細(xì)胞房工作守則新

細(xì)胞房工作守則一、 常規(guī)細(xì)胞房最多可4個人同時使用。盡量避免在內(nèi)長時間逗留、交談，最好戴口罩。為保持無菌狀態(tài)，經(jīng)常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1—2h）或打開空氣消毒機消毒1-1.5h，人員在30-45min以后才能進入房間。每個細(xì)胞房一個組長，組長安排好該細(xì)胞房的值日表，值日生要負(fù)責(zé)當(dāng)天細(xì)胞房內(nèi)的所有清潔問題。組長每周安排一次徹底大掃除，包括墻面，地板，桌面，培養(yǎng)箱。每月過氧乙酸熏蒸（2h）的方式進行消毒。細(xì)胞房實驗耗材、儀器、藥品等均不可隨意帶出。培養(yǎng)基分瓶，各用自己的培養(yǎng)基，以免交叉污染。血清56度，30min滅活，冷卻后分裝，-20度保存。要經(jīng)常使用的放在4度保存。新配好的培養(yǎng)基和血清等混合后需要試培養(yǎng)，即先用一瓶正常細(xì)胞培養(yǎng)一天以上或者不加細(xì)胞放瓶中三天以上，如未出現(xiàn)污染才可以拿來繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。一旦出現(xiàn)污染，被污染的細(xì)胞先用新潔爾滅噴一下再全部扔掉；同一批的培養(yǎng)基、使用的細(xì)胞清洗液等等全部重新濾過消毒；打開培養(yǎng)箱，用75%酒精擦洗，然后用新潔爾滅擦洗（重復(fù)2次，隔天），用紫外照射4小時以上；清掃培養(yǎng)室，紫外照4小時以上，重復(fù)一次。8?清潔液的配方有三種：按重鉻酸鉀：濃硫酸：蒸餾水排列強液：63g:1000ml:200ml次強液：120g:200ml:200ml弱液：100g:100ml:1000ml最常用的是次強液。配制的時候應(yīng)選用防酸、耐熱、開口較大的容器盛清潔液。先將需要量的重鉻酸鉀和水加到容器里，最好是完全溶解。然后，緩慢、分次加入濃硫酸。配制時，注意做好自我防護。新配制的的清潔液（泡酸液）一般呈棕紅色，經(jīng)長時間使用后因有機溶劑和水分增多逐漸變成綠色，表明已經(jīng)失效，應(yīng)該重新配制.二、 培養(yǎng)箱使用規(guī)則從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數(shù)。*培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)過過濾的潔凈空氣。長時間敞開或頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱，容易造成污染。培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸氣。2-3人共用一層培養(yǎng)箱，按預(yù)定位置擺放培養(yǎng)器皿，方便查找，以免長時間敞開培養(yǎng)箱。普通培養(yǎng)中的細(xì)胞，若非實驗需要，每舸板細(xì)胞每天只需要觀察生長狀態(tài)一次，2人以上共用的細(xì)胞，可約好時間一起觀察。*頻繁將細(xì)胞拿出觀察，容易給培養(yǎng)箱造成污染，同時也會影響細(xì)胞生長條件的恒定。培養(yǎng)箱內(nèi)所接細(xì)胞須注明本人姓名（簡寫）且要對所接細(xì)胞負(fù)責(zé)到底，禁止丟在培養(yǎng)箱內(nèi)不管。三、 顯微鏡使用規(guī)則顯微鏡使用前，用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺。離開細(xì)胞房時或較長時間不需使用時，及時關(guān)上電源，延長燈泡壽命。盡量避免頻繁開關(guān)顯微鏡電源。四、 超凈臺相關(guān)操作規(guī)則超凈臺使用遵循預(yù)約原則。無預(yù)約者若有必要在他人預(yù)約時段內(nèi)使用，需先征得預(yù)約者的同意，否則應(yīng)無條件讓出工作臺，以免耽誤他人實驗。超凈臺使用前用紫外燈照射15-30分鐘滅菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區(qū)消毒，所有物品放入超凈臺內(nèi)使用前均應(yīng)消毒。點燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠，液面應(yīng)占瓶高1/3-2/3。*消毒用75%的酒精，酒精燈用95%的酒精，向噴壺或燈內(nèi)添加酒精時請留意。*酒精和酒精棉球由值日生負(fù)責(zé)補給，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞房內(nèi)存放量不足時請及時通知值日生。超凈臺中應(yīng)擺放廢液杯和廢品杯各一只，用于暫時存放廢棄物，實驗結(jié)束后將杯內(nèi)垃圾倒入水池或垃圾桶中，并沖洗晾干備用。*將廢棄的槍頭、管子內(nèi)的殘留液體打（倒）入廢液杯后再棄入廢品杯中，以免垃圾桶內(nèi)留有大量培養(yǎng)液滋生細(xì)菌?？苫厥盏囊埔汗堋㈦x心管、培養(yǎng)瓶皿等，放入裝有清水的塑料桶中浸泡，桶內(nèi)需有足量的清水以沒過浸泡物品。*可回收器皿必要時先初步涮洗后再放入桶內(nèi)，尤其是培養(yǎng)瓶或血清管中有大量高營養(yǎng)的液體殘留時，容易使桶內(nèi)的清水長菌。*保證浸泡的瓶、管內(nèi)完全被清水充滿，而不是在裝有大量空氣的情況下被壓倒桶底。*塑料桶內(nèi)物品由值日生每天負(fù)責(zé)送去清洗，使用者實驗結(jié)束后若發(fā)現(xiàn)桶已裝滿，請通知值日生或順手將塑料桶帶出細(xì)胞房。裝培養(yǎng)液的瓶子、配培養(yǎng)液的器皿勿放入塑料桶內(nèi)浸泡！應(yīng)由使用者本人及時清洗晾干備用。*因桶內(nèi)物品通常要浸泡幾小時以上才送去清洗，此時細(xì)菌可能已在桶中生長并釋放內(nèi)毒素。細(xì)菌內(nèi)毒素很難通過常規(guī)濕熱滅菌步驟去除干凈，即使干烤也不能保證其完全失活。內(nèi)毒素對細(xì)胞生長及多種實驗均有較大影響。常用培養(yǎng)器皿及清洗消毒細(xì)胞培養(yǎng)需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠制品、布類、紙類等，因此掌握清洗、消毒知識，學(xué)會清洗、消毒方法是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作必須的。一、清洗離體條件下，有害物質(zhì)直接同細(xì)胞接觸，細(xì)胞對任何有害物質(zhì)十分敏感，極少殘留物都可以對細(xì)胞產(chǎn)生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必須認(rèn)真清洗，達(dá)到不含任何殘留物的要求。（一） 玻璃器皿的清洗一般經(jīng)過浸泡、刷洗、浸酸、和清洗4個步驟。浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗，然后用5%鹽酸浸泡過夜；用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質(zhì)和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后應(yīng)立即浸入清水中備刷洗。刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中，用軟毛刷反復(fù)刷洗。不要留死角，并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱酸液，通過酸液的強氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質(zhì)。浸酸不應(yīng)少于6h，一般過夜或更長。放取器皿要小心。沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗，浸酸后器皿是否沖洗的干凈，直接影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。手工洗滌浸酸后的器皿，每件器皿至少要反復(fù)“注水一倒空”15次以上，最后用重蒸水浸洗2-3次，晾干或烘干后包裝備用。（二） 橡膠制品清洗新的橡膠制品洗滌方法：0.5mol/LNaOH煮沸15min，流水沖洗，0.5mol/LHCl煮沸15min，流水沖洗，自來水煮沸2次，蒸餾水煮沸20min，50°C烤干備用。（三） 塑料制品的清洗塑料制品特點：質(zhì)軟、易出現(xiàn)劃痕；耐腐蝕能力強、但不耐熱。清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸于自來水過夜，用紗布或棉簽和50C清洗液刷洗，流水沖洗，晾干，浸于清潔液15分鐘，流水沖洗（15-20遍），蒸餾水浸洗3次，雙蒸水泡24h,晾干備用。（四）包裝:對細(xì)胞培養(yǎng)用品進行消毒前，要進行嚴(yán)密包裝，以便于消毒和貯存。常用的包裝材料：報紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、鋁箔、較大培養(yǎng)皿等。培養(yǎng)皿、注射器、金屬器械等用牛皮紙包裝后再裝入飯盒內(nèi)，較大的器皿可以進行局部包扎。二、消毒和滅菌微生物污染是造成細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因（一） 物理消毒法紫外線消毒:離地面2m的30W燈可照射9平方米房間，每天照射2—3h，期間可間隔30min。燈管離地面2米以外要延長照射時間，2.5m照射效果較差。紫外燈照射工作臺的距離不應(yīng)超過1.5m，照射時間30min為宜。紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害，且對培養(yǎng)細(xì)胞與試劑等也產(chǎn)生不良影響，因此，不要開著紫外等操作。高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是最常用的高溫濕熱滅菌方法。對生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白質(zhì)變性凝固而使微生物死亡。布類、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養(yǎng)液都可以用這方法滅菌。不同壓力蒸汽所達(dá)到的溫度不同，不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時間不同。從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品（不包括液體），應(yīng)立即放到60-70°C烤箱內(nèi)烘干，再貯存?zhèn)溆?，否則，潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染。煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法，它具有條件簡單、使用方便等特點。高溫干熱消毒:干熱滅菌主要是將電熱烤箱內(nèi)物品加熱到160C以上，并保持90—120min，殺死細(xì)菌和芽孢，達(dá)到滅菌目的。主要用于滅菌玻璃器皿（如體積較大的燒杯、培養(yǎng)瓶）、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品（如粉劑、油劑）。干熱滅菌后要關(guān)掉開關(guān)并使物品逐漸冷卻后在打開，切忌立即打開，以免溫度驟變而使箱內(nèi)的玻璃器皿破裂。干烤箱內(nèi)物品間要有空隙，物品不要靠近加熱裝置。燒灼也是滅菌方法之一，常利用臺面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進行燒灼消毒。過濾除菌：是將液體或氣體用微孔薄膜過濾，使大于孔徑的細(xì)菌等微生物顆粒阻留，從而達(dá)到除菌目的。在體外培養(yǎng)時，過濾除菌大多用于遇熱容易變性而失效的試劑或培養(yǎng)液。目前，大多實驗室采用微孔濾膜濾器除菌。關(guān)鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。（二） 化學(xué)消毒：新潔而滅，其0.1%水溶液可對器械、皮膚、操作表面進行擦拭和浸泡消毒。（三） 抗生素消毒：抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液，是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不嚴(yán)重時的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同，應(yīng)根據(jù)需要選擇。可用于細(xì)胞培養(yǎng)的消毒滅菌方法很多，但每種方法都有一定的適應(yīng)范圍。如常用的過濾除菌系統(tǒng)、紫外照射、電子殺菌燈、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒實驗室空氣；多用新潔而滅消毒實驗室地面；常用干熱、濕熱消毒劑浸泡、紫外照射等方法消毒培養(yǎng)用器皿;采用高壓蒸汽滅菌或過濾除菌方法消毒培養(yǎng)液。補充定期的過氧乙酸熏蒸法。ml過氧乙酸原液+等體積ml水，電爐加熱熏蒸，密閉2小時以上。過氧乙酸的熏蒸效果〉氣溶膠噴霧效果〉噴灑效果，在60%?80%的相對濕度下，按1g/m3計，熏蒸2h可殺滅環(huán)境中包括芽孢在內(nèi)的所有病原微生物。市場上銷售的過氧乙酸原液就是指濃度為15%—20%的原液，不是100%的，用量為7ml/m3（1g/m3），按你們細(xì)胞室的立方米計算，需過氧乙酸的ml數(shù)，將過氧乙酸原液加水是為了增加空氣中的濕度，殺滅病毒效果較好。過氧乙酸消毒液的使用方法一、 過氧乙酸消毒液的使用1過氧乙酸消毒液的消毒方法浸泡消毒塑料、玻璃等耐酸用具、餐飲具、被褥、衣服等通常使用0.5%左右過氧乙酸的水溶液浸泡消毒。擦拭消毒電器、家具等常用0.2%?0.5%過氧乙酸擦拭消毒，消毒時消毒人員應(yīng)該戴乳膠手套。噴霧消毒各種用具、運輸工具和室內(nèi)外的門窗、地面、墻壁等使用0.3%?0.5%的水溶液用于噴霧消毒，消毒時消毒人員應(yīng)戴防護眼鏡、手套、口罩，噴灑后應(yīng)密閉門窗1?2小時。⑷熏蒸消毒過氧乙酸熏蒸進行室內(nèi)空氣消毒，殺滅細(xì)菌繁殖體的劑量為1g/m3，作用時間為120min；殺滅細(xì)菌芽胞用量3g/m3，作用時間為90min。室內(nèi)溫度不低于20°C，相對濕度在60%—80%。二、 使用過氧乙酸消毒液的注意事項1、 過氧乙酸必須在通風(fēng)、避光環(huán)境下低溫保存，不得倒置，高溫易爆。2、 過氧乙酸A、B液在使用前需混合放置24小時后，方可配制使用。3、 過氧乙酸有強烈的刺激味，對皮膚、黏膜可造成損傷，所以操作