植酸測(cè)定方法的篩選

植酸測(cè)定方法的篩選

植物酸是一種含有6個(gè)醇和6個(gè)磷酸酯的環(huán)己六醇酯，它的測(cè)定方法有很多。目前，國家和地區(qū)關(guān)于種植酸的標(biāo)準(zhǔn)制定了不同的規(guī)定。到目前為止，還沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)植物和測(cè)定方法。為此,我們選用國內(nèi)外多種植酸標(biāo)準(zhǔn)品,采用多種測(cè)定方法進(jìn)行對(duì)比測(cè)定,并進(jìn)行評(píng)價(jià),篩選了4種適合于不同情況下的植酸測(cè)定方法?，F(xiàn)報(bào)告如下。1材料和方法1.1phs-2酸值計(jì)及l(fā)xj-空氣LC-5A高效液相色譜儀(日本島津);UV-260紫外可見光譜儀(日本島津);721-B分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠);PHS-2酸度計(jì);LXJ-Ⅱ離心機(jī)(上海醫(yī)用分析儀器廠);THZ-82恒溫振蕩器(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械四廠)。植酸(瑞士Fluka公司、美國Aldrich公司、日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社、上海試劑二廠);植酸鈉(美國Sigma公司、Aldrich公司);三氯乙酸、硫酸鈉、磷酸二氫鉀、鉬酸銨、三氯化鐵、磺基水楊酸、硫酸、硝酸鈉均為分析純。1.2磺化、鐵、分光光度法稱取5g粉碎的樣品(過40目篩)于提取器中,加入5%三氯乙酸及10%硫酸鈉100ml,室溫下振蕩30min.以3600r/min離心10min,取上清液5ml,用蒸餾水稀釋至25ml后,通過陰離子交換樹脂。用0.1mol/LNaCl15ml洗脫除去溶液中無機(jī)磷和其他干擾物,再用0.7mol/LNaCl洗脫收集植酸溶液,并用蒸餾水稀釋定容至100ml,待用。①硝酸釷滴定法:移取含植酸的樣品溶液(約含植酸180mg)于250ml錐形瓶中,加入50ml蒸餾水,用0.02mol/LHCl調(diào)節(jié)pH至1.9～2.2,加熱至60℃,加入1%二甲酚橙溶液1ml,迅速用硝酸釷溶液滴定,終點(diǎn)時(shí)溶液由橙黃色變?yōu)榉奂t色。②測(cè)磷分光光度法:移取含一定量植酸的樣品溶液(含植酸5～20mg)于50ml燒杯中,加0.5ml濃硫酸和3ml的濃硝酸,控溫200℃左右消化,冷卻后,移至50ml容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度。再取1.0ml稀釋液置于50ml容量瓶中,加磷鉬酸銨和硫酸混合試劑5ml,加水稀釋至刻度,然后置于45℃水浴30min,冷卻后在660nm處測(cè)定吸光度。由磷酸二氫鉀標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品中植酸磷含量,再乘以因子3.55換算出植酸含量。③測(cè)鐵分光光度法:移取含一定量植酸的樣品溶液(含植酸0.2～1.0mg)于25ml比色管中,依次加入0.05%FeCl33ml,0.5%磺基水楊酸和緩沖液各5ml,再加蒸餾水定容至25ml.混勻后離心分離10min,取上清液,以試劑空白為參比,于500nm波長測(cè)其吸光度。由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出植酸含量。④高壓液相色譜法:取含植酸的樣品溶液(植酸濃度為2～10g/L),通過0.45μm的醋酸纖維膜過濾,用10μl微量注射器,吸取濾液直接注入高壓液相色譜儀內(nèi)測(cè)定。色譜柱為ZorboxC8,流動(dòng)相為0.025mol/LKH2PO4水溶液,流速為0.5ml/min,于254nm處測(cè)出植酸色譜峰的峰面積,由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出植酸含量。1.3統(tǒng)計(jì)處理結(jié)果用xˉ±sxˉ±s表示,組間比較采用方差分析。2結(jié)果2.1采用分光光度法測(cè)定了不同植物酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液不同植酸標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)測(cè)含量與標(biāo)簽含量的差異程度不同,其中Aldrich植酸的差值最小。見表1.2.2硝酸鹽滴定法與其他方法所測(cè)結(jié)果比較,見表1同種樣品不同測(cè)定方法所測(cè)結(jié)果的差別均呈高度顯著性(F=126.44～408.31;P均<0.001),經(jīng)兩兩比較,硝酸釷滴定法所測(cè)結(jié)果均高于其他3種方法,差別均呈高度顯著性(q=22.23～41.49,P均<0.001);其他3種方法的結(jié)果差別均無顯著性(q=0.46～2.89,P均>0.05)。見表2.3討論3.1兩種植酸標(biāo)準(zhǔn)品的比較本文結(jié)果顯示,不同植酸標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)測(cè)含量與標(biāo)簽含量不同,其中以Aldrich植酸和Sigma植酸鈉差值較小,適宜作為植酸標(biāo)準(zhǔn)品,而上海植酸和Fluka植酸的差值較大,不宜作為植酸標(biāo)準(zhǔn)品。本文結(jié)果為正確選用植酸標(biāo)準(zhǔn)品提供了依據(jù),同時(shí)建議盡快確立統(tǒng)一的植酸標(biāo)準(zhǔn)品。3.2測(cè)磷分光光度法硝酸釷滴定法結(jié)果偏高,其原因可能是將樣品中的植酸和無機(jī)磷同時(shí)測(cè)定,未能正確反映植酸的實(shí)際含量,但由于該方法操作簡單快速,故適合于無植酸標(biāo)準(zhǔn)品情況下高含量分析及工業(yè)生產(chǎn)的快速粗略檢測(cè)。測(cè)磷分光光度法采用高純度磷酸二氫鉀為標(biāo)準(zhǔn),測(cè)定準(zhǔn)確度高,精密度好,但消化較麻煩,適合于無植酸標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定及微量測(cè)定。測(cè)鐵分光光度法采用植酸為標(biāo)準(zhǔn),測(cè)定準(zhǔn)確度與測(cè)磷法相近,但它不需消化