微生物基礎(chǔ)知識

1微生物基礎(chǔ)知識2編輯ppt2要點提綱凝集試驗金黃色葡萄球菌大腸埃希菌乙型溶血性鏈球菌白色假絲酵母菌編輯ppt3凝集試驗?zāi)囼灒侯w粒狀抗原（如細菌、紅細胞等）與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。玻片法是一種定性試驗方法?？捎靡阎贵w來檢測未知抗原。若鑒定新分離的菌種時，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與其混勻。數(shù)分種后，如出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，為陽性反應(yīng)。該法簡便快速，除鑒定菌種外，尚可用于菌種分型、測定人類紅細胞的ABO血型等。

編輯ppt4正離子負離子層負電荷負電荷抗原㈠負電荷

抗原

細菌和紅細胞等顆?？乖趹乙褐袔踟撾姾?，周圍吸引一層與之牢固結(jié)合的正離子，外面又排列一層松散的負離子層，構(gòu)成一個雙層離子云。在松散層內(nèi)界和外界之間的電位差形成Z電位。溶液中的離子強度愈大，Z電位也就愈大。Z電位使顆粒相互排斥。當特異抗體與相應(yīng)抗原顆?；パa結(jié)合時，抗體的交聯(lián)作用克服了抗原顆粒表面的Z電位，而使顆粒聚集在一起編輯ppt5抗原抗體反應(yīng)的原理基本原理：特異性（AD----HVR）可見性（凝集、沉淀、溶血等）結(jié)合力(4種)編輯ppt6高度互補緊密接觸產(chǎn)生結(jié)合力抗原

抗體帶電離子異性相吸靜電引力分子極化范德華引力形成氫鍵氫鍵引力形成疏水基團疏水作用力作用最小最具特異性作用最大抗原抗體結(jié)合可見反應(yīng)比例合適編輯ppt7編輯ppt8血型血型紅細胞抗原血清中的抗體AABBBAABAB無ABO無ABAB血型是指血液成分（包括紅細胞、白細胞、血小板及血漿蛋白）表面的抗原類型。通常所說的血型是指紅細胞膜上特異性抗原類型，而與臨床關(guān)系最密切，人們所熟知的是紅細胞ABO血型系統(tǒng)及Rh血型系統(tǒng)。編輯ppt9金黃色葡萄球菌定義：在BairdPaiker培養(yǎng)基或血平板上生長良好，分解甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶陽性，革蘭氏陽性葡萄狀球菌。（GB/T18204.4-2013)標準限值：《理發(fā)店、美容店衛(wèi)生標準》9666-1996規(guī)定美容工具、理發(fā)工具、胡刷用后應(yīng)消毒，不得檢出大腸菌群和金黃色葡萄球菌。

編輯ppt10生物學性狀形態(tài)和染色革蘭氏染色陽性，球形，直徑約1微米，呈葡萄串狀排列。無芽孢，無鞭毛，無莢膜。在某些化學物質(zhì)如青霉素作用下，可裂解或變成L型菌。在衰老、死亡、陳舊培養(yǎng)物中或被中性粒細胞吞噬后常轉(zhuǎn)為革蘭陰性。培養(yǎng)特性需養(yǎng)或兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基37攝氏度生長良好。生化反應(yīng)多數(shù)菌株能分解葡萄糖、麥芽糖和蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。致病性菌株能分解甘露醇，產(chǎn)酸。觸酶（過氧化氫酶）陽性，可與鏈球菌相區(qū)分。編輯ppt11所致疾病化膿性感染皮膚化膿性感染、各種器官化膿性感染、全身感染如敗血癥、膿毒血癥毒素性疾病食物中毒、燙傷樣皮炎綜合征、毒素性休克綜合征編輯ppt12毛囊炎膿皰瘡編輯ppt13金葡菌性燙傷樣皮膚綜合征編輯ppt14微生物學檢測增菌：氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯接種BP或血平板革蘭氏染色、鏡檢甘露醇發(fā)酵試驗血漿凝固酶試驗編輯ppt15增菌：氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯

編輯ppt16接種BP或血平板編輯ppt17革蘭氏染色、鏡檢：革蘭陽性、葡萄串珠狀球菌革蘭染色：結(jié)晶紫染色盧氏碘液媒染酒精脫色沙黃復染編輯ppt18金黃色葡萄球菌電鏡觀察葡萄串珠狀球菌編輯ppt19甘露醇發(fā)酵試驗編輯ppt20血漿凝固酶試驗0.5ml滅菌生理鹽水與凍干血漿混勻溶解，挑取適量菌苔與溶解血漿混勻，36℃培養(yǎng)，6小時內(nèi)觀察，如果血漿里有凝塊現(xiàn)象，即為凝固酶陽性。編輯ppt21腸桿菌科細菌是一大群生物學性狀相似的革蘭陰性桿菌，常寄居在人和動物的腸道內(nèi)，亦存在于土壤、水和腐物中。目前已有44個屬，170多個種。但該科引起人類95％以上感染的菌種卻不到20個。編輯ppt22腸桿菌科細菌共同生物學特性：1.形態(tài)與結(jié)構(gòu)中等大小G－桿菌。大多有菌毛，多數(shù)有周鞭毛，少數(shù)有莢膜，不產(chǎn)生芽胞。2.培養(yǎng)兼性厭氧或需氧。3.生化反應(yīng)乳糖發(fā)酵試驗可初步鑒別志賀菌、沙門菌等致病菌和其他大部分非致病腸道桿菌，前二者不發(fā)酵乳糖。4.抗原結(jié)構(gòu)主要有菌體O抗原、鞭毛H抗原和莢膜抗原。5.抵抗力對理化因素抵抗力不強。6.變異腸桿菌科細菌易出現(xiàn)變異菌株，其中最常見的是耐藥性變異。編輯ppt23埃希菌屬埃希菌屬（Escherichia）有6個種，只有大腸埃希菌（E.coli）是臨床最常見、最重要的一個菌種。①大腸埃希菌是腸道中重要的正常菌群②在宿主免疫力下降或細菌侵入腸外組織器官后即可成為機會致病菌，引起腸道外感染③一些血清型的大腸埃希菌具有致病性，能導致人類胃腸炎④在環(huán)境衛(wèi)生和食品衛(wèi)生學中常被用作糞便污染的衛(wèi)生學檢測指標。編輯ppt24志賀菌屬感染幾乎只局限于腸道，一般不侵入血液。典型的急性細菌性痢疾：潛伏期1～3天，突然發(fā)病，常有發(fā)熱、腹痛、膿血黏液便，伴有里急后重（tenesmus）。

編輯ppt25沙門菌屬1.腸熱癥(entericfever,

typhoidfever)

包括傷寒沙門菌引起的傷寒，甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌（原稱乙型副傷寒沙門菌）和希氏沙門菌引起的副傷寒。2.胃腸炎（食物中毒）常見食物主要為肉類食品、蛋類、奶和奶制品，系動物生前感染或加工處理過程污染所致。多見于老人、嬰兒和體弱者。3.敗血癥多見于兒童和免疫力低下成人。經(jīng)口感染后，病菌即侵入血循環(huán)。敗血癥癥狀嚴重4.無癥狀帶菌者

約1％～5％傷寒或副傷寒患者，在癥狀消失后一年仍可在其糞便中檢出沙門菌，轉(zhuǎn)變?yōu)闊o癥狀（健康）帶菌者。編輯ppt26其他菌屬一、克雷伯菌屬二、變形桿菌屬三、腸桿菌屬四、沙雷菌屬五、枸櫞酸桿菌屬六、摩根菌屬編輯ppt27總大腸菌群一個衛(wèi)生學概念，作為飲水、食品等糞便污染的指標之一總大腸菌群：指在37攝氏度24小時內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌（GB/T5750.12-2006之2.1）。包括埃希氏菌屬、枸櫞酸桿菌、克雷伯桿菌屬及腸桿菌屬等標準限值：《生活飲用水衛(wèi)生標準》GB5749-2006規(guī)定總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌不得檢出編輯ppt28大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌多管發(fā)酵法：多管發(fā)酵法總大腸菌群陽性，在含有熒光底物的培養(yǎng)基上44.5℃培養(yǎng)24小時產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶，分解熒光底物，使培養(yǎng)基在紫外光下產(chǎn)生特征性熒光的細菌，以此來檢測水中的大腸埃希氏菌的方法。（GB/T5750.12-2006之4.1）編輯ppt29大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌（E.coli）通常被稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當長的一段時間內(nèi)，一直被當作正常腸道菌群的組成部分，認為是非致病菌。直到20世紀中葉，才認識到一些特殊血清型的大腸桿菌對人和動物有病原性，尤其對嬰兒和幼畜（禽），常引起嚴重腹瀉和敗血癥，它是一種普通的原核微生物，根據(jù)不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為6類：腸致病性大腸桿菌（EPEC）、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）、腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）、腸出血性大腸桿菌（EHEC）、腸黏附性大腸桿菌（EAEC）和彌散粘附性大腸桿菌(DAEC)。編輯ppt30耐熱大腸菌群和糞大腸菌群

北美國家一般使用“糞大腸菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“糞大腸菌群”概念為等同采用AOAC方法，故而使用糞大腸菌群概念；而歐洲使用“耐熱大腸菌群”概念，較少使用“糞大腸菌群”。一般歐洲學者認為，“糞大腸菌群”的提法不太科學，耐熱大腸菌群的范圍比糞大腸菌群范圍大。

項目依據(jù)定義耐熱大腸菌群NMKL、ISO在44.5℃培養(yǎng)，24h天內(nèi)能產(chǎn)酸產(chǎn)氣的細菌糞大腸菌群NMKL在胰蛋白胨肉湯中于44.5℃，24h內(nèi)產(chǎn)生吲哚的耐熱大腸菌群AOAC于LST中36℃培養(yǎng)48h內(nèi)產(chǎn)氣，并于EC內(nèi)培養(yǎng)44℃24h產(chǎn)氣的一群細菌編輯ppt31在認證活動中，經(jīng)常有實驗室將耐熱大腸菌群等同于糞大腸菌群，標準的解釋比網(wǎng)絡(luò)解釋更具權(quán)威性。編輯ppt32耐熱大腸菌群的衛(wèi)生學意義

作為一種衛(wèi)生指標菌，耐熱大腸菌群中很可能含有糞源微生物，因此耐熱大腸菌群的存在表明可能受到了糞便污染，可能存在大腸桿菌。但是，耐熱大腸菌群的存在并不代表對人有什么直接的危害。

作為糞便污染指標菌，耐熱大腸菌群與大腸菌群、大腸桿菌相似，主要以其檢出情況來判斷食品是否受到了糞便污染。糞便是腸道排泄物，有健康者，也有腸道病患者或帶菌者糞便，所以糞便中既有正常腸道菌，也可能有腸道致病菌（如沙門氏菌、志賀式菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌等）和食物中毒者。因此，食品既然受到糞便污染就有可能對食用者造成潛在的危害。

通常情況下，耐熱大腸菌與大腸菌群相比，在人和動物糞便中所占的比例較大，而且由于在自然界容易死亡等原因，耐熱大腸菌群的存在可認為食品直接或間接的受到了比較近期的糞便污染。因而，耐熱大腸菌群在食品中的檢出，與大腸菌群相比，說明食品受到了更為不清潔的加工，腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。

耐熱大腸菌群比大腸菌群能更貼切地反應(yīng)食品受人和動物糞便污染的程度，且檢測方法比大腸桿菌簡單地多，而受到重視編輯ppt33總大腸菌群的檢測（GB/T5750.12-2006之2.1）乳糖發(fā)酵試驗（15管法）：根據(jù)污染程度，對水樣進行稀釋，選擇3個適當?shù)南♂尪龋總€稀釋度接種5管。培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，有單料、雙料之分。（GB/T18204.4-2013檢測用品用具的大腸菌群用到的是乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基）分離培養(yǎng)：伊紅美藍培養(yǎng)，革蘭氏染色，鏡檢證實試驗：挑取以上革蘭氏陰性無芽孢桿菌的菌落，進行乳糖蛋白胨培養(yǎng)液復發(fā)酵。編輯ppt34乳糖發(fā)酵編輯ppt35接種EMB培養(yǎng)基深紫黑色，有金屬光澤的菌落深紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落淡紫紅色，中心較深的菌落編輯ppt36革蘭氏染色、鏡檢：革蘭陰性、無芽孢桿菌編輯ppt37證實試驗初發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣，革蘭氏染色陰性無芽孢桿菌，同時接種乳糖發(fā)酵管，37攝氏度24小時產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實為有大腸菌群存在編輯ppt38結(jié)果報告查MPN（MostProbleNumber，最可能數(shù)）檢索表，報告每100ml水樣中的總大腸菌群可能數(shù)MPN稀釋樣品查表后乘以稀釋倍數(shù)報告之所有乳糖發(fā)酵管均陰性時，報總大腸菌群未檢出MPN檢索表應(yīng)用到的是泊松分布的統(tǒng)計方法編輯ppt39β-溶血性鏈球菌

集中空調(diào)通風系統(tǒng)送風中采集的樣品，經(jīng)35~37℃，24~48h培養(yǎng)，在血瓊脂平板上形成的典型菌落。（WS394-2012附錄F）標準限值：WS394-2012規(guī)定β-溶血性鏈球菌不得檢出編輯ppt40根據(jù)溶血現(xiàn)象將練球菌分類溶血環(huán)現(xiàn)象名稱類別致病性草綠色溶血環(huán)α溶血甲型溶血性鏈球菌多為條件致病菌完全溶血環(huán)β溶血乙型溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌致病力強不溶血丙型鏈球菌不溶血性鏈球菌無致病性編輯ppt41A群（化膿性）鏈球菌（β溶血性鏈球菌）

本屬細菌的代表種，致病性強，對人致病的鏈球菌有90%屬此種。

編輯ppt421.形態(tài)與染色

球形或橢圓形，鏈狀排列，革蘭染色陽性（G＋），無芽胞，無鞭毛。

編輯ppt432.培養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基3.生化反應(yīng)分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。分解葡萄糖。不分解菊糖，不被膽汁溶解（可鑒別甲型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌）。鏈球菌不產(chǎn)生觸酶，與葡萄球菌不同。編輯ppt444.抵抗力

一般鏈球菌均可在60℃被殺死，對常用消毒劑敏感。在干燥塵埃中生存數(shù)月。乙型鏈球菌對青霉素、紅霉素，四環(huán)素、桿菌肽和磺胺藥都很敏感。編輯ppt455.所致疾病A群鏈球菌引起的疾病約占人類鏈球菌感染的90%

淋巴管炎、蜂窩組織炎、扁桃體炎等。猩紅熱（紅色楊梅舌）(3)超敏反應(yīng)性疾病(1)化膿性感染(2)中毒性疾病風濕熱急性腎小球腎炎編輯ppt466.血平板培養(yǎng)35-37℃,24-48小時?；野咨?，0.5-0.7mm菌落，表面光滑有乳光，周圍有2-4mm完全透明溶血環(huán)。編輯ppt477.革蘭染色、鏡檢

革蘭陽性無芽孢球菌，