毛細(xì)管電泳法測(cè)定飲料中苯甲酸和山梨酸的含量

實(shí)驗(yàn)毛細(xì)管電泳法測(cè)定飲料中苯甲酸和山梨酸的含量一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 掌握毛細(xì)管電泳法的基本原理2、 熟悉BeckmanP/ACE?MDQ毛細(xì)管電泳儀以及其32Karat工作站的使用方法。3、 掌握毛細(xì)管電泳法測(cè)定苯甲酸和山梨酸含量的方法。二、 實(shí)驗(yàn)原理苯甲酸和山梨酸是廣泛使用在飲料、調(diào)味品中的防腐劑，由于此類防腐劑帶有一定的負(fù)效應(yīng)，甚至還有微量毒素，使用不當(dāng)會(huì)給人體帶來危害，應(yīng)嚴(yán)格限制其在食品中的添加量，所以其檢測(cè)工作也變得極其重要。毛細(xì)管電泳（CE）技術(shù)是以高電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，在細(xì)內(nèi)徑毛細(xì)管內(nèi)荷電粒子按其淌度或（和）分配系數(shù)的不同而進(jìn)行分離的一種新技術(shù)。毛細(xì)管電泳具有高效快速、進(jìn)樣體積小、溶劑消耗少和樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已廣泛地用于分離分析領(lǐng)域。傳統(tǒng)的食品添加劑的測(cè)定一般采用氣相色譜（GC）和高效液相色譜（HPLC）方法，當(dāng)采用GC與HPLC分析時(shí)一般都必須對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜的前處理。而CE與之相比，實(shí)驗(yàn)成本低，分析時(shí)間短，適用范圍寬，可同時(shí)分離和檢測(cè)多個(gè)組分。本實(shí)驗(yàn)使用的毛細(xì)管區(qū)帶電泳法（CZE），在毛細(xì)管中僅填充緩沖液，基于溶質(zhì)組分的遷移時(shí)間或淌度的不同而分離，除了溶質(zhì)組分本身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和緩沖溶液組成，不存在其他因素如聚合物網(wǎng)絡(luò)、pH梯度的影響。實(shí)驗(yàn)采用硼砂為緩沖液，待測(cè)飲料只需用緩沖液稀釋，在特定的條件下，以峰高為定量依據(jù)，測(cè)定3種待測(cè)飲料中苯甲酸的含量。三、 儀器和試劑儀器：BeckmanP/ACE?MDQ毛細(xì)管電泳儀試劑：硼砂緩沖溶液（45mmol/L）、NaOH溶液（0.1mol/L）、苯甲酸鈉和山梨酸鈉的混標(biāo)1mg/ml。市售3種果汁飲料四、 實(shí)驗(yàn)步驟1、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取上述苯甲酸鈉儲(chǔ)備液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml于50ml容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，配置成折合苯甲酸、山梨酸濃度為10、20、40、60、80mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液，在上述實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)各苯甲酸的峰值，和山梨酸的峰值，繪制各標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、 樣品分析樣品的處理：取適量飲料于小燒杯中，在超聲波中超聲除氣。碳酸飲料除氣30~40分鐘，非碳酸飲料除氣15~20分鐘。準(zhǔn)確移取超聲除氣的3種市售飲料各5ml于50ml容量瓶中并以去離子水稀釋至刻度，在上述實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)樣，根據(jù)譜圖，測(cè)定峰值。3、 加標(biāo)回收根據(jù)飲料測(cè)定的山梨酸和苯甲酸的含量，設(shè)計(jì)加標(biāo)回收。五、 數(shù)據(jù)記錄與處理標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性擬合常數(shù)要求大于0.99，記錄原始數(shù)據(jù)，并求算樣品中苯甲酸的含量，與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的，果汁飲料中苯甲酸含量上限1mg/ml進(jìn)行對(duì)比。碳酸飲料含量上限0.2mg/ml。飲料中山梨酸含量上限0.5mg/ml。六、 儀器操作1、 開機(jī)1.1接通電源，打開毛細(xì)管電泳儀開關(guān)，打開計(jì)算機(jī)，點(diǎn)擊桌面32Karat操作軟件圖標(biāo)，點(diǎn)擊DAD檢測(cè)器圖標(biāo)，進(jìn)入毛細(xì)管電泳儀控制界面。1.2將分別裝有0.1mol/L鹽酸水溶液、lmol/L氫氧化鈉水溶液、硼砂緩沖液、重蒸水依次放入左邊緩沖液托盤（Inlet）并記錄對(duì)應(yīng)的位置。1.3將裝有硼砂緩沖液及空的緩沖液瓶放入右邊緩沖液托盤（Outlet），記錄對(duì)應(yīng)的位置。1.4將裝有待檢測(cè)樣品的緩沖液瓶放入左側(cè)樣品托盤，記錄對(duì)應(yīng)的位置。1.5檢查卡盤和樣品托盤是否正確安裝。關(guān)好托盤蓋，注意直接控制圖象屏幕上是否顯示卡盤和托盤該已安裝好。此時(shí)應(yīng)能聽到制冷劑開始循環(huán)的聲音。2、 石英毛細(xì)管的處理2.1在直接控制屏幕上點(diǎn)擊壓力區(qū)域，出現(xiàn)對(duì)話框。2.2設(shè)置Pressure、Duration、Direction、PressureType>TrayPositions等參數(shù)。點(diǎn)擊OK,瓶子移到指定的位置，開始沖洗。沖洗完成后，毛細(xì)管已處理好，毛細(xì)管中充滿運(yùn)行緩沖液。3、方法編輯3.1先進(jìn)入32Karat主窗口，用鼠標(biāo)右鍵單擊所建立的儀器，選擇OpenOffline，幾秒鐘后會(huì)打開儀器離機(jī)窗口。3.2從文件菜單選擇FileMethodNew，在方法菜單選擇MethodInstrumentSetup進(jìn)入方法的儀器控制和數(shù)據(jù)采集模塊。選擇其中一個(gè)為“InitialCondition”（初始條件）的選項(xiàng)卡，進(jìn)入初始條件對(duì)話框。在這個(gè)對(duì)話框中輸入用于儀器開始方法運(yùn)行時(shí)的參數(shù)。4、 序列的建立4.1從儀器窗口選擇File/Sequence/New，打開序列向?qū)?，按要求選擇。4.2點(diǎn)擊Finish，出現(xiàn)新建的序列表。5、 系統(tǒng)運(yùn)行5.1在系統(tǒng)運(yùn)行前，檢查儀器的狀態(tài)：檢測(cè)器配置是否正確；燈是否點(diǎn)著；樣品和緩沖液放置是否放置正確。5.2從菜單選擇Control/SingleRun或點(diǎn)擊圖標(biāo)打開單個(gè)運(yùn)行對(duì)話框。5.3在儀器窗口的工具條上點(diǎn)擊綠色的雙箭頭打開運(yùn)行序列對(duì)話框。6、 關(guān)機(jī)6.1關(guān)閉氘燈。6.2點(diǎn)擊Load，使托盤回到原始位置。6.3打開托盤蓋，待冷凝液回流后關(guān)閉控制界面。6.4關(guān)閉