實(shí)驗(yàn)一：酶的性質(zhì)：影響酶活性的因素(淀粉酶為例)

XIAMENUNIVERSITY

醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課

總學(xué)時(shí)/學(xué)分：96/3

課程類型：學(xué)科通修

授課對象（人數(shù)）：14級臨床（157人）醫(yī)學(xué)院◆本學(xué)期的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及進(jìn)度安排：◆本實(shí)驗(yàn)課的幾點(diǎn)說明：1、關(guān)于考試成績：平時(shí)70%+理論筆試20%+操作考試10%其中：平時(shí)每一次實(shí)驗(yàn)課：考勤10%+操作50%+實(shí)驗(yàn)報(bào)告40%（共12-1次課，最后取平均成績作為最終的平時(shí)成績）2、關(guān)于紀(jì)律問題：

◆考勤：遲到早退（30min內(nèi)）1次，當(dāng)次課扣10分，三次該科成績?yōu)??！羯险n穿實(shí)驗(yàn)服，不穿者扣當(dāng)次課10分，違犯三次該科成績?yōu)?。◆上課期間不做與本學(xué)科無關(guān)的活動(dòng)，如手機(jī)靜音、不玩手機(jī)等，違犯一次扣當(dāng)次課10分，違犯三次該科成績?yōu)??！舨辉趯?shí)驗(yàn)室吃、喝任何食品、飲料。違犯一次扣當(dāng)次課10分，違犯三次該科成績?yōu)??！糁等丈瓿尚l(wèi)生清掃后須經(jīng)實(shí)驗(yàn)課老師確認(rèn)后方能離開?！魫圩o(hù)實(shí)驗(yàn)物品，損壞應(yīng)向?qū)嶒?yàn)老師報(bào)告登記后，方能領(lǐng)取新的。3、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：（1）遵守課堂紀(jì)律，認(rèn)真做實(shí)驗(yàn)；按時(shí)、認(rèn)真提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告（每周三或四由班長或?qū)W習(xí)委員收齊后統(tǒng)一交給助教批閱）（2）保持實(shí)驗(yàn)臺(tái)面整潔；（3）藥品使用；（4）儀器使用；（5）安全問題。水、電使用，輪流值日等（6）實(shí)驗(yàn)記錄及實(shí)驗(yàn)報(bào)告預(yù)習(xí)、保存原始實(shí)驗(yàn)記錄、定量實(shí)驗(yàn)中讀數(shù)要準(zhǔn)確（有效數(shù)字）等。實(shí)驗(yàn)報(bào)告書寫格式（要求手寫，不接受打印稿）：實(shí)驗(yàn)（編號）（實(shí)驗(yàn)名稱）（一）目的和要求（二）原理（三）試劑和儀器（四）操作方法（五）結(jié)果與討論4、清點(diǎn)、清洗器具：對應(yīng)器具清單補(bǔ)充齊全。玻璃器皿清洗：洗衣粉洗劑、自來水沖洗10次以上，后蒸餾水沖洗3次，管壁水均勻分布一薄層為干凈。實(shí)驗(yàn)一：酶的性質(zhì)：影響酶活性的因素（淀粉酶為例）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察淀粉在水解過程中遇碘后溶液顏色的變化。觀察不同底物、溫度、pH、激活劑與抑制劑對唾液淀粉酶活性的影響。二、原理影響酶活性的因素包括：底物類型、酶濃度、底物濃度、產(chǎn)物濃度、抑制劑、激活劑、pH值、溫度等淀粉在淀粉酶的作用下被降解成單糖，這種降解過程是逐步進(jìn)行的，降解的中間產(chǎn)物遇碘曾現(xiàn)不同的顏色：

淀粉→紅色糊精→無色糊精→麥芽糖→葡萄糖（紫藍(lán)色）（紅色）（無色）

所以根據(jù)水解液和碘反應(yīng)的顏色，可以判斷水解是否已完全。三、試劑和器材

1.試劑

新鮮唾液稀釋液、1%蔗糖溶液、Benedict試劑、0.5%淀粉、含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液、5％氯化鈉溶液、0.1％硫酸銅溶液、0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、檸檬酸鈉溶液、KI-I2溶液

2.器材

恒溫水浴鍋、冰箱、電磁爐四、操作方法準(zhǔn)備工作：1.唾液淀粉酶液的準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)者先用蒸餾水嗽口，然后含一口蒸餾水于口中，輕嗽一、二分鐘，吐入小燒杯中。將其稀釋5-20倍。2.淀粉酶活性的檢測：取一支試管，注入0.5%淀粉溶液3mL與稀釋的唾液1mL?；靹蚝蟛迦?支玻棒，將試管連同玻棒置于37℃水浴中。不時(shí)地用玻棒從試管中取出1滴溶液，滴加在白磁板上，隨即加1滴碘液，觀察溶液呈現(xiàn)的顏色。

此實(shí)驗(yàn)延續(xù)至溶液僅表現(xiàn)碘被稀釋后的微黃色為止。記錄淀粉在水解過程中，遇碘后溶液顏色的變化及反應(yīng)時(shí)間。

根據(jù)反應(yīng)時(shí)間調(diào)整酶的稀釋倍數(shù)。實(shí)驗(yàn)一－1酶的特異性一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解酶的特異性并掌握檢查酶的特異性的方法和原理。二、原理酶的特異性是指一種酶只能對一種或一類化合物（此類化合物通常具有相同的化學(xué)鍵）起作用，而不能對別的化合物起作用。如淀粉酶只能催化淀粉水解，對蔗糖的水解無催化作用。

本實(shí)驗(yàn)以唾液淀粉酶（含淀粉酶和少量麥芽糖酶）對淀粉的作用為例，說明酶的特異性。淀粉和蔗糖都沒有還原性，但淀粉水解產(chǎn)物為葡萄糖，蔗糖水解產(chǎn)物為果糖和葡萄糖，均為還原性糖，能與Benedict試劑反應(yīng)，生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。三、試劑和器材

1.試劑

新鮮唾液稀釋液、1%蔗糖溶液、Benedict試劑、0.5%淀粉、含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液

2.器材恒溫水浴鍋四、操作方法

1.檢查試劑取2只試管，按下表操作。

試管編號試劑處理120.3％NaCl的0.5%淀粉溶液/mL3－1%蔗糖溶液/mL—3Benedict試劑/mL22

沸水浴煮沸2～3min記錄觀察結(jié)果1.檢查試劑

取2只試管，按下表操作。淀粉酶的專一性實(shí)驗(yàn)取2只試管，按下表操作。

試管編號試劑處理12稀釋的唾液/mL110.3％NaCl的0.5%淀粉溶液/mL3－2%蔗糖溶液/mL—3搖勻，置37℃水浴保溫10minBenedict試劑/mL22

沸水浴煮沸2～3min記錄觀察結(jié)果五、注意事項(xiàng)

唾液的稀釋倍數(shù)因人而異，有時(shí)差別很大，稀釋倍數(shù)可以是5～100倍。六、思考題

1、為什么要做試劑檢查實(shí)驗(yàn)？省略該步驟可能有怎樣的結(jié)果？

2、酶作用的專一性有哪幾種？

實(shí)驗(yàn)一-2溫度對淀粉酶活性的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解溫度對酶活性的影響并了解最適溫度的定義。二、原理對溫度敏感是酶的一個(gè)重要特性，酶作為生物催化劑，和一般催化劑一樣呈現(xiàn)出溫度效應(yīng)，提高溫度可以提高酶促反應(yīng)速度，但另一方面又會(huì)加速酶蛋白的變性速度，所以在較低的溫度范圍內(nèi)，酶反應(yīng)速度隨溫度升高而增大，但是超過一定溫度后，反應(yīng)速度反而下降。酶反應(yīng)速度達(dá)到最大時(shí)的溫度稱為酶的最適溫度。酶的最適溫度不是一個(gè)常數(shù)，它與作用時(shí)間的長短有關(guān)系。三、試劑和器材

1.試劑

0.3％氯化鈉的0.5％淀粉溶液、新鮮唾液、KI-I2溶液

2.器材恒溫水浴鍋四、操作步驟

取3支試管，各加2mL0.3％氯化鈉的0.5％淀粉溶液；另取3支試管，各加1mL淀粉酶液。將此6支試管分為三組，每組中盛淀粉溶液與淀粉酶液的試管各1支，三組試管分別置入4℃（建議放在冰水里）、37℃與100℃的水浴中。5分鐘后，將各組中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，繼續(xù)維持原溫度條件5min后，立即滴加2滴碘液，觀察溶液顏色的變化。根據(jù)觀察結(jié)果說明溫度對酶活性的影響。五、思考題

1、高溫導(dǎo)致酶活性喪失的分子機(jī)理是什么？如何在酶的分離純化中克服這種影響？

2、還有哪些因素可以導(dǎo)致酶活性的降低？實(shí)驗(yàn)一-3pH對淀粉酶活性的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解pH對酶活性的影響及最適pH的定義。二、原理酶的催化活性與環(huán)境pH有密切關(guān)系，通常各種酶只在一定pH范圍內(nèi)才具有活性，酶活性最高時(shí)的pH，稱為酶的最適pH，高于或低于此pH時(shí)酶的活性都逐漸降低。不同酶的最適pH不同。酶的最適pH不是一個(gè)特征性的物理常數(shù)，對于一個(gè)酶，其最適pH因緩沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。三、試劑和器材

1.試劑

0.3％氯化鈉的0.5％淀粉溶液、新鮮唾液、0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、檸檬酸鈉溶液、碘化鉀－碘溶液

2.器材恒溫水浴鍋四、操作步驟

1.取3個(gè)錐形瓶，按下表的比例吸取磷酸氫二鈉溶液和檸檬酸鈉溶液，制備pH為5.0、6.8、8.0的三種緩沖溶液。錐形瓶號0.2mol/L磷酸氫二鈉（mL）0.1mol/L檸檬酸緩沖液pH1235.157.729.724.852.280.285.06.88.02.另取3只干凈試管，按下表操作。1.取3個(gè)錐形瓶，按下表的比例吸取磷酸氫二鈉溶液和檸檬酸鈉溶液，制備pH為5.0、6.8、8.0的三種緩沖溶液。

試管編號試劑處理123pH5.0緩沖溶液/mL2-