中藥口服吸收后含藥血清成分及代謝產(chǎn)物的對比研究

中藥口服吸收后含藥血清成分及代謝產(chǎn)物的對比研究

一、中藥血清化學(xué)的研究中藥是中國傳統(tǒng)藥物的總稱。單一藥物和復(fù)方根據(jù)中醫(yī)理論在處理和輔助臨床疾病方面發(fā)揮著重要作用。但中藥及復(fù)方成分極為復(fù)雜,其不同成分之間的相互作用及其在應(yīng)用過程中產(chǎn)生成分變化的復(fù)雜性,使得中藥及復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明這一問題十分突出,從而嚴重地影響和制約了中藥復(fù)方的發(fā)展和中藥現(xiàn)代化進程。1984年,日本國立京都醫(yī)院內(nèi)分泌疾病中心田代真一提出了含藥血清的研究方法,并進行一系列富有成效的研究,隨后,我國學(xué)者和科研人員也紛紛投入了針對含藥血清的“血清藥物化學(xué)”這一富修回日期:2010-07-23有潛力的研究領(lǐng)域,在含藥血清的方法學(xué)探索、藥效評價及應(yīng)用等方面進行了一系列有意義的研究。所謂“含藥血清”是指給動物或人服用一定量的藥物后,經(jīng)一定的時間采血所獲得的具有一定的藥理作用的血清。中藥血清化學(xué)的研究方法正是基于中藥必須經(jīng)由用藥部位進入血液循環(huán)才能起作用(胃腸道直接起作用及外用藥除外)這一思路,通過研究中藥或復(fù)方口服后被吸收入血的“含藥血清”中的各個移行成分,來間接、快速地篩選有活性的藥效成分,并借此來探究中藥復(fù)方的配伍機制的,即“分析鑒定中藥口服后血清中的移行成分,確定中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)并研究其體內(nèi)過程”。其研究過程基本包括通過動物口服給藥后取血制備含藥血清、通過色譜指紋圖譜的對比和解析來探究血中移行的活性成分(包括中藥及復(fù)方所含成分的原形、中藥及復(fù)方經(jīng)肝臟*聯(lián)系人:王莉梅,碩士研究生,主要研究方向:中藥血清化學(xué)及新藥質(zhì)量標準的研究,現(xiàn)就職于一汽總醫(yī)院,E-mail:wlmjlu@163.com;金向的各種酶及腸內(nèi)菌群作用而產(chǎn)生的多種具有活性的代謝產(chǎn)物及某些有效成分在經(jīng)過血液轉(zhuǎn)運過程中在機體某些部位所產(chǎn)生生理活性物質(zhì)等)、血中移行成分的分離和結(jié)構(gòu)鑒定、移行成分與傳統(tǒng)療效的藥效相關(guān)性研究等。此外,此方法對藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的體內(nèi)代謝過程和機制的探討、闡明中藥及復(fù)方的作用機理、生物轉(zhuǎn)化和代謝等過程,以及對藥理、毒理的進一步研究等都具有廣泛的意義[2~3]。對闡明中藥復(fù)方的配伍機制、促進中藥新藥的開發(fā)及中藥臨床應(yīng)用中給藥方案科學(xué)化的研究等方面能夠起到很大的輔助作用。在不斷的研究和探索中,我們認為,這一方法可以更加靈活的運用,它具有“量”和“質(zhì)”兩方面的應(yīng)用價值,可以被運用于輔助血清藥理學(xué)研究、藥劑學(xué)的劑型和輔料篩選、中藥炮制品的藥性和藥效優(yōu)選、中藥復(fù)方及院內(nèi)制劑的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究、復(fù)方加減方的配伍研究及臨床上的藥物熱、藥物基因組學(xué)及給藥方案個體化等研究?，F(xiàn)分別綜述如下。二、中醫(yī)生物多樣性法“體積”的應(yīng)用價值1.中藥的通收率及相關(guān)因素的研究是研究藥物推動藥劑學(xué)研究的起點隨著藥物制劑的研究和開發(fā),研究體內(nèi)過程的藥動學(xué)作為研究和評價藥物制劑的優(yōu)勢已日益凸顯,通過其對藥物自身的理化特性和臨床應(yīng)用價值及其在機體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄特征,及藥動學(xué)模型嵌合情況,加之相關(guān)的藥動學(xué)參數(shù)的分析研究,可以確定其開發(fā)為緩、控釋或靶向給藥系統(tǒng)的可能,然后綜合利用藥動學(xué)原理對劑型、劑量、釋藥模式、釋藥時間等因素加以綜合設(shè)計,并通過藥動學(xué)研究來評價和監(jiān)控該系統(tǒng)是否達到了緩釋、控釋或靶向給藥的預(yù)期效果,這一研究正在成為藥劑學(xué)領(lǐng)域研究的熱點。而中藥制劑多是以透皮給藥的膏藥以及口服的中成藥、丸劑、散劑等形式出現(xiàn)在人們的日常應(yīng)用中,因其成分復(fù)雜,給藥后其與機體的作用方式、起效快慢、半衰期等內(nèi)容,即藥代動力學(xué)過程無法得到深入透徹的研究,人們甚至無法在說明書上詳細認知該藥的具體成分,這是制約中成藥走向國際的限制性因素,而通過運用中藥血清化學(xué)的方法,對入血成分的分析和探究將有助于研究中成藥的體內(nèi)過程,并預(yù)期與西藥劑型的研究和開發(fā)路徑一致,探索出療效較好的中成藥的緩、控釋劑型,從而減少給藥次數(shù)和不良反應(yīng),提高患者的用藥依從性,并獲得對某些急慢性疾病的最佳的治療效果。同時通過體內(nèi)過程的認知和對入血成分的質(zhì)變和量變的把握,可以對藥物劑型研發(fā)過程中所用輔料的篩選起到輔助作用。雷濤等通過對中藥復(fù)方茵白湯入血成分的研究指明在某些成分藥理不明確、藥效難以確定的情況下,中藥復(fù)方制劑的劑型應(yīng)以保留研究較為深入的脂溶性成分的醇劑型為優(yōu)。2.對中藥藥物成分的檢測監(jiān)督目的是為中藥產(chǎn)品的加工技術(shù)提供了分中藥的炮制是基于中醫(yī)藥理論,結(jié)合臨床應(yīng)用和藥物自身的特點對原藥材加以加工處理,它制約著中藥的臨床療效和安全性。然而在不明確中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的前提下,將沒法全面的把握炮制產(chǎn)品的質(zhì)量和技術(shù)條件的控制、炮制品的藥效和安全性。相同的藥物在經(jīng)由不同的炮制工藝后,其有效成分和毒性成分的質(zhì)和量的變化,不能僅僅通過對動物或人的藥效學(xué)觀察來予以指征,藥物炮制后究竟變成了什么成分,其有效成分及毒性成分的含量變化等等都成為了制約療效和安全性的重要因素。而中藥血清化學(xué)的研究方法可以通過識別血中的藥效成分和毒性成分,并進行相應(yīng)的含量監(jiān)測來保證中藥炮制品的質(zhì)量,并對其炮制后的效果提供理論及技術(shù)上的支持。同時結(jié)合藥動學(xué)的方法對某些指標性的成分或血清中的抗體性成分、加以觀測和分析,并確定藥物有效成分的半衰期,進而研究其量效、時效及代謝過程,可以為中藥產(chǎn)品的炮制及生產(chǎn)提供了準確的技術(shù)參數(shù)。最終不僅達到我們優(yōu)選炮制方法、對炮制后的中藥的藥效成分進行篩選的目的,而且還可以使我們更有針對性地對把握炮制品的“質(zhì)”和“量”。此外,還可以基于中藥血清化學(xué)研究所確定的有效成分指導(dǎo)藥品生產(chǎn),這樣會使我們對藥物的療效和安全性有更加深刻、全面的認識和把握。王萍等研究了延胡索炮制品在大鼠血漿中的動態(tài)過程并探討了炮制對其吸收和代謝的影響,研究采用高效液相測定灌胃延胡索提取物后的大鼠血漿中的藥物濃度,并以大鼠血漿中延胡索乙素,原阿片堿和去氫紫堇堿為指標性成分,研究發(fā)現(xiàn)醋炙能加快延胡索乙素和去氫紫堇堿在體內(nèi)的吸收,同時延緩二者的消除,其中對延胡索乙素的作用更明顯,而對原阿片堿影響不大;酒炙對延胡索乙素的作用與醋炙相似,但作用較醋炙弱,同時對原阿片堿和去氫紫堇堿均有延緩消除的作用。3.中藥的輔助調(diào)節(jié)作用藥物熱是因使用藥物直接或間接引起的發(fā)熱,可高熱或低熱,它是由于藥物改變了體溫調(diào)節(jié)機制,或由于抗菌藥物使用過后病原體內(nèi)毒素的釋放,以及與免疫應(yīng)答和過敏反應(yīng)、病人的遺傳史和藥物的不恰當使用等因素造成的。部分研究表明,中藥可以治療臨床引發(fā)的部分藥物熱,提示中藥可以作為藥物熱激素效果差的患者的補充治療,藥物熱有多種免疫機制參與發(fā)病,中藥可能對藥物誘導(dǎo)發(fā)熱的多個環(huán)節(jié)有調(diào)節(jié)作用。近年來的部分研究所提到的皂樹中的皂樹皂苷、甘草中的甘草酸、人參中的人參皂苷、姜黃中的姜黃素等均表明某些中草藥的活性成分可以通過提高吸收性上皮細胞膜的通透性、抑制外排蛋白和代謝酶,增加西藥的體內(nèi)吸收和血藥濃度。在臨床治療中,如果對中藥口服后的血清中的相應(yīng)成分予以分析,并結(jié)合中西藥合用后,入血成分的變化情況并加以對比研究,可以得出其抑制發(fā)熱和調(diào)節(jié)西藥不良反應(yīng)的機理性結(jié)果,從而對探究中藥的輔助調(diào)節(jié)作用意義重大。同時病人服用多種藥物時,也不可避免的存在相互作用,因此,在分析成本較低的前提下,結(jié)合入血成分的分析來優(yōu)選服藥先后順序、服藥劑量,以及針對血藥濃度和藥效相一致的藥物制定個體化給藥方案等方面都具有實用價值。三、中醫(yī)生物法在“物質(zhì)”中的應(yīng)用價值1.對含藥血清中指標性成分的作用由于含藥血清中的化學(xué)成分與含藥血清的藥理效應(yīng)密切相關(guān),因此,中藥血清化學(xué)與中藥血清藥理學(xué)協(xié)同研究,有利于進一步研究中藥復(fù)方的效應(yīng)成分。通過相關(guān)系數(shù)的統(tǒng)計學(xué)檢驗并且通過多元線性回歸,將指標性成分同時作為自變量被引入,得到最優(yōu)方程,從而確定中藥或復(fù)方的含藥血清中指標性成分與其體內(nèi)外藥理作用的效應(yīng)相關(guān)性,以探索藥理效應(yīng)的作用基礎(chǔ)。劉明妍的研究表明,心舒口服液所含有的成分阿魏酸、川芎嗪是入血的有效成分。并且兩種成分聯(lián)合作用作為心舒口服液含藥血清中的效應(yīng)成分產(chǎn)生抑制血管平滑肌細胞增殖的作用和產(chǎn)生抑制AA誘導(dǎo)的血小板聚集的效應(yīng),且阿魏酸的貢獻高于川芎嗪。此外,神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物研究涉及到許多的體外模型,運用這些模型有助于快速、高效地篩選出治療疾病的藥物。合理使用中藥血清藥理學(xué)方法并結(jié)合中藥血清化學(xué)的研究方法,同時依據(jù)疾病的體外模型,可以幫助我們對中藥復(fù)方進行分析,從而較好地反映中藥藥效。2.對中藥關(guān)鍵成分的檢測中藥復(fù)方及院內(nèi)制劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究是目前亟待解決的中藥領(lǐng)域的熱點問題之一,它是指某一特定復(fù)方經(jīng)與人體作用后在發(fā)揮療效到特異性的靶器官、靶組織中達到一定濃度并發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)及藥理學(xué)治療作用的直接或間接來源于該復(fù)方的非內(nèi)源性活性物質(zhì)的總和(毒性成分除外)。王本祥等認為復(fù)方中的各成分對主要成分會有協(xié)同、相加和拮抗等影響,最后產(chǎn)生的綜合效應(yīng)即是復(fù)方藥理作用的體現(xiàn)。馬春濤等認為中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是服用復(fù)方后在體內(nèi)(血、尿、膽汁、腸道內(nèi)容物等)檢測到的,對某一病癥有效的成分。藥理學(xué)的觀點認為,藥物如果起效,必須要達到一定的濃度,由于中藥復(fù)方作用的靶器官、靶組織的多樣性以及在人體中難于直接測定其濃度,血漿中的藥物濃度在一定程度上可以體現(xiàn)其濃度。則入血的相應(yīng)成分也必然是其發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。只有全面、透徹地把握住入血成分的基本組成,才能進一步試圖從分子、細胞、組織器官以及動物整體上多方位、多靶點、多層次的對復(fù)方或中藥的院內(nèi)制劑進行藥效學(xué)和安全性的評價。對于此領(lǐng)域的研究許多學(xué)者紛紛采用或借鑒了中藥血清化學(xué)的研究思路,黃熙等提出了“方劑血清成分譜”與“靶成分”學(xué)說。方劑血清成分譜是指方劑進入血清內(nèi)的成分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、數(shù)目、分布及其動態(tài),靶成分是指血清中與母方效應(yīng)相關(guān)的成分,相對于某一個藥效或證效指標來講,靶成分可以是一個或多個。該理論與中醫(yī)藥理論中的君臣佐使、歸經(jīng)、性味等理論有著密切的關(guān)系。邱峰等提出了中藥體內(nèi)直接物質(zhì)基礎(chǔ)研究的新思路,通過對含藥血漿和組織器官進行分析,并借助中藥化學(xué)和藥代動力學(xué)知識,對體內(nèi)成分的代謝產(chǎn)物(包括經(jīng)膽汁、尿液等排泄途徑)進行積量、分離和分析,確定進入體內(nèi)的化學(xué)成分。在此基礎(chǔ)上,通過有效成分的藥效學(xué)實驗最終確定體內(nèi)直接作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。如王喜軍等的研究結(jié)果顯示,口服六味地黃丸后,血中出現(xiàn)了11個移行成分,其中7個為六味地黃丸的原型成分,另外,4個為新產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。該方進一步的研究對上述11種進行了分離和結(jié)構(gòu)鑒定,共分離得到熟地、山茱萸和澤瀉中的代謝成分5-羥甲基-2-糠酸;山茱萸直接入血成分莫諾苷、獐牙菜苷、馬錢子苷;丹皮酚的代謝產(chǎn)物2-羥基-苯乙酮-4-葡萄糖醛酸苷、4-甲氧基-5-磺酸基苯乙酮-2-葡萄糖醛酸苷、2,4-二羥基-苯乙酮、2,5-二羥基-4-甲氧基苯乙酮等共8個化合物,它們是六味地黃丸的體內(nèi)直接作用物質(zhì)[20~21]。3.中藥的藥效學(xué)問題中藥理論的核心是研究中藥的性味、歸經(jīng)、功能、君臣佐使等內(nèi)容。其中的配伍研究是根據(jù)病情需要和藥物特點,有選擇地將兩味藥以上的藥物配合使用,其配伍關(guān)系中的相須、相使可增其強療效;相惡的藥物會因為拮抗作用而抵消或削弱原有功效;相畏和相殺是通過相互作用減輕或消除藥物原有的毒性或副作用,是毒性藥物應(yīng)用時需考慮的。在中醫(yī)臨床上,由于中醫(yī)的辨證施治的思想沒有詳細指示出病因病理的物質(zhì)基礎(chǔ),因此中藥的研究理論也就無法真實地指示其發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)何在。因此我們看到,如果就現(xiàn)代科學(xué)的標準而言,臨床應(yīng)用的中醫(yī)方藥及其加減方和藥味的配伍提供的僅僅是依靠經(jīng)驗運用得出的藥效學(xué)結(jié)論,而沒有深入到藥理學(xué)和藥物化學(xué)的層面進行探索。為了明確并不斷提高方藥的療效,改變這種方藥的應(yīng)用狀態(tài),我們必須對其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進行深入的探究,即通過對其成分的分離鑒定和體內(nèi)代謝的動態(tài)過程研究,以及進一步的藥理藥效學(xué)分析來探明和闡釋其作用機制。而中藥血清化學(xué)的研究方法可以很好把上述各研究步驟加以融合,同時可以通過其在體內(nèi)的代謝和變化過程發(fā)現(xiàn)前體藥物及經(jīng)由腸道菌群、酶類等作用后的新生代謝產(chǎn)物[22~23],若進一步對血清中的相應(yīng)成分進行結(jié)構(gòu)鑒定,并推測其藥效發(fā)揮的作用機理則結(jié)果必然是積極的,其對中醫(yī)方藥理論的現(xiàn)代化,對更全面地對方藥藥效實質(zhì)進行剖析意義都是深遠的。4.藥物基因組學(xué)分析個體對藥物反應(yīng)在分子水平存在差異是藥物基因組學(xué)研究產(chǎn)生的背景,它不是以發(fā)現(xiàn)人體基因組為主要目的,而是借助基因組學(xué)的研究結(jié)果分析和改善病人治療的用藥方案,它在探討有關(guān)基因?qū)λ幬镒饔帽旧懋a(chǎn)生的影響及與基因變異的關(guān)系,以及這些變異對不同個體產(chǎn)生不同藥效的關(guān)系。藥物基因組學(xué)主要研究不同個體的藥物反應(yīng)差異與DNA多態(tài)性的關(guān)系,即通過DNA序列差異的分析,從基因組水平上深入探討藥物作用的個體差異性機制,并以此為平臺,開展尋找新的藥物靶點和先導(dǎo)化合物的研究。藥物基因組學(xué)對合理用藥意義重大,它選擇性地探討與個體藥物反應(yīng),包括藥物吸收、分布、代謝和排泄有關(guān)聯(lián)的基因及多態(tài)性變異,基因在不同健康與疾病狀態(tài)下的表達與調(diào)節(jié),基因變異和不同基因表達與疾病的關(guān)系等。我們試想,若研究同時輔之以中藥血清化學(xué)并結(jié)合藥動學(xué)的研究,與不同狀態(tài)下的動物對藥物的吸收、分布、代謝和排泄進行對比,