GB/T 43163-2023苜蓿黃萎病菌溯源檢測方法

ICS6502020

CCSB.16.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T43163—2023

苜蓿黃萎病菌溯源檢測方法

TraceabilitydetectionofVerticilliumalbo-atrumReinkeetBerthold

2023-09-07發(fā)布2024-04-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T43163—2023

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任

。。

本文件由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本文件起草單位中華人民共和國深圳海關(guān)深圳市檢驗檢疫科學(xué)研究院

:、。

本文件主要起草人高瑞芳章桂明王穎黃河清向才玉

:、、、、。

Ⅰ

GB/T43163—2023

苜蓿黃萎病菌溯源檢測方法

1范圍

本文件描述了應(yīng)用基因片段和生物信息學(xué)分析方法對苜蓿黃萎病菌進行溯源檢測的方法

。

本文件適用于苜蓿黃萎病菌相關(guān)寄主植物材料中攜帶的苜蓿黃萎病菌的溯源檢測

。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件

。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

鄰接法neighbor-joining

基于最小演化準(zhǔn)則的迭代聚類方法

。

4方法原理

苜蓿黃萎病菌拉丁名Verticilliumalboatrum基本信息見附錄溯源是利

,-ReinkeetBerthold,A。

用對物種有進化和溯源價值的基因片段將核酸序列信息與來源地寄主等來源信息進行相關(guān)性歸類

、。

檢測過程是應(yīng)用生物信息學(xué)的分析手段篩選有效區(qū)分種內(nèi)差異并且有效歸類的基因片段或分子標(biāo)

記獲得這些基因片段或分子標(biāo)記的核酸序列應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)手段完成核酸序列與來源地寄主信息的主

,,、

成分分析完成不同來源地寄主個體的群體分子系統(tǒng)進化關(guān)系和群體結(jié)構(gòu)分析基于基因序列的相似

,、,

度和重復(fù)率等構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)進化圖

,。

5儀器和試劑

51儀器與試驗用具

.

儀器恒溫恒濕培養(yǎng)箱超凈工作臺低溫冰箱擴增儀冷凍離心機核酸蛋白分析儀

:、、-20℃、PCR、、、

電泳儀凝膠成像系統(tǒng)高壓滅菌鍋

、、。

試驗用具解剖刀離心管鑷子移液器凍存管培養(yǎng)皿酒精燈接種針

:、、、、、、、。

52試劑

.

試劑酒精十六烷基三甲基溴化銨Taq酶Taq緩沖液標(biāo)

:70%、(CTAB)、PCR、PCR、dNTP、DNA

記無菌超純水

、。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基去皮土豆切成小方塊加入無菌水煮沸

(PDA):200g,1000mL,

四層紗布過濾得到濾液濾液中加入葡萄糖瓊脂粉加熱溶解后將溶液定容至

15min,,18g