五味子不同炮制品對(duì)小鼠的增殖作用

五味子不同炮制品對(duì)小鼠的增殖作用

五味子是木蘭科植物的五味子。它是干燥成熟的果實(shí)，味道酸澀，性溫，心臟、肺和腎的經(jīng)絡(luò)。為臨床常用藥,具有收斂固澀,益氣生津,補(bǔ)腎寧心的功能?！侗静菥V目》中記載五味子具有“補(bǔ)元?dú)庵蛔?吸耗散之氣”及“壯水鎮(zhèn)陽”之功效,是我國(guó)應(yīng)用最廣泛的滋補(bǔ)中藥之一。臨床常用醋五味子,一般均采用醋拌勻悶潤(rùn)常壓蒸制對(duì)其進(jìn)行加工炮制。本實(shí)驗(yàn)對(duì)常壓蒸制和高壓蒸制的五味子進(jìn)行補(bǔ)益作用的比較研究。觀察五味子不同炮制品對(duì)免疫低下小鼠的免疫作用和腎陰虛小鼠的功能影響,以期對(duì)五味子補(bǔ)益作用機(jī)制有進(jìn)一步探討,為醋五味子的生產(chǎn)工藝及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。1中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心752紫外分光光度儀(上海第三分析儀器廠);分析天平(mettlerAG285,瑞士梅特勒-托利多集團(tuán));醫(yī)用超聲清洗器(KQ-500E型,昆山超聲儀器有限公司)。昆明種小白鼠,雌雄各半,體重(20±2)g(南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。印度墨汁(SchmidGmbH+Co.D-73257);聚山梨酯-80;環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司,批號(hào):07091821);香菇菌多糖(湖北廣仁藥業(yè)有限公司,批號(hào):070401);氫化可的松(天津金耀氨基酸有限公司,批號(hào):080104);六味地黃丸(河南省宛西制藥股份有限公司,批號(hào):20080211);超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒及丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào):20080418)藥材:五味子藥材購(gòu)自黑龍江鐵力市,經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)陳建偉教授鑒定為木蘭科植物五味子[Schinensischinensis(Turcz.)Baill.]的干燥成熟果實(shí)。2方法2.1五味子槍產(chǎn)品的準(zhǔn)備2.1.1生五味子2.1.2醋味省長(zhǎng)取凈五味子100g,加入20%醋拌勻,置適宜的容器內(nèi),密閉,隔水加熱至黑色,取出干燥。2.1.3高壓醋味取凈五味子100g,加入20%醋拌勻,置蒸汽消毒器內(nèi),密閉,設(shè)定溫度105℃加熱,持續(xù)1.5h,待壓力降至零刻度時(shí)取出,干燥。2.2水回流提取液的制備分別取五味子不同炮制品各100g,加1000mL的水回流提取2次,每次各1h,過濾,合并提取液,濃縮至100mL備用。再分別稀釋成高、低劑量組(0.5,0.1g·mL-1)。2.3模型分組及給藥按文獻(xiàn)法,取18~22g清潔級(jí)小鼠90只,隨機(jī)分成9組,每組10只。雌雄各半,分別為:①空白對(duì)照組:生理鹽水;②模型組:生理鹽水;③陽性對(duì)照組:香菇菌多糖藥液;④生品組Ⅰ:生品水煎液;⑤生品組Ⅱ:生品水煎液;⑥常壓蒸制品組Ⅰ:常壓蒸制品水煎液;⑦常壓蒸制品組Ⅱ:常壓蒸制品水煎液;⑧高壓蒸制品組Ⅰ:高壓蒸制品水煎液;⑨高壓蒸制品組Ⅱ:高壓蒸制品水煎液。各組每日灌胃給藥1次,連續(xù)8d。模型組和給藥組在給藥第1天腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg·kg-1,連續(xù)3d。小鼠末次給藥后30min,立即尾靜脈注射20%的印度墨汁0.1mL·10g-1,于2和20min分別眼眶取血20μL,溶于0.1%Na2CO3溶液5mL中搖勻,于680nm處,0.1%Na2CO3溶液調(diào)零,測(cè)定吸收度,計(jì)算廓清指數(shù)K。處死小鼠,取肝臟、脾臟、胸腺稱重,脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)分別按每10g體重脾臟和胸腺的mg數(shù),計(jì)算吞噬指數(shù)α。2.4外陽性對(duì)照組小鼠隨機(jī)分為9組,每組10只,雌雄各半,分別為:除“2.3”項(xiàng)下外③陽性對(duì)照組:六味地黃丸藥液。其余同“2.3”項(xiàng)下。各組每日按20mL·kg-1劑量灌胃給藥1次,連續(xù)11日。除空白組外,其他組于給藥第7天皮下注射氫化可的松50mg·kg-1,連續(xù)4d。2.4.1小鼠從棒上死亡率的檢測(cè)以轉(zhuǎn)棒法觀察(轉(zhuǎn)速12r·min-1),選用在棒上停留3min以上的動(dòng)物,末次給藥后1h,按轉(zhuǎn)棒法測(cè)定5min內(nèi)各組小鼠從棒上跌落的次數(shù)。2.4.2影響腎陰虛鼠血清中sod活力和mda含量末次給藥1h后,小鼠眼眶取血,3000r·min-1離心10min,取血清依照試劑盒說明書上要求檢測(cè)血清SOD、MDA。3結(jié)果3.1各組大鼠尾腺指數(shù)的比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1,與空白組比較,模型組各個(gè)免疫指標(biāo)均低于空白組,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(P<0.01);與模型組比較,陽性藥物組指標(biāo)K、α、脾臟指數(shù)高于模型組,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(P<0.01);胸腺指數(shù)指標(biāo)高于模型組,統(tǒng)計(jì)差異顯著(P<0.05)。與模型組比較,生品、常壓蒸、高壓蒸樣品組指標(biāo)K、α高于模型組,統(tǒng)計(jì)差異顯著(P<0.05),且隨濃度呈上升趨勢(shì);生品組指標(biāo)胸腺指數(shù)低于模型組統(tǒng)計(jì)差異顯著(P<0.05)。與同劑量生品比較,常壓蒸、高壓蒸樣品組指標(biāo)K高于生品組,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(P<0.01);常壓蒸、高壓蒸高劑量組指標(biāo)胸腺指數(shù)高于生品組,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(P<0.01)。3.2各組小鼠血清中sod活力、mda含量測(cè)定腎陰虛小鼠轉(zhuǎn)棒耐力實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與空白組比較,模型組跌落次數(shù)提高,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(P<0.01),與模型組比較,陽性藥組跌落次數(shù)減少,統(tǒng)計(jì)差異顯著(P<0.05);與模型組比較,高壓蒸高劑量組跌落次數(shù)低于模型組,有顯著性差異(P<0.05)。與同劑量生品組比較,常壓蒸樣品高劑量跌落次數(shù)低于生品組,有顯著性差異(P<0.05),高壓蒸樣品高劑量組跌落次數(shù)低于生品組,有非常顯著性差異(P<0.01)。腎陰虛小鼠血清中SOD活力、MDA含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)表明,在SOD測(cè)定中,與空白組比較,模型組SOD含量降低,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(P<0.01);與模型組比較,陽性藥組SOD含量升高,統(tǒng)計(jì)差異顯著(P<0.05);與模型組比較,常壓蒸和高壓蒸五味子高劑量組SOD含量高于模型組,統(tǒng)計(jì)差異顯著(P<0.05)。在MDA測(cè)定中,與空白組比較,模型組MDA含量升高,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(P<0.01);與模型組比較,陽性藥組含量降低,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(P<0.01);各個(gè)樣品組MDA含量均低于模型組,有非常顯著性差異(P<0.01)。見表2。4蒸藥和制備工藝對(duì)時(shí)藥加味劑和醋品中添加不同成分的克氏原螯藥一般可提高樣品的質(zhì)量,其和官五味子作為滋補(bǔ)藥具有補(bǔ)腎寧心的功效,因此我們還選擇了通過考察對(duì)腎陰虛小鼠的影響來評(píng)價(jià)五味子的補(bǔ)益作用。采用氫化可的松進(jìn)行腎陰虛模型造模。五味子醋制后能增強(qiáng)其補(bǔ)益作用,但其炮制品補(bǔ)益作用的實(shí)驗(yàn)研究卻鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,常壓蒸五味子、高壓蒸五味子均能增強(qiáng)補(bǔ)益作用,兩者的補(bǔ)益效果均未有顯著性差異,并且兩者與同一劑量的生品比較,作用增強(qiáng)。提示以臨床用藥安全有效為