北京化工大學(xué)儀器分析第三章-液相色譜實(shí)例分析課件

液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題及故障排除經(jīng)驗(yàn)北京化工大學(xué)儀器分析第三章-液相色譜實(shí)例分析課件1液相系統(tǒng)維護(hù)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過(guò)濾器手動(dòng)進(jìn)樣器檢測(cè)器色譜柱液相系統(tǒng)維護(hù)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過(guò)濾器手動(dòng)進(jìn)樣器2等度系統(tǒng)儲(chǔ)液瓶脫氣機(jī)泵單元手動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱檢測(cè)器廢液瓶1234567等度系統(tǒng)儲(chǔ)液瓶脫氣機(jī)泵單元手動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱檢測(cè)器廢液瓶13儲(chǔ)液瓶脫氣機(jī)泵單元自動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱檢測(cè)器廢液瓶低壓梯度單元混合器低壓梯度系統(tǒng)123456789儲(chǔ)液瓶脫氣機(jī)泵單元自動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱檢測(cè)器廢液瓶低壓梯度單元混4儲(chǔ)液瓶脫氣機(jī)泵單元自動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱檢測(cè)器廢液瓶混合器高壓梯度系統(tǒng)12345678儲(chǔ)液瓶脫氣機(jī)泵單元自動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱檢測(cè)器廢液瓶混合器高壓梯度5液相色譜故障排除經(jīng)驗(yàn)故障的確定—至少要重復(fù)出現(xiàn)兩次以上初步判斷故障引起的原因—方法或硬件由經(jīng)驗(yàn)或平時(shí)的積累確定故障原因—平時(shí)做好觀察和記錄當(dāng)不能確認(rèn)故障原因時(shí)—采用排除法逐一考察可能引起故障的因素確定故障能否自行處理—不要貿(mào)然拆卸不熟悉的部件液相色譜故障排除經(jīng)驗(yàn)故障的確定6常見(jiàn)故障因素儀器環(huán)境：—實(shí)驗(yàn)室的溫度、濕度、酸度等

—實(shí)驗(yàn)室震動(dòng)、灰塵等問(wèn)題

—電源及地線問(wèn)題使用條件：—流動(dòng)相（pH值、均勻度、氣泡等）—樣品（樣品分解、氧化、樣品溶劑等）—色譜柱（污染、堵塞、塌陷等）硬件問(wèn)題：—輸液泵—進(jìn)樣器—檢測(cè)器常見(jiàn)故障因素儀器環(huán)境：7平常保養(yǎng)-做好平常的保養(yǎng)可以有效的降低故障的發(fā)生率-做好平常的保養(yǎng)可以延長(zhǎng)儀器的使用壽命常做的保養(yǎng)—保證儀器的使用環(huán)境（經(jīng)常清潔儀器，尤其是灰塵）—泵的保養(yǎng)（使用緩沖鹽時(shí)要清洗柱塞，水和鹽不要長(zhǎng)期保存在泵里）—進(jìn)樣器要經(jīng)常清洗，避免污染物吸附或堵塞管路—盡量進(jìn)行樣品前處理—色譜柱要定期清洗，保證柱效及使用壽命—系統(tǒng)中不要長(zhǎng)期保存水和鹽，長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)應(yīng)將儀器所有部分全部更換為70％以上的甲醇，避免細(xì)菌的滋生及鹽的析出。平常保養(yǎng)-做好平常的保養(yǎng)可以有效的降低故障的發(fā)生率8液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題

壓力異常（偏高、波動(dòng)）

漏液保留時(shí)間漂移

基線問(wèn)題（漂移、噪聲）

峰形異常液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題壓力異常（偏高、波動(dòng)）9壓力壓力是液相色譜中最重要的指標(biāo)，要經(jīng)常關(guān)注壓力的變化。保留時(shí)間的變化經(jīng)常是由于壓力問(wèn)題引起的。不同溶劑即使在相同流速和溫度的情況下壓力也是不同的。記下儀器正常狀態(tài)時(shí)，在固定條件下（流動(dòng)相、流速、溫度等）的壓力顯示值。壓力壓力是液相色譜中最重要的指標(biāo)，要經(jīng)常關(guān)注10壓力過(guò)高時(shí)首先要確認(rèn)是色譜柱堵塞還是系統(tǒng)堵塞色譜柱堵時(shí)，確認(rèn)可能造成堵塞的樣品的性質(zhì)，相應(yīng)選擇合適的清洗溶劑。系統(tǒng)堵塞，首先應(yīng)確認(rèn)是哪一部份堵塞，依據(jù)情況由后向前進(jìn)行排除。壓力過(guò)高時(shí)首先要確認(rèn)是色譜柱堵塞還是系統(tǒng)堵塞11容易發(fā)生堵塞的部件

保護(hù)柱及色譜柱線路過(guò)濾器混合器過(guò)濾組件管路連接處進(jìn)樣器檢測(cè)器流通池容易發(fā)生堵塞的部件保護(hù)柱及色譜柱12壓力過(guò)低如果壓力為零：泵頭中沒(méi)有液體，充滿氣泡單向閥完全堵死泵的柱塞桿折斷壓力傳感器損壞(流動(dòng)相流動(dòng)正常，但無(wú)壓力)如果有壓力但是壓力比正常時(shí)低：漏液

單向閥堵塞壓力過(guò)低如果壓力為零：13壓力波動(dòng)壓力在短時(shí)間內(nèi)劇烈波動(dòng)。泵頭中有氣泡單向閥臟柱塞密封圈漏液壓力波動(dòng)壓力在短時(shí)間內(nèi)劇烈波動(dòng)。泵頭中有氣泡14經(jīng)常漏液的部件泵：柱塞密封圈,排液閥手動(dòng)進(jìn)樣器：轉(zhuǎn)子密封圈磨損檢測(cè)器：流通池窗口（墊片損壞、透鏡破碎）接頭處漏液：（接頭松動(dòng)，接頭臟，接頭磨損，部件不匹配）經(jīng)常漏液的部件泵：柱塞密封圈,排液閥15保留時(shí)間不穩(wěn)定吸濾頭臟泵輸液不正常（壓力波動(dòng)、氣泡等）流動(dòng)相組分變化流動(dòng)相緩沖能力不夠色譜柱平衡時(shí)間不夠柱溫的變化柱子問(wèn)題保留時(shí)間不穩(wěn)定吸濾頭臟16噪音大流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成漏液流動(dòng)相、泵、檢測(cè)器流通池內(nèi)有氣泡流動(dòng)相各溶劑不相溶或混和不均勻檢測(cè)池能量不足流通池被污染溫度影響（檢測(cè)器和柱溫差別太大）其他電子設(shè)備的影響或電源、地線等噪音大流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成17基線漂移流動(dòng)相污染，變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成流動(dòng)相不均勻(脫氣，使用純度更高的溶劑)溫度波動(dòng)系統(tǒng)平衡時(shí)間不夠流通池被污染或有氣泡流通池窗口破裂基線漂移流動(dòng)相污染，變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成18峰形問(wèn)題死體積太大柱子被污染或堵塞色譜柱塌陷流動(dòng)相緩沖不足或不合適樣品溶劑選擇不當(dāng)，與流動(dòng)相之間極性差異太大樣品過(guò)載（濃度或體積）柱溫過(guò)低峰形問(wèn)題死體積太大19鬼峰流動(dòng)相被污染進(jìn)樣閥殘余峰樣品中未知物色譜柱中的污染物鬼峰流動(dòng)相被污染20管線選擇材料

不銹鋼Teflon(聚四氟乙烯)PEEK(聚醚醚酮)尺寸

0.1mmI.D.x1.6mmO.D.

0.3mmI.D.x1.6mmO.D.

0.5mmI.D.x1.6mmO.D.

0.8mmI.D.x1.6mmO.D.管線選擇材料21管線材料不銹鋼(可用于所有連接)能承受幾千kgf/cm2

壓力酸性或高濃度鹽環(huán)境中易腐蝕(尤其在pH小于2時(shí))PEEK(可用于所有連接)能承受高達(dá)250kgf/cm2壓力可在整個(gè)PH范圍(pH1-14)內(nèi)使用

不適用于高溶解性溶劑如氯仿等Teflon(用于柱后阻尼管、反應(yīng)管和排液管)化學(xué)惰性大能承受5kgf/cm2

壓力管線材料不銹鋼(可用于所有連接)22接頭不銹鋼接頭/墊圈

主要用于輸液泵、進(jìn)樣器的連接能承受400kgf/cm2壓力一旦固定，墊圈不可再動(dòng)PEEK接頭

主要用于色譜柱、檢測(cè)器的連接易于安裝能承受250kgf/cm2壓力容易產(chǎn)生死體積不銹鋼接頭墊圈PEEK接頭接頭不銹鋼接頭/墊圈不銹鋼接頭墊圈PEEK接頭23死體積死體積可能會(huì)引起分離度變差和重現(xiàn)性變差等問(wèn)題.管線公螺母死體積好的連接差的連接死體積死體積可能會(huì)引起分離度變差和重現(xiàn)性變差等問(wèn)題.管線公螺24選擇原則采用“HPLC”級(jí)溶劑避免使用會(huì)引起柱效損失或保留特性變化的溶劑對(duì)試樣有適宜的溶解度溶劑粘度要小與檢測(cè)器相匹配流動(dòng)相選擇原則流動(dòng)相25水/甲醇梯度ODS柱鬼峰鬼峰的出現(xiàn)流動(dòng)相水/甲醇梯度鬼峰鬼峰的出現(xiàn)流動(dòng)相26水的等級(jí)純化水蒸餾水去離子水波長(zhǎng)(nm)純化水去離子水因?yàn)椴患兾锏拇嬖冢ルx子的吸光率較高純化水中去除了無(wú)機(jī)和有機(jī)的污染物吸光率流動(dòng)相水的等級(jí)波長(zhǎng)(nm)純化水去離子水因?yàn)椴患兾锏拇嬖冢ルx子27流動(dòng)相的更換不互溶的流動(dòng)相不能直接更換緩沖鹽不能直接用有機(jī)溶劑更換水正己烷異丙醇緩沖鹽有機(jī)溶劑水流動(dòng)相的更換不互溶的流動(dòng)相不能直接更換緩沖鹽不能直接用有機(jī)溶28過(guò)濾：0.45um或更小孔徑濾膜目的：除去溶劑中的微小顆粒，避免堵塞色譜柱，尤其是使用無(wú)機(jī)鹽配制的緩沖液時(shí)。溶劑前處理過(guò)濾：0.45um或更小孔徑濾膜溶劑前處理29吸濾頭吸濾頭30吸濾頭材料：不銹鋼(或陶瓷)燒結(jié)，孔徑10um故障：堵塞表現(xiàn)：管路中不斷有氣泡生成措施：用異丙醇（或5％稀硝酸），超聲波清洗，再用蒸餾水清洗吸濾頭材料：不銹鋼(或陶瓷)燒結(jié)，孔徑10um31LC20AT主入口閥部件號(hào):228-45704-92LC20AD入口閥LC20AT副入口閥部件號(hào):

228-45704-91LC20AD出口閥部件號(hào):

228-45705-91單向閥LC10ADvp出口閥LC10ATvp出口閥部件號(hào):

228-34976-91LC10ADvp入口閥部件號(hào):

228-39093-92LC10ATvp入口閥部件號(hào):

228-32166-91LC20AT主入口閥LC20AD入口閥LC20AD出口閥單向32進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器手動(dòng)進(jìn)樣器(7725/7725i）原理：（六通閥）注入方式：

1）全量注入

2）部分注入7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥33色譜柱的日常保養(yǎng)購(gòu)買新柱后一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，確認(rèn)柱的使用條件以及清洗再生步驟，按照說(shuō)明書條件測(cè)試色譜柱柱效，記錄使用壓力定期檢測(cè)柱壓和柱效不同流動(dòng)相之間轉(zhuǎn)換時(shí)應(yīng)注意溶劑的互溶性確認(rèn)樣品不會(huì)在流動(dòng)相中析出或帶有固體不溶物，請(qǐng)使用0.45um或0.2um的一次性濾膜過(guò)濾樣品，或者進(jìn)行前處理。為了延長(zhǎng)色譜柱使用壽命，請(qǐng)使用保護(hù)柱。定期用合適的溶劑清洗或再生色譜柱長(zhǎng)期不用時(shí)，清洗干凈后，使用柱子說(shuō)明書中指明的溶劑保存。柱子要從儀器上卸下并用堵頭密封后保存。定期用合適的流動(dòng)相清洗保存的柱子，避免干涸。色譜柱的日常保養(yǎng)購(gòu)買新柱后一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，確認(rèn)柱的使用34峰產(chǎn)生有肩或分叉的原因1.

柱子劣化（進(jìn)口處產(chǎn)生不均勻的空隙）溶劑效應(yīng)3.樣品劣化（生成氧化物、分解物等）判斷標(biāo)準(zhǔn)

所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時(shí)則為柱子劣化峰產(chǎn)生有肩或分叉的原因1.柱子劣化判斷標(biāo)準(zhǔn)35峰的變形根部變寬有肩或分叉峰的變形根部變寬有肩或分叉36溶解樣品的溶劑選擇不當(dāng)最好不要選擇高溶解性的試劑作為溶解樣品的溶劑甲醇作為溶劑20uLCaffeine乙醇作為溶劑20uLCaffeine乙醇作為溶劑10uLCaffeine最好注入少量樣品溶解樣品的溶劑選擇不當(dāng)最好不要選擇高溶解性的試劑作為溶解樣品37溶解性效應(yīng)低溶解性溶劑高溶解性溶劑溶解性效應(yīng)低溶解性溶劑高溶解性溶劑38檢測(cè)器基線異?；€噪音異常大氣泡未脫出檢測(cè)器污染燈老化出現(xiàn)漂移或不規(guī)則波動(dòng)系統(tǒng)污染，如色譜柱、管路、檢測(cè)器和流動(dòng)相等等產(chǎn)生規(guī)則波動(dòng)室溫變化，如空氣調(diào)節(jié)器直吹檢測(cè)器泵的脈動(dòng)檢測(cè)器基線異常