大學(xué)生科研開題報(bào)告

承德醫(yī)學(xué)院大學(xué)生科研計(jì)劃申請(qǐng)書項(xiàng)目名稱：蒲公英水煎劑對(duì)雙腎雙夾高血壓大鼠血壓影響及心血管的重塑研究類別：應(yīng)用基礎(chǔ)研究申請(qǐng)單位（學(xué)生）：09級(jí)臨本09班申請(qǐng)人：09級(jí)臨本9班----第八小組小組組員：駱森林盧會(huì)杰吳天士郝婷婷楊淑嫻劉娟娟指導(dǎo)教師：于海榮申報(bào)日期：11月03日項(xiàng)目名稱蒲公英水煎劑對(duì)雙腎雙夾高血壓大鼠血壓的影響及心血管的重塑起止時(shí)間.11—.11申請(qǐng)經(jīng)費(fèi)3000元研究類別應(yīng)用基礎(chǔ)研究預(yù)期水平國(guó)內(nèi)領(lǐng)先課題負(fù)責(zé)人姓名部系年級(jí)所學(xué)專業(yè)基礎(chǔ)部09級(jí)臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師職稱學(xué)歷學(xué)位年齡專業(yè)項(xiàng)目?jī)?nèi)容摘要蒲公英MongolianDandelion屬菊科數(shù)年生草本植物，俗稱“尿床草"

因其對(duì)于利尿有非常好的效果而得名。它具有豐富的維生素Ａ和Ｃ及礦物質(zhì)。在加拿大是正式注冊(cè)為利尿，解水腫的草藥。并且體內(nèi)的低鉀不會(huì)連同水分排出。根據(jù)利尿降壓藥的原理，鈉的攝入量與血壓親密有關(guān)，利尿藥能排鈉、利尿，使血容量減少，心臟血液輸出量下降，血壓下降。中藥抗高血壓的研究及應(yīng)用逐漸深入，現(xiàn)已經(jīng)有多種單味及中藥復(fù)方用于臨床高血壓的治療。蒲公英在臨床上有利尿、緩瀉、退黃疸、利膽等功能，但暫無有關(guān)降壓的報(bào)道，由其有著較強(qiáng)的利尿作用。本研究給雙腎雙夾高血壓大鼠以蒲公英水煎劑，用無創(chuàng)傷鼠尾動(dòng)脈血壓測(cè)量?jī)x測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓，對(duì)比吲達(dá)帕胺（利尿降壓藥）的降壓效應(yīng)，并觀測(cè)決蒲公英對(duì)雙腎雙夾高血壓大鼠血壓的影響，為蒲公英用于臨床降壓提供試驗(yàn)根據(jù)。一、立論根據(jù)（包括科學(xué)意義、應(yīng)用背景、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)實(shí)狀況分析、參照文獻(xiàn)）科學(xué)意義及應(yīng)用前景高血壓（hypertension）對(duì)機(jī)體的影響取決于血壓升高和血液動(dòng)力學(xué)變化的速度、程度、持續(xù)時(shí)間以及原發(fā)性疾病的狀況等多種原因。其影響重要表目前心、腦、腎等重要器官的功能和構(gòu)造的變化。而如今，利尿降壓也在臨床廣泛應(yīng)用，可是今年利尿劑用于降壓也出現(xiàn)了某些副作用，例如：①.低血鉀癥利尿劑可使腎小管在排鈉同步也排鉀，使鉀的排出增長(zhǎng)而導(dǎo)致低鉀，此時(shí)病人常體現(xiàn)全身無力，肌肉張力低下，腹脹，食欲不振，消化不良，心悸和期前收縮等癥狀。查心電圖有時(shí)可有T波低平和增高的U波，或T-U波融合。一旦發(fā)既有低鉀趨向應(yīng)補(bǔ)鉀，并進(jìn)行必要的監(jiān)護(hù)。②高尿酸血癥噻嗪類利尿劑能引起高尿酸血癥，誘發(fā)痛風(fēng)，減低腎功能，故有痛風(fēng)及腎功能不全者，慎用噻嗪類利尿劑。蒲公英為菊科數(shù)年生草本植物，具有豐富的維生素Ａ和Ｃ及礦物質(zhì)。在加拿大是正式注冊(cè)為利尿，解水腫的草藥。并且體內(nèi)的低鉀不會(huì)連同水分排出。臨床上常用于利尿、緩瀉、退黃疸、利膽等功能，但暫無有關(guān)降壓的報(bào)道，有文獻(xiàn)報(bào)道其有著較強(qiáng)的利尿作用，但未表明其品種【1】。少見有用于降壓的報(bào)道。動(dòng)物試驗(yàn)是研究高血壓的發(fā)病機(jī)制及防治措施的重要手段，人們已用不一樣的措施制備了多種高血壓動(dòng)物模型(遺傳性、神經(jīng)原性、腎性、內(nèi)分泌性、鹽性等)用于高血壓的試驗(yàn)研究。雙腎雙夾為腎性高血壓動(dòng)物模型，具有高血壓形成率、存活率高的特點(diǎn)，并且抵達(dá)高峰后血壓穩(wěn)定、波動(dòng)小，為多種升壓和降壓試驗(yàn)發(fā)明良好的條件。本研究觀測(cè)蒲公英水煎劑對(duì)雙腎雙夾腎性高血壓大鼠血壓及心血管重構(gòu)的影響，并觀測(cè)其對(duì)心臟的保護(hù)作用【2】，為蒲公英水煎劑降壓的臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)根據(jù)。參照文獻(xiàn)【1】王裕生.中藥藥理與應(yīng)用.北京人民衛(wèi)生出版社.1983；176【2】金政,李相伍,金美善等;蒲公英對(duì)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究[J];中國(guó)中醫(yī)藥科技;05期二、研究?jī)?nèi)容（闡明詳細(xì)研究?jī)?nèi)容、擬處理的關(guān)鍵問題和創(chuàng)新點(diǎn)）研究?jī)?nèi)容蒲公英水煎劑對(duì)雙腎雙夾高血壓大鼠動(dòng)脈血壓的影響。蒲公英水煎劑對(duì)心血管系統(tǒng)的重塑效果。擬處理的關(guān)鍵問題1.用尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓。2.大鼠左心室插管術(shù)測(cè)定大鼠左心功能。3.HE染色觀測(cè)蒲公英對(duì)高血壓大鼠心血管的影響。創(chuàng)新點(diǎn)1.蒲公英水煎劑對(duì)雙腎雙夾高血壓大鼠有降壓作用。2.觀測(cè)蒲公英水煎劑對(duì)雙腎雙夾高血壓大鼠心血管重塑效果。三、研究方案（包括研究措施、試驗(yàn)方案、技術(shù)路線）一.試驗(yàn)材料1.試驗(yàn)動(dòng)物:健康雄性wistar大鼠45只,體重200±10g。2.試驗(yàn)器械與藥物：無菌手術(shù)器械一套，無創(chuàng)尾動(dòng)脈血壓測(cè)定分析系統(tǒng)BP—6，BL—420生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)，顯微鏡，戊巴比妥鈉;鋁制易拉罐;無菌針灸針;手術(shù)絲線，規(guī)格5/0;BP_6無創(chuàng)動(dòng)物血壓測(cè)試儀。蒲公英，10%水合氯醛，吲達(dá)帕胺（利尿降壓藥），3%戊巴比妥鈉雙腎雙夾高血壓模型制備鋁夾的制作：將鋁制易拉罐表面油漆刮掉，剪成長(zhǎng)12mm、寬1mm的鋁條，按需要將不一樣直徑的針灸針置于長(zhǎng)條之間，用尖嘴鉗小心壓制成圓形小環(huán)，環(huán)的內(nèi)徑與針灸針直徑基本相等。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，術(shù)前一天所有手術(shù)器械進(jìn)行高壓蒸汽滅菌備用，下午6時(shí)開始對(duì)次日手術(shù)大鼠禁食，不禁水。自制鋁夾于手術(shù)當(dāng)日在75%酒精溶液中至少浸泡30分鐘。手術(shù)過程：腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液(0.15ml/100g)，麻醉wistar大鼠，仰臥位固定備皮消毒后，鋪無菌手術(shù)洞巾，于劍突下沿腹正中線依次切開皮膚、肌腱，腹膜進(jìn)入腹腔，狹窄左腎動(dòng)脈時(shí)，用生理鹽水紗布包好腹腔臟器將其推向右側(cè)，暴露左腎及左腎蒂，左腎動(dòng)靜脈包裹在一種血管鞘中，一般狀況左腎動(dòng)脈位于腎靜脈的上后方(偶爾會(huì)出目前腎靜脈下方或橫跨在腎靜脈的上方)，可用潤(rùn)濕生理鹽水的棉簽撥開腎靜脈，再用無齒小彎鑷在動(dòng)靜脈之間小心分離，分出左腎動(dòng)脈約0.5cm，將一內(nèi)徑為0.2mm或0.25mm的鋁夾呈水平方向套在左腎動(dòng)脈上，務(wù)必使左腎動(dòng)脈所有落入鋁夾頂部的圓形小孔內(nèi)，距小孔約0.25cm處用5/0手術(shù)絲線結(jié)扎，使鋁夾的兩腳緊密閉合。以狹窄后左腎顏色變?yōu)椤皽\紅色”為宜。狹窄右腎動(dòng)脈時(shí)將腹腔臟器推向左側(cè)，暴露右腎及右腎蒂，右腎動(dòng)脈位置變異少，且與右腎靜脈相距稍遠(yuǎn)，較左腎動(dòng)脈易于分離。在下腔靜脈與腹積極脈之間與右腎水平線相交處分開腹膜后壁即見右腎動(dòng)脈，分離狹窄右腎動(dòng)脈，詳細(xì)措施同左腎動(dòng)脈。多數(shù)狀況下肉眼可見右腎動(dòng)脈直徑較左腎動(dòng)脈大，故鋁夾直徑的選擇上亦可以視詳細(xì)狀況進(jìn)行調(diào)整，本研究常用0.3mm～0.4mm內(nèi)徑鋁夾狹窄右腎動(dòng)脈。亦以狹窄后右腎顏色變?yōu)椤皽\紅色”為宜。雙腎動(dòng)脈狹窄完畢行腹腔、肌層全層持續(xù)縫合，間斷縫合皮膚，手術(shù)完畢。試驗(yàn)組僅游離左右腎動(dòng)脈，套入鋁夾后取出，不予狹窄。術(shù)后護(hù)理：待動(dòng)物清醒后，放入單籠喂養(yǎng)，注意保持呼吸道暢通，用100瓦白熾燈距離60cm照8小時(shí)以保溫。術(shù)后禁食24小時(shí)，但不禁水，術(shù)后3天親密觀測(cè)皮膚切口、精神狀態(tài)及進(jìn)食進(jìn)水狀況。血壓測(cè)量：采用BP_6無創(chuàng)動(dòng)物血壓測(cè)試儀測(cè)定大鼠清醒狀態(tài)下尾動(dòng)脈血壓。將大鼠置于儀器配套的固定籠中，置30℃恒溫箱預(yù)熱15分鐘，待大鼠完全安靜后將鼠尾套袖放置于鼠尾的根部，套袖以約(20～30)mmHg/s的速度自動(dòng)充氣加壓直至脈搏波消失，維持6s后套袖自動(dòng)放氣，出現(xiàn)的第一種血壓波即為收縮壓。持續(xù)測(cè)量至少三次，每次測(cè)量間隔一定期間，記錄心率變化≤10次/分、血壓變化≤6mmHg的三次讀數(shù)，取其均數(shù)為當(dāng)日收縮壓值。以此法測(cè)量大鼠術(shù)前血壓，血壓在85mmHg～120mmHg范圍為正常血壓大鼠，術(shù)后血壓比自身術(shù)前血壓升高≥30mmHg者鑒定為高血壓。三．試驗(yàn)分組、給藥及觀測(cè)1.分組：將成功雙腎雙夾腎性高血壓大鼠，隨機(jī)平均分為3組：陰性對(duì)照組（手術(shù)但不給藥），試驗(yàn)組（手術(shù)并給蒲公英水煎劑），陽(yáng)性對(duì)照組（手術(shù)并給吲達(dá)帕胺）于給藥期間，定期測(cè)量尾動(dòng)脈壓。2.給藥；試驗(yàn)組：每只大鼠每日給以10g蒲公英水煎劑20ml代水飲，飲完后，自由飲清水。陽(yáng)性對(duì)照組：每只大鼠每日口服吲達(dá)帕胺2.5mg/日一次，自由飲清水。陰性對(duì)照組：自由飲清水。3.觀測(cè)：血壓：給藥后每?jī)芍軠y(cè)一次鼠尾動(dòng)脈收縮壓，至給藥第8周。左心室功能測(cè)定:給藥觀測(cè)8周后，試驗(yàn)結(jié)束前，腹腔麻醉，行左心室插管術(shù)測(cè)大鼠左室舒張末壓等心功能指標(biāo)。形態(tài)學(xué)觀測(cè)：給藥觀測(cè)8周，腹腔麻醉后，行左心室插管術(shù)測(cè)大鼠左心室功能后，取心臟稱左室重量后，取部分左心室，甲醛固定后石蠟包埋。取胸積極脈、腎動(dòng)脈、腸系膜上動(dòng)脈第2級(jí)分支，甲醛固定后石蠟包埋、切片。血管橫切成3μm薄片作蘇木精—伊紅染色。在光學(xué)顯微鏡下通過圖像分析儀對(duì)血管作形態(tài)學(xué)測(cè)量、觀測(cè)心肌構(gòu)造變化。測(cè)量血管在最舒張時(shí)的管腔內(nèi)徑L、血管壁中層厚度M、中層厚度與管腔比值M/L、血管壁橫截面積CSA。每個(gè)標(biāo)本測(cè)量3個(gè)切片，取平均值。四．記錄學(xué)處理用Excel建立數(shù)據(jù)庫(kù)，以SPSS13．0記錄分析軟件分析數(shù)據(jù)。定量資料以±s表達(dá)，組間比較采用t檢查，多組間比較采用方差分析，定性資料比較采用x2檢查，P<0．05為有記錄學(xué)意義。四、預(yù)期目的1.明確蒲公英水煎劑的降壓效應(yīng)。2.明確蒲公英水煎劑對(duì)高血壓大鼠血管重塑及心血管的重塑作用。3.公開刊登論文1-2篇。五、研究進(jìn)度安排（規(guī)定詳細(xì)詳細(xì)、切實(shí)可行）11月---12月文獻(xiàn)查閱、試驗(yàn)設(shè)計(jì)12月試驗(yàn)準(zhǔn)備、購(gòu)置動(dòng)物、飼料01月---06月試驗(yàn)觀測(cè)07月---11月數(shù)據(jù)記錄、成果分析撰、寫論文并刊登六、經(jīng)費(fèi)預(yù)算年度金額使用闡明1200元500元300元1000元?jiǎng)游镔M(fèi)飼料費(fèi)藥物、試劑文章刊登費(fèi)七、參與人員及分工姓名性別專業(yè)職務(wù)分工駱森林盧會(huì)杰男臨床醫(yī)學(xué)學(xué)生試驗(yàn)設(shè)計(jì)，模型復(fù)制，試驗(yàn)觀測(cè)吳天士男臨床醫(yī)學(xué)學(xué)生動(dòng)物喂養(yǎng)，動(dòng)脈血壓測(cè)量楊淑嫻女臨床醫(yī)學(xué)學(xué)生動(dòng)物喂養(yǎng)，動(dòng)脈血壓測(cè)量郝婷婷女臨床醫(yī)學(xué)學(xué)生動(dòng)物喂養(yǎng)，動(dòng)脈血壓測(cè)量劉娟娟女臨床醫(yī)學(xué)學(xué)生動(dòng)物喂養(yǎng)，形態(tài)學(xué)觀測(cè)負(fù)