：

產(chǎn)量少、純度低、特異性差

..第十二頁，共二十七頁。3、解決問題的設(shè)想:免疫反應(yīng)過程中，每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。克隆單一的B淋巴細胞，形成細胞群，獲得大量的單一抗體。4、面臨的新問題：

一個B淋巴細胞不可能在體外培養(yǎng)條件(tiáojiàn)下無限增殖的。

..第十三頁，共二十七頁。1、如何(rúhé)獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體？問題(wèntí)討論提示(tíshì)：1.什么樣的細胞可以產(chǎn)生抗體？2.什么樣的細胞可以無限增殖？2、瘤細胞和癌細胞有何區(qū)別？共同點：兩者都有無限增殖的能力不同點：瘤細胞不能轉(zhuǎn)移第十四頁，共二十七頁。

1、設(shè)計方案：一個B淋巴細胞－－只分泌(fēnmì)一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞－－能無限增殖雜種(zázhǒng)細胞（二）單克隆抗體(kàngtǐ)的制備第十五頁，共二十七頁。2、單克隆抗體(kàngtǐ)制備過程

注射抗原B淋巴細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選(shāixuǎn)雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量(shùliàng)的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體（選擇性培養(yǎng)基）誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？第十六頁，共二十七頁。單克隆抗體(kàngtǐ)的制備第十七頁，共二十七頁。單克隆抗體(kàngtǐ)的制備第十八頁，共二十七頁。BBBB瘤瘤瘤瘤１、細胞融合后培養(yǎng)液中有幾種(jǐzhǒnɡ)細胞？篩選雜種細胞思考(sīkǎo)：雜交瘤細胞(xìbāo)２、制備過程中應(yīng)用哪些細胞工程技術(shù)手段？細胞融合技術(shù)、細胞培養(yǎng)技術(shù)第十九頁，共二十七頁。3、單克隆抗體的概念(gàiniàn)：化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體4、單克隆抗體的優(yōu)點：

特異性強，靈敏度高，并可大量(dàliàng)制備。第二十頁，共二十七頁。①診斷疾?。ㄗR別作用(zuòyòng)，如同位素標記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等）（三）單克隆抗體(kàngtǐ)的應(yīng)用優(yōu)點：準確(zhǔnquè)、高效、簡易、快速②用于治療疾病和運載藥物（主要用于癌癥治療，也可運載藥物，如“生物導(dǎo)彈”）（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，用于治療腫瘤）（位置準確、療效高、副作用?。┑诙豁?，共二十七頁。小結(jié)(xiǎojié)兩個(liǎnɡɡè)過程動物(dòngwù)細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法——滅活病毒一個新細胞——雜交瘤細胞一個優(yōu)勢——單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢單克隆抗體第二十二頁，共二十七頁。

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法(fāngfǎ)，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌的抗體實驗方案2、該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內(nèi)的的細胞屬于細胞株。制備(zhìbèi)單克隆抗體B細胞(xìbāo)抗體細胞融合滅活病毒雙親細胞分泌抗體無限增殖原代傳代50B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC第二十三頁，共二十七頁。世界上第一只克隆羊“多莉”的培育過程(guòchéng)如圖所示，請據(jù)圖回答：乙甲abcdef(1)圖中的甲為蘇格蘭綿羊，乙為多莉羊。那么，a和b是通過(tōngguò)_______分裂形成的，其DNA含量是體細胞的_______；c肯定是__細胞，乙的遺傳性狀與提供___________的綿羊一致.減數(shù)(jiǎnshù)一半體細胞核第二十四頁，共二十七頁。乙甲abcdef(2)產(chǎn)生甲和乙的過程分別是—————和————（3）在形成乙是的過程中，需要將d的細胞核取出，將c細胞核移入d細胞內(nèi)，此技術(shù)叫———。所需的受體細胞大多采用動物卵細胞的原因是————————————————————————（4）綿羊的白色對黑色為顯色。若甲是白色綿羊，要判斷它是否純合體，選用(xuǎnyòng)與它交配的綿羊最好是————-------------------------有性生殖(yǒuxìngshēngzhí)克隆(kèlónɡ)核移植卵細胞大，易于操作；卵細胞具有繼續(xù)分化的潛能。黑毛第二十五頁，共二十七頁。乙甲abcdef（5）在產(chǎn)生多莉羊時，需將e細胞形成的早期胚胎移入另一頭母羊（f）子宮里，這種技術(shù)在細胞工程中叫——————（6）繼植物組織培養(yǎng)后，克隆綿羊的培育成功，證明動物細胞也有———（7）在繁殖多莉羊的過程(guòchéng)中，是否遵循孟德爾遺傳規(guī)律？多莉羊的性狀與d羊、c羊及f羊的關(guān)系是什么？——————————————胚胎(pēitāi)移植全能性不遵循，多莉羊的多數(shù)(duōshù)性狀象c羊，個別性狀象d羊，發(fā)育也會受到f羊影響。第二十六頁，共二十七頁。內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)2.2.2動物細胞融合與單克隆抗體。動物細胞融合也稱細胞雜交，是