曲克蘆丁對(duì)溫敏水凝膠的溫敏性影響

曲克蘆丁對(duì)溫敏水凝膠的溫敏性影響

敏水凝膠是一種智能水凝膠。能夠感知和響應(yīng)周圍溫度的變化，主要表現(xiàn)為體積的變化。使用聚丙交酯乙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(PLGA-PEG-PLGA)溫敏水凝膠作為藥物載體已有相關(guān)研究。就溫敏水凝膠對(duì)藥物釋放的影響而言,現(xiàn)有研究主要集中在凝膠對(duì)藥物的緩釋作用上,本工作將PLGA-PEG-PLGA溫敏水凝膠作為脈沖式藥物釋放的載體,通過體外控制溫敏水凝膠溫度變化來控制凝膠的溶脹與收縮進(jìn)而使藥物按照患者病情需要進(jìn)行脈沖式釋放,大大提高了藥物的利用度,減少了藥物不良反應(yīng)也提高了患者的順應(yīng)性。1實(shí)驗(yàn)部分1.1曲克蘆丁注射液PLGA-PEG-PLGA(自制,GPC測(cè)定共聚物重均相對(duì)分子質(zhì)量為7361,數(shù)均相對(duì)分子量為6025);曲克蘆丁注射液(2mL∶60mg,青島金峰制藥有限公司,批號(hào)20100511)。紫外分光光度計(jì),UV2550型,日本島津公司;HPLC工作站,安捷倫1200型,美國(guó)Agilent公司;空氣浴搖床,SL300型,韓國(guó)JeioTech公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1曲克蘆丁溫敏水凝膠溶液的配制采用物理混合法取曲克蘆丁注射液加入到溫敏水凝膠中充分振蕩混勻后制成曲克蘆丁溫敏水凝膠溶液。將制備好的含藥溫敏水凝膠自然放置2周,另取樣品在3000r·min-1下離心15min觀察有無分層現(xiàn)象。1.2.2相變溫度和沉淀溫度的測(cè)定取含曲克蘆丁1.2mg·mL-1、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的凝膠樣品水溶液用試管倒置法考察含藥溫敏水凝膠的相變溫度和沉淀溫度,將含曲克蘆丁的溫敏凝膠水溶液置于試管中水浴加熱,從25℃持續(xù)升溫,每次升高0.5℃,直到發(fā)生相變和沉淀。當(dāng)溶液形成凝膠并保持10s不流動(dòng)時(shí)則判定此時(shí)的水浴溫度為凝膠的相變溫度,繼續(xù)升溫,當(dāng)樣品出現(xiàn)白色沉淀并且可以流動(dòng)時(shí)即為沉淀溫度,每個(gè)樣品測(cè)定3次,取平均值作為樣品的相變溫度和沉淀溫度。同樣方法測(cè)定空白水凝膠的相變溫度,將兩者進(jìn)行比較。1.2.3熱敏水凝膠水提取物的測(cè)定1.2.3.1.測(cè)量波長(zhǎng)的確定取曲克蘆丁注射液稀釋液(24μg·mL-1)用日本島津UV2550紫外分光光度計(jì)在200~400nm范圍內(nèi)掃描確定測(cè)定波長(zhǎng)。1.2.3.紫外檢測(cè)峰面積將曲克蘆丁注射液配制成系列濃度為6,12,18,24,30,48μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)液,用Agi-lent1200DAD紫外檢測(cè)器測(cè)定峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。進(jìn)樣量為20μL,流動(dòng)相為蒸餾水,測(cè)定波長(zhǎng)為“1.2.3.1”中確定的最大吸收峰。1.2.4方法精密度試驗(yàn)按照“1.2.3.1”中的測(cè)定波長(zhǎng)和“1.2.3.2”中的測(cè)定方法取濃度為6μg·mL-1的曲克蘆丁注射液同樣方法在24h內(nèi)進(jìn)樣6次,以峰面積計(jì)算日內(nèi)精密度。同樣方法,取濃度為6μg·mL-1的曲克蘆丁注射液連續(xù)6d進(jìn)樣,以峰面積計(jì)算日間精密度。1.2.5藥物釋放曲線測(cè)定取相變溫度為25℃的溫敏水凝膠加入曲克蘆丁配制成含藥1.2mg·mL-1的曲克丁溫敏水凝膠溶液。取1mL放入底部直徑為10mm的10mL試管中,將試管置于40℃空氣浴搖床中(80r·min-1),待其相變以后再加入8mL蒸餾水從此時(shí)開始計(jì)算時(shí)間。以后每2h取樣,取樣量為1mL,同時(shí)加入1mL新鮮的蒸餾水以保持漏槽條件,并調(diào)節(jié)搖床溫度觀察在不同溫度下曲克蘆丁溫敏水凝膠的釋藥行為(溫度為40℃和30℃交替)。樣品用Agilent1200DAD紫外檢測(cè)器來分析,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算藥物濃度及累計(jì)釋放量,以2h累積釋藥百分率對(duì)時(shí)間作圖,繪制載藥膠束的藥物釋放曲線。累積藥物釋放百分率Q的計(jì)算公式為式(1)中:Q,藥物的累積釋放率,%;Cn,第n個(gè)時(shí)間點(diǎn)所取樣品質(zhì)量濃度,μg·mL-1;V,釋放介質(zhì)總體積,(本實(shí)驗(yàn)中為蒸餾水8mL);Vi,第i個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣體積,1mL;Ci,第i個(gè)時(shí)間點(diǎn)所取樣品濃度(V0及C0均為零),mg·mL-1;mdrug,用于釋放的膠束中藥物的質(zhì)量,mg;n,置換釋放介質(zhì)的次數(shù)。2結(jié)果與討論2.1plga-peg-plga凝膠的制備制備好的含藥溫敏水凝膠自然放置2周或3000r·min-1下離心15min,均無分層現(xiàn)象,說明曲克蘆丁在PLGA-PEG-PLGA溫敏水凝膠中被膠束充分包裹。2.2曲克蘆丁對(duì)溫敏水凝膠的溫敏性水凝膠的相變圖見圖1。實(shí)驗(yàn)證明,加入曲克蘆丁以后PLGA-PEG-PLGA溫敏水凝膠的溫敏性并沒有發(fā)生明顯的變化,說明加入曲克蘆丁以后并沒有影響溫敏水凝膠原有的溫度敏感性,所以可以控制含曲克蘆丁溫敏水凝膠的溫度及其相變。2.3熱敏水凝膠水的外劑測(cè)定2.3.1雙曲面圖4:《全球最優(yōu)條件》圖2曲克蘆丁的紫外吸收光譜(24μg·mL-1)見圖2。由圖2可以看出,曲克蘆丁在254nm和348nm處具有大的吸收(與文獻(xiàn)報(bào)道基本相符),本工作選用348nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍以峰面積為縱坐標(biāo),曲克蘆丁濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3?；貧w方程為y=17.156x-25.393,相關(guān)系數(shù)r=0.9997,表明曲克蘆丁在6~48μg·mL-1范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.4精密相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差日內(nèi)精密度考察結(jié)果見表1。日間精密度考察結(jié)果見表2。由表1和表2可見,系統(tǒng)日間和日內(nèi)精密相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.22%和0.85%,均小于2%,說明系統(tǒng)精密度良好,該方法準(zhǔn)確可行。2.5第一次升溫溫度要比之后再升溫時(shí)藥物釋放速率加快的特點(diǎn)曲克蘆丁PLGA-PEG-PLGA凝膠溶液體外變溫情況下釋藥結(jié)果見圖4。從圖4可以看到,高溫時(shí)曲克蘆丁從溫敏水凝膠中釋放的速度比低溫時(shí)快。多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明每次實(shí)驗(yàn)過程中的第一次升高溫度要比之后再升溫時(shí)藥物釋放速率加快的更加顯著。這主要是因?yàn)闇孛羲z在第一次升溫時(shí)膠束迅速聚集,原本松散的膠束內(nèi)核因膠束的聚集而收縮變的緊實(shí),這使得核內(nèi)的藥物及部分水被排擠出來,釋放于介質(zhì)中;另外,膠束聚集使粘附在PEG鏈空隙的藥物被排出也進(jìn)入釋放介質(zhì)。而在降溫的過程中膠束其實(shí)并沒有完全恢復(fù)到原來沒有升溫之前的狀態(tài)(聚集的膠束并沒有完全的散開),所以當(dāng)再次升溫時(shí)膠束的聚集狀態(tài)變化并不像第一次升溫時(shí)那么大,因此藥物釋放也沒有第一次升溫時(shí)變化的那么明顯,這在國(guó)外研究NIPAAm溫敏水凝膠時(shí)也被證實(shí)。3曲克蘆丁的加入方法選用相變溫度為25℃的PLGA-PEG-PLGA為載體,曲克蘆丁為模型藥物,物理混合法制得凝膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%含