DB51∕T 2404-2017 大熊貓種群遺傳檔案建立技術規(guī)程

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2404—2017大熊貓種群遺傳檔案建立技術規(guī)程2017

2017

四川省質量技術監(jiān)督局

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2017目次

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II

范圍

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規(guī)范性引用文件

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術語和定義

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遺傳標記選用原則

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實驗流程

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PCR

方法

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大熊貓性別鑒定的方法

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微衛(wèi)星標記使用方法

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遺傳檔案數據的管理和使用

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附錄

大熊貓微衛(wèi)星標記編號、名稱、來源及

PCR

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2017前 言本標準根據:GB/T

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2017大熊貓種群遺傳檔案建立技術規(guī)程

是指基因組中由1-6個核苷酸為基本重復單元組成的DNA串聯(lián)重復序列，例如（AC）n、（ACG）n、（ATTT

P-tp

-CTC

BEDH

-GGG

GTf,

GTr,

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2006）:ZX1-F：5

ZX1-R：5

-3ZFX-F：5

ZFX-R：5

號為基本標記，16-30號為備選標記，可根據工作目標選用合適數量的微衛(wèi)星標記。只有當基本標記不

使用4.1規(guī)定的線粒體標記引物對每個DNA樣品進行PCR擴增，各取PCR產物2-5μL，用濃度為1.5

的瓊脂糖凝膠電泳來檢測是否擴增成功，只有當PCR擴增成功的樣品才進入后續(xù)分析。若兩次提取、兩

如有多份DNA樣品來自同一個體，選一份或多份參加后續(xù)分析，但必須注明樣品編號，不要混合使

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50

s,

55℃退火45

50

s,

55

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s,

50

s,

s,

72

延伸1

min，

min)

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到135bp和354bp兩個片段。因此，PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳檢測，出現兩條帶的是雄性，出現一條帶當同時擴增鋅指蛋白基因和SRY

基因時，PCR擴增所得產物片段長度為130bp和210bp，其中長度為130bp的片段來自X染色體，長度為210bp的片段來自Y染色體，即雌性樣品擴增得到一個130bp的片段，而雄性樣品擴增得到130bp和210bp兩個片段。因此，PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳檢測，出現兩條帶的是

PCR條件的優(yōu)化主要是通過改變Mg

50

s,

55℃-65℃（根據不同的引物確定）退火45s,PCR條件的優(yōu)化主要是通過改變Mg

50

s,

55℃-65℃（根據不同的引物

當PCR擴增完成后，取PCR產物5μL，經1.5%-2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，如電泳條帶清楚、片段大小2+

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當兩個樣品的微衛(wèi)星標記分型結果中只有一個標記差異時，對出現差異的位點重復PCR擴增和基因