藥物分析第11章 維生素類藥物的分析

第十一章維生素類藥物的分析TheAnalysisofVitamins一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（化學(xué)性質(zhì)與分析方法間的關(guān)系）二、鑒別試驗(yàn)三、特殊雜質(zhì)檢查四、含量測(cè)定學(xué)習(xí)內(nèi)容

1.掌握維生素A、維生素B1、維生素C、維生素E的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法間的關(guān)系；維生素A鑒別的三氯化銻反應(yīng)、含量測(cè)定的紫外分光光度法；維生素B1鑒別的硫色素反應(yīng)；維生素C基于還原性的鑒別和含量測(cè)定方法；維生素E含量測(cè)定的氣相色譜法；

2.熟悉維生素B1的含量測(cè)定方法，維生素E的鑒別和檢查；

3.了解維生素類藥物的其他分析內(nèi)容。目的要求第一節(jié)維生素A的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

性質(zhì)：

1.溶解性不溶于水

2.不穩(wěn)定性易被氧化

3.紫外吸收光譜特征325-328nm4.與三氯化銻反應(yīng)呈色在三氯甲烷中能與三氯化銻作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色。第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)1.

三氯化銻反應(yīng)（Carr-Price反應(yīng)）

Ch.P.(2010)維生素A及其制劑的鑒別：取本品1滴，加三氯甲烷10ml振搖使溶解；取2滴，加三氯甲烷2ml與25%三氯化銻的三氯甲烷溶液0.5ml，即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。第一節(jié)維生素A的分析二、鑒別試驗(yàn)第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)2.

紫外分光光度法第一節(jié)維生素A的分析二、鑒別試驗(yàn)3.

薄層色譜法（一）紫外分光光度法（三點(diǎn)校正法）

維生素A在325-328nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有最大吸收第一節(jié)維生素A的分析三、含量測(cè)定立體異構(gòu)體氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物合成中間體去氫維生素A（VitA2）去水維生素A（VitA3）雜質(zhì)（一）紫外分光光度法

維生素A在325-328nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有最大吸收第一節(jié)維生素A的分析1）原理：

a.雜質(zhì)的吸收在310~340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸收度減??；

b.物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性，A樣品

=AVA+A相關(guān)物質(zhì)。1.三點(diǎn)校正法第一節(jié)維生素A的分析2）波長(zhǎng)的選擇：

1

：VitA的max；2、

3

：分別在

1的兩側(cè)各選一點(diǎn)第一法等波長(zhǎng)差法---直接測(cè)定法（VitA醋酸酯，

max：328nm）

第二法等吸收比法---皂化法（VitA醇，

max：325nm）

1.三點(diǎn)校正法第一節(jié)維生素A的分析3）測(cè)定方法：第一法直接測(cè)定法（VitA醋酸酯）

a.方法：取維生素A醋酸酯適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml中含9-15單位的溶液。在300、316、328、340和360nm五個(gè)波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，確定最大吸收波長(zhǎng)。計(jì)算各波長(zhǎng)下的吸收度與328nm波長(zhǎng)下的吸收度比值。

b.A值的選擇：

①如果最大吸收波長(zhǎng)在326-329nm，分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)下吸光度的比值，均不超過(guò)規(guī)定值的±0.02時(shí)，直接用328nm處測(cè)得的吸收度A328求。

第一節(jié)維生素A的分析第一法直接測(cè)定法（VitA醋酸酯）

b.A值的選擇：②如果最大吸收波長(zhǎng)在326-329nm，且所測(cè)各波長(zhǎng)吸光度比值有一個(gè)以上超過(guò)規(guī)定值的±0.02，應(yīng)按下式求出校正后的吸光度，并計(jì)算f值：03%－15%－3%第二法第二法328A(校正)328A③如果最大吸收波長(zhǎng)不在326-329nm，也不能用本法測(cè)定，采用皂化法測(cè)定含量。第一節(jié)維生素A的分析第一法直接測(cè)定法（VitA醋酸酯）

c.計(jì)算：

①求樣：由A=樣×C×L，求得樣=A/(C×L)②求效價(jià)（IU/g）：每克供試品中所含維生素A的國(guó)際單位數(shù)。

IU/g=樣×1900③求標(biāo)示量%：標(biāo)示量%=效價(jià)×平均丸重標(biāo)示量×100%=A×D×1900×WW×100×L×標(biāo)示量×100%第一節(jié)維生素A的分析第一法直接測(cè)定法（VitA醋酸酯）

d.換算因子：?jiǎn)挝粩?shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)換算因子=效價(jià)（IU/g）純1900=每1g維生素A醋酸酯相當(dāng)?shù)膰?guó)際單位數(shù)為：IU2907000g344.0g1016=mm×效價(jià)（IU/g）=2907000IU/g維生素A的國(guó)際單位規(guī)定：第一節(jié)維生素A的分析3）測(cè)定方法：第二法皂化法（VitA醇）

a.方法：取維生素A醋酸酯適量，精密稱取一定量供試品，加氫氧化鉀乙醇溶液乙醇溶液煮沸回流，得到的皂化液經(jīng)乙醚提取、洗滌、過(guò)濾、濃縮和干燥等處理，用異丙醇溶解殘?jiān)⑾♂尦擅?ml中含維生素A醇9-15單位的溶液。在300、310、325、334波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，確定最大吸收波長(zhǎng)（應(yīng)為325nm）。第一節(jié)維生素A的分析第二法皂化法（VitA醇）

b.A值的選擇：

①如果最大吸收波長(zhǎng)在323-327nm，而且A300/A325的比值小于或等于0.73，應(yīng)按下式求出校正后的吸光度，并計(jì)算f值：%100AAAf325325)(325-=校正03%－3%325A(校正)325A(校正)325A第一節(jié)維生素A的分析第二法皂化法（VitA醇）

b.A值的選擇：

②如果最大吸收波長(zhǎng)不在323-327nm，或A300/A325大于0.73，表示供試品中雜質(zhì)含量過(guò)高，應(yīng)先采用色譜法將未皂化部分純化后再進(jìn)行測(cè)定。第一節(jié)維生素A的分析第二法皂化法（VitA醇）

c.計(jì)算：

①求樣：由A=樣×C×L，求得樣=A/(C×L)②求效價(jià)（IU/g）：IU/g=樣×1830③求標(biāo)示量%：標(biāo)示量%=效價(jià)×平均丸重標(biāo)示量×100%=A×D×1830×WW×100×L×標(biāo)示量×100%第一節(jié)維生素A的分析第二法皂化法（VitA醇）

d.換算因子：?jiǎn)挝粩?shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)換算因子=效價(jià)（IU/g）純1830=

VitAD膠丸中VitA的含量測(cè)定精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.08262g/丸）的內(nèi)容物0.2399g至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)為328nm，并在下列波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度為：A300：0.354A316

：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299

求本品中維生素A的含量？第一節(jié)維生素A的分析A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299

+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====()()605052305610628025232523340316328328.....AAA.A=--×=--=(校正)%)3~%15(%7.3%100328328)(328--?-=-=AAAf校正第一節(jié)維生素A的分析（二）三氯化銻比色法

在三氯甲烷中能與三氯化銻作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色，在618-620nm波長(zhǎng)處有最大吸收。第一節(jié)維生素A的分析三、含量測(cè)定（三）HPLC

具有分離分析功能，可排除維生素A中共存物質(zhì)的干擾。第一節(jié)維生素A的分析

維生素A醋酸酯膠丸含量測(cè)定，取內(nèi)容物Wg，加環(huán)己烷溶解并稀釋至10mL，搖勻，精密量取0.1mL，再加環(huán)己烷稀釋至10mL，使其濃度為9IU/mL~15IU/mL。已知內(nèi)容物平均重量為80.0mg，其每丸標(biāo)示量為10000IU。試計(jì)算取樣量（Ｗ）的范圍是多少？練習(xí)W=72-120mgW80.0×100001000=9~15第二節(jié)維生素C的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

性質(zhì)：

1.溶解性溶于水，水溶液呈酸性

2.酸性表現(xiàn)為一元酸

3.還原性烯二醇

第二節(jié)維生素C的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

性質(zhì)：

4.旋光性

5.水解性

6.糖類的性質(zhì)

7.紫外吸收特性第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)1.

與硝酸銀反應(yīng)（Ch.P.(2010)）

原理：烯二醇基具有強(qiáng)還原性二、鑒別試驗(yàn)第二節(jié)維生素C的分析2.

與2,6-二氯靛酚反應(yīng)（Ch.P.(2010)）

原理：烯二醇基具有強(qiáng)還原性第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)3.

與其它氧化劑反應(yīng)（亞甲藍(lán)、堿性酒石酸銅、磷鉬酸等）

4.糖類的反應(yīng)第二節(jié)維生素C的分析5.

UV、IR、TLC、HPLC第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)三、特殊雜質(zhì)檢查溶液澄清度與顏色檢查（控制吸光度）第二節(jié)維生素C的分析銅、鐵離子的檢查（原子吸收分光光度法，控制吸光度）

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過(guò)的冷水100ml與稀乙酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/l）滴定，至溶液顯藍(lán)色并在30秒內(nèi)不褪色。每1ml碘滴定液（0.05mol/l）相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6。（一）碘量法（Ch.P.(2010)維生素C原料及制劑）1.原理：

2.方法四、含量測(cè)定第二節(jié)維生素C的分析四、含量測(cè)定第二節(jié)維生素C的分析（一）碘量法（Ch.P.2010）3.討論：

（1）加入稀乙酸在酸性介質(zhì)中維生素C受空氣中氧的氧化速度減慢。

（2）立即滴定維生素C在空氣中易氧化，減少對(duì)測(cè)定的影響。

（3）加新沸過(guò)的冷水減少水中溶解的氧對(duì)測(cè)定的影響。（4）消除制劑中輔料對(duì)測(cè)定的干擾

片劑中的滑石粉、注射劑中的抗氧劑（二）2,6二氯靛酚滴定法1.原理：

2.討論快速滴定：還原性物質(zhì)對(duì)測(cè)定有干擾，但是維生素C的氧化速度遠(yuǎn)比干擾物質(zhì)快，故快速滴定可減少干擾物質(zhì)的影響。

四、含量測(cè)定第二節(jié)維生素C的分析第三節(jié)維生素B1的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

性質(zhì)：

1.溶解性溶于水，水溶液呈酸性

2.硫色素反應(yīng)

3.紫外吸收光譜特征

4.與生物堿沉淀試劑反應(yīng)

5.氯化物的特性[]藍(lán)色熒光硫色素正丁醇??????????-OOH第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)1.

硫色素反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)第三節(jié)維生素B1的分析第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)第三節(jié)維生素B1的分析2.

沉淀反應(yīng)3.氯化物反應(yīng)4.硝酸鉛反應(yīng)與氫氧化鈉共熱，分解生成硫化鈉，可與硝酸鉛反應(yīng)生產(chǎn)黑色沉淀。5.IR（一）非水溶液滴定法（Ch.P.2010）

a.加入醋酸汞溶液

b.反應(yīng)摩爾比：1:2c.喹那啶紅－亞甲藍(lán)（紫紅→天藍(lán)）三、含量測(cè)定第三節(jié)維生素B1的分析含量%=100%（V空–V樣）×T×FW三、含量測(cè)定第三節(jié)維生素B1的分析（二）紫外分光光度法含量%=×100%×D×VWA×L×100（三）硫色素?zé)晒夥ǎㄋ模〩PLC待測(cè)組分+干擾組分不同pH，不同化學(xué)反應(yīng)或光照等待測(cè)組分發(fā)生光譜變化測(cè)量ΔA，求C賦形劑或其它共存物不受影響它保留了通常的分光光度法簡(jiǎn)易、快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點(diǎn)，又無(wú)需事先分離，并能消除干擾。第三節(jié)維生素B1的分析差示分光光度法：差示分光光度法：第三節(jié)維生素B1的分析

246nm266233具體做法：

取2份相同供試品，分別使其處于不同環(huán)境中。然后將它們稀釋至同樣濃度，分別置于樣品池與參比池中，于適當(dāng)波長(zhǎng)處測(cè)其ΔA

。A1＝A+A干擾A2=A’+A干擾ΔA=A-A’=(ε-ε’)Cl第三節(jié)維生素B1的分析差示分光光度法：第四節(jié)維生素E的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

性質(zhì)：

1.溶解性不溶于水

2.水解性酸性或堿性溶液中加熱水解

3.氧化性遇光、空氣氧化（避光保存）

4.紫外吸收光譜特征第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)1.

硝酸反應(yīng)（Ch.P.(2010)維生素E及其制劑）二、鑒別試驗(yàn)第四節(jié)維生素E的分析第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)第四節(jié)維生素E的分析2.

三氯化鐵反應(yīng)（Ch.P.(2010)維生素E）3.

GC和IR第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)三、特殊雜質(zhì)檢查1.

酸度（游離乙酸）酸堿滴定法

2.生育酚具有還原性，硫酸鈰滴定法第四節(jié)維生素E的分析L=×100%×VWT3.

有關(guān)物質(zhì)GC4.殘留溶劑GC（一）GC（Ch.P.(2010)維生素E及其制劑）三、含量測(cè)定第四節(jié)維生素E的分析（二）HPLCf=AS/cSAR/cR含量%=×100%=cS×VWf××VAXAS’/cS’W×100%1．在三氯醋酸或鹽酸存在下，經(jīng)水解、脫羧、失水后，加入吡咯即產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物的藥物應(yīng)是（）A.氯氮卓B.維生素AC.普魯卡因D.鹽酸嗎啡E.維生素C2.下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰化鉀后，再加正丁醇，顯藍(lán)色熒光的是（）

A.維生素AB.維生素B1C.維生素CD.維生素DE.維生素E練習(xí)3．既具有酸性又具有還原性的藥物是（）

A.維生素AB.咖啡因C.苯巴比妥

D.氯丙嗪E.維生素C4.維生素C的鑒別反應(yīng)，常采用的試劑有（）

A.堿性酒石酸銅B.硝酸銀C.碘化鉍鉀

D.乙酰丙酮E.三氯醋酸和吡咯5.測(cè)定維生素C注射液的含量時(shí)，在操作過(guò)程中要加入丙酮，這是為了（）

A.保持維生素C的穩(wěn)定B.增加維生素C的溶解度

C.使反應(yīng)完全D.加快反應(yīng)速度

E.消除注射液中抗氧劑的干擾練習(xí)6.能發(fā)生硫色素特征反應(yīng)的藥物是（）

A.維生素AB.維生素B1C.維生素CD.維生素EE.煙酸7.使用碘量法測(cè)定維生素C的含量,已知維生素C的分子量為176.13，每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于維生素C的量為（）

A.17.61mgB.8.806mgC.176.1mgD.88.06mgE.1.761mg8．維生素A的鑒別試驗(yàn)為（）

A.三氯化鐵反應(yīng)