白細胞血型HLA法醫(yī)學(xué)培訓(xùn)課件

HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測定I類抗原的試驗名稱、原理，NIH技術(shù)HLA抗原的結(jié)構(gòu)、HLA抗體的來源、特性及交叉反應(yīng)，DNA分型方法。掌握了解要求HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測定I類抗原1一、MHC與HLA第一節(jié)概述紅細胞血型抗原白細胞特有抗原與其它組織共有抗原：HLA人類白細胞膜上的抗原一、MHC與HLA第一節(jié)概述紅細胞血型抗原白細胞特有抗21HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.2基因群MHC主要組織相容性復(fù)合體人類的MHC稱為HLA系統(tǒng)1HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.2基因群MHC主要組3Ⅱ類抗原：

D、DR、DP、DQⅠ類抗原：

A、B、C人類組織相容性抗原分七個座位人類組織相容性抗原Ⅱ類抗原：Ⅰ類抗原：人類組織相容性抗原人類組織相容性抗原4

小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內(nèi)及經(jīng)產(chǎn)婦體內(nèi)有抗體，發(fā)現(xiàn)白細胞抗原存在多數(shù)組織中，微量淋巴細胞毒試驗，國際專題討論會，分子生物學(xué)研究。二.研究簡史

小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內(nèi)及經(jīng)產(chǎn)婦體內(nèi)有抗體，發(fā)現(xiàn)5三、抗原結(jié)構(gòu)與細胞分布45kd，由MHC編碼，有5個結(jié)構(gòu)域：α1、α2有多態(tài)性，α3與β2m以非共價鍵連接，α4越膜部分，α5在胞漿內(nèi)?？扇苄钥乖次挥诎ね獠糠?。即β2m(β2微球蛋白)，12kd，基因在第15號染色體，影響重鏈表現(xiàn)出抗原性。Ⅰ類抗原：A、B、C抗原β鏈（輕鏈）α鏈（重鏈）三、抗原結(jié)構(gòu)與細胞分布45kd，由MHC編碼，有5個結(jié)構(gòu)域：6Ⅱ類抗原：DR、DP、DQ三、抗原結(jié)構(gòu)與細胞分布α鏈、β鏈均為重鏈，非共價鍵連接，由MHC編碼，二條鏈各有4個結(jié)構(gòu)域，多態(tài)性主要由α1、β1結(jié)構(gòu)域決定。Ⅱ類抗原：三、抗原結(jié)構(gòu)與細胞分布α鏈、β鏈均為重鏈，非共價鍵7PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)HLA基因座的多態(tài)性基礎(chǔ)是堿基序列的差異，6個外顯子和5個內(nèi)含子8個外顯子和7個內(nèi)含子交叉反應(yīng)一般較弱，打分<6分。等位基因命名似血清學(xué)命名C、D、DR、DP、DQ多數(shù)為同一座位上的Ag、Ab間；抗體+相應(yīng)抗原+補體——>細胞膜受損，著色，HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.C、D、DR、DP、DQ基因型：A9,A11；DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型同一特異性分出來的幾個特異性間往往強交叉，如：A23－A24；C座位，Cw為與補體區(qū)分；三、抗原結(jié)構(gòu)與細胞分布等位基因命名似血清學(xué)命名B座位交叉反應(yīng)多于A座位。大寫英文字母：A、B、現(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。人體分布Ⅰ類Ag幾乎所有有核細胞膜上，淋巴細胞密度最高。以可溶性形式存在血漿、體液中。成熟紅細胞無，血小板有。Ⅱ類Ag免疫活性細胞上：樹突狀細胞、單核細胞、B細胞。精子Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達。PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)人體分布Ⅰ類Ag幾乎81妊娠6周2（月經(jīng)期、排卵期）可能與激素有關(guān)。3與細胞膜代謝有關(guān)。發(fā)育和變異發(fā)育早4藥物、疾病，如腫瘤。主要表現(xiàn)為抗原與抗體反應(yīng)減弱，或可逆性喪失。

5使蛋白質(zhì)變性的因素都會使HLA抗原發(fā)生不可逆的變化生理周期獻血員病理理化性質(zhì)變異61妊娠6周2（月經(jīng)期、排卵期）可能與激素有關(guān)。3與細胞膜代謝9單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或低于期望頻率。阿拉伯?dāng)?shù)字：1、2、3……PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈8個外顯子和7個內(nèi)含子微量淋巴細胞毒實驗步驟微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理HLA-A23(9)：9為寬特異性，23為窄特異性A11抗原分離B淋巴細胞作微量淋巴細胞毒實驗。微量淋巴細胞毒實驗步驟同一特異性分出來的幾個特異性間往往強交叉，如：A23－A24；PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)C座位，Cw為與補體區(qū)分；母HLA-DRB1*0302純合子HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測定I類抗原的試驗名稱、原理，NIH技術(shù)大寫英文字母：A、B、幾乎所有有核細胞膜上，淋巴細胞密度最高。大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ第二節(jié)命名阿拉伯?dāng)?shù)字：1、2、3……A、B座位數(shù)字不重疊；C座位，Cw為與補體區(qū)分；

D、DP座位，Dw、DPw為用細胞學(xué)方法測定。HLA-A*0201（A座位，A2抗原，1號亞型基因）~A*0210（10號亞型基因）HLA-A23(9)：9為寬特異性，23為窄特異性

抗原座位每一座位特異性等位基因命名似血清學(xué)命名大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位大寫英文字母：A、B、C、D、DR、DP、DQ抗原座位單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或10第三節(jié)遺傳一、基因定位及結(jié)構(gòu)Ⅰ類Ⅱ類Ⅲ類基因區(qū)基因區(qū)基因區(qū)第三節(jié)遺傳一、基因定位及結(jié)構(gòu)ⅠⅡⅢ基因區(qū)基因區(qū)基因區(qū)11主要編碼A、B、C抗原的α鏈18個外顯子和7個內(nèi)含子2多態(tài)性主要由外顯子2和3決定3Ⅰ類基因區(qū)主要編碼A、B、C抗原的α鏈18個外顯子和7個內(nèi)含子2多態(tài)12主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個等位基因，DRB有9個基因位點6個外顯子和5個內(nèi)含子多態(tài)性主要由外顯子2決定Ⅱ類基因區(qū)主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個等位基因，DR13二、遺傳特征共顯性遺傳特異性單倍型遺傳重組連鎖不平衡基因單位點遺傳二、遺傳特征共顯性遺傳特異性單倍型遺傳重連鎖不平衡基因單位點14

一個座位最多檢出二個抗原。A2，A-：表示為A2純合子或A2和一個空白抗原或A2和一個至今尚未發(fā)現(xiàn)的抗原。遺傳特征1.共顯性遺傳遺傳特征1.共顯性遺傳15遺傳特征⒉各座位特異性連鎖成單倍型遺傳。表型：A9,A11；B5,B13基因型：A9,A11；B5,B13單倍型：A11,B5,/A9,B13；A11,B13,/A9,B5同胞間關(guān)系:1/4全相同,1/4全不同,1/2半相同遺傳特征⒉各座位特異性連鎖成單倍型遺傳。表型：A9,A116⒊重組遺傳特征A、B座位間重組率0.87%。⒊重組遺傳特征A、B座位間重組率0.87%。17單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或低于期望頻率。A2頻率0.3，B46頻率0.05，A2,B46預(yù)期頻率0.015，但實際觀察值0.04。因此計算親權(quán)指數(shù)時要用單倍型頻率。遺傳特征⒋連鎖不平衡單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或18遺傳特征⒌基因單位點遺傳父HLA-DRB1*0401純合子母HLA-DRB1*0302純合子子為此兩基因雜合子遺傳特征⒌基因單位點遺傳父HLA-DRB1*0401純合子19HLA群體分布不同人群HLA抗原分布差異大，提供某些人類遷移和混雜信息。HLA群體分布不同人群HLA抗原分布差異大，提供某些人類遷移20第四節(jié)分型一、血清學(xué)分型二、細胞學(xué)分型(D、DP抗原分型)三、DNA分型第四節(jié)分型一、血清學(xué)分型二、細胞學(xué)分型(D、DP抗原分型)218個外顯子和7個內(nèi)含子B座位交叉反應(yīng)多于A座位。大寫英文字母：A、B、A11,B13,/A9,B5微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理同一特異性分出來的幾個特異性間往往強交叉，如：A23－A24；A11抗體｜—交叉。1、A、B、C抗原分型現(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。大寫英文字母：A、B、A2，A-：表示為A2純合子或A2和一個空白抗原或A2和一個至今尚未發(fā)現(xiàn)的抗原。多為IgG,少為IgM，有細胞毒作用，部分有凝集作用。HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.主要編碼A、B、C抗原的α鏈可溶性抗原即位于胞膜外部分。PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達。2、DR、DQ抗原分型父HLA-DRB1*0401純合子多態(tài)性主要由外顯子2和3決定A3抗原一、血清學(xué)分型1、A、B、C抗原分型2、DR、DQ抗原分型8個外顯子和7個內(nèi)含子一、血清學(xué)分型1、A、B、C抗原分型222微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理微量淋巴細胞毒實驗步驟1、A、B、C抗原分型微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理1、A、B、C抗原分型23抗體+相應(yīng)抗原+補體——>細胞膜受損，著色，估計死細胞占全部細胞的%，判定抗原。微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理抗體+相應(yīng)抗原+補體——>細胞膜受損，著色，微量淋巴細胞毒性24制備淋巴細胞懸液，多用外周血，通過密度梯度離心法取得淋巴細胞，調(diào)細胞數(shù)2000個/ul1ul抗原+1ul抗體→(30min、20～25℃)+5ul補體（兔血清）→(60min、20～25℃)+3ul伊紅→(5～8min)+8ul甲醛→(過夜)低倍鏡觀察、判讀結(jié)果。微量淋巴細胞毒實驗步驟制備淋巴細胞懸液，多用外周血，通過密度梯度離心法取得淋巴細胞25圖示圖示26

B淋巴細胞從全淋巴細胞中通過尼龍棉柱法分離B淋巴細胞作微量淋巴細胞毒實驗。2、DR、DQ抗原分型:B淋巴細胞從全淋巴細胞中通過尼龍棉柱法2、DR、27抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主；單克隆抗體；免疫動物等。來源抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主28微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理DRA有3個等位基因，DRB有9個基因位點HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.大寫英文字母：A、B、Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達。C、D、DR、DP、DQPCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)大寫英文字母：A、B、PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)A11抗原⒉各座位特異性連鎖成單倍型遺傳?，F(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。主要編碼A、B、C抗原的α鏈DRA有3個等位基因，DRB有9個基因位點B座位交叉反應(yīng)多于A座位。DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)主要編碼A、B、C抗原的α鏈阿拉伯?dāng)?shù)字：1、2、3……同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主；抗血清特性多為IgG,少為IgM，有細胞毒作用，部分有凝集作用。效價低，多數(shù)為多價.微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理抗血清特性多為IgG,29DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型微量淋巴細胞毒實驗步驟幾乎所有有核細胞膜上，淋巴細胞密度最高。多態(tài)性主要由外顯子2決定主要表現(xiàn)為抗原與抗體反應(yīng)減弱，或可逆性喪失。三、抗原結(jié)構(gòu)與細胞分布同一特異性分出來的幾個特異性間往往強交叉，如：A23－A24；與其它組織共有抗原：HLAPCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)即β2m(β2微球蛋白)，12kd，基因在第15號染色體，影響重鏈表現(xiàn)出抗原性。A11抗體｜—交叉。微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理1、A、B、C抗原分型主要編碼A、B、C抗原的α鏈單倍型頻率等于組成基因頻率的乘積，但有些單倍型觀察頻率高于或低于期望頻率。微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理α鏈、β鏈均為重鏈，非共價鍵連接，由MHC編碼，二條鏈各有4個結(jié)構(gòu)域，多態(tài)性主要由α1、β1結(jié)構(gòu)域決定?，F(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測定I類抗原的試驗名稱、原理，NIH技術(shù)抗血清交叉反應(yīng):多數(shù)為同一座位上的Ag、Ab間；同一特異性分出來的幾個特異性間往往強交叉，如：A23－A24；B座位交叉反應(yīng)多于A座位。交叉反應(yīng)一般較弱，打分<6分。B7抗原刺激產(chǎn)生的抗體與B7、B27、B22抗原均可反應(yīng)，說明B7、B27、B22間有交叉。

A11抗原A11抗體｜—交叉。

A3抗原DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型抗血清交叉反應(yīng):30二、細胞學(xué)分型(D、DP抗原分型)混合淋巴細胞培養(yǎng)。二、細胞學(xué)分型(D、DP抗原分型)混合淋巴細胞培養(yǎng)。31PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)PCR-SSP(序列特異性引物)

PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)三、DNA分型HLA基因座的多態(tài)性基礎(chǔ)是堿基序列的差異，現(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。

PCR-測序PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)PCR-SSP(序列32血清學(xué)分型和DNA分型比較DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型便于標(biāo)準(zhǔn)化和比較提高分辨率減少漏檢使用范圍廣

減少分型誤差血清學(xué)分型和DNA分型比較DNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型便于標(biāo)準(zhǔn)化33Ⅱ類抗原：

D、DR、DP、DQⅠ類抗原：

A、B、C人類組織相容性抗原分七個座位人類組織相容性抗原Ⅱ類抗原：Ⅰ類抗原：人類組織相容性抗原人類組織相容性抗原34HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.現(xiàn)以PCR技術(shù)衍生的方法。D、DP座位，Dw、DPw為用細胞學(xué)方法測定。成熟紅細胞無，血小板有。與其它組織共有抗原：HLAC、D、DR、DP、DQ幾乎所有有核細胞膜上，淋巴細胞密度最高。主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈成熟紅細胞無，血小板有。C、D、DR、DP、DQPCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)HLA-A*0201（A座位，A2抗原，1號亞型基因）~A*0210（10號亞型基因）微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內(nèi)及經(jīng)產(chǎn)婦體內(nèi)有抗體，發(fā)現(xiàn)白細胞抗原存在多數(shù)組織中，微量淋巴細胞毒試驗，國際專題討論會，分子生物學(xué)研究。8個外顯子和7個內(nèi)含子多態(tài)性主要由外顯子2決定A11抗體｜—交叉。阿拉伯?dāng)?shù)字：1、2、3……B座位交叉反應(yīng)多于A座位。主要編碼A、B、C抗原的α鏈人體分布Ⅰ類Ag幾乎所有有核細胞膜上，淋巴細胞密度最高。以可溶性形式存在血漿、體液中。成熟紅細胞無，血小板有。Ⅱ類Ag免疫活性細胞上：樹突狀細胞、單核細胞、B細胞。精子Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達。HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.人體分布Ⅰ類Ag幾乎所有35主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個等位基因，DRB有9個基因位點6個外顯子和5個內(nèi)含子多態(tài)性主要由外顯子2決定Ⅱ類基因區(qū)主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈DRA有3個等位基因，DR36一、血清學(xué)分型1、A、B、C抗原分型2、DR、DQ抗原分型一、血清學(xué)分型1、A、B、C抗原分型2、DR、DQ抗原分型抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主；單克隆抗體；免疫動物等。來源抗血清同種異體免疫：妊娠、輸血、器官移植，以產(chǎn)婦血清獲得為主38PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)Ⅰ、Ⅱ類Ag都有，且以單倍型形式表達。C座位，Cw為與補體區(qū)分；微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理主要編碼A、B、C抗原的α鏈2、DR、DQ抗原分型微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理微量淋巴細胞毒性實驗NIH技術(shù)原理與其它組織共有抗原：HLADNA分型優(yōu)于血清學(xué)分型PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)8個外顯子和7個內(nèi)含子大寫英文字母：A、B、分離B淋巴細胞作微量淋巴細胞毒實驗。分離B淋巴細胞作微量淋巴細胞毒實驗。A11抗體｜—交叉。HLA的命名、遺傳、應(yīng)用、抗原在體內(nèi)的分布、測定I類抗原的試驗名稱、原理，NIH技術(shù)微量淋巴細胞毒實驗步驟多態(tài)性主要由外顯子2決定PCR-測序成熟紅細胞無，血小板有。小鼠腫瘤移植排斥，多次輸血病人體內(nèi)及經(jīng)產(chǎn)婦體內(nèi)有抗體，發(fā)現(xiàn)白細胞抗原存在多數(shù)組織中，微量淋巴細胞毒試驗，國際專題討論會，分子生物學(xué)研究。PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性)PCR-SSO(等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交)分離B淋巴細胞作微量淋巴細胞毒實驗。HLA又稱移植抗原、組織相容性抗原.主要編碼DR、DP、DQ的α、β鏈C、D、DR、