基因的體外轉錄和翻譯課件

1712019年11月12日星期1711什么是基因的體外轉錄和翻譯基因的體外轉錄和翻譯是20世紀70年代發(fā)展起來的一項分子生物學和細胞生物學實驗技術,是研究離體條件下(非細胞體系)基因表達情況的理想體系2019年11月12日星期什么是基因的體外轉錄和翻譯2基因表達包括:轉錄和翻譯兩個過程基因表達的調控包括:染色體結構的調節(jié)、DNA結構的調節(jié)、轉錄過程的調控、轉錄后的調控、翻譯過程的調控及翻譯后的調控。2019年11月12日星期基因表達包括:轉錄和翻譯兩個過3基因體外轉錄和翻譯的作用:為研究基因轉錄和蛋白質翻譯提供了個十分理想實驗體系和技術平臺及找到了—個研究與探討轉錄和翻譯這兩個復雜的現象的重要手段和方2019年11月12日星期基因體外轉錄和翻譯的作用:為研4第一節(jié)基因的體外轉錄基因體外轉錄的目的和意義基因的體外轉錄體系最早由Pelham和Jakson于1976年創(chuàng)立的,經很多實驗室的不斷修訂和改進,現已成為一項成熟的分子生物學和細胞生物學技術,已被多家試劑公司提供標準的實驗程序。2019年11月12日星期第一節(jié)基因的體外轉錄5基因體外轉錄體糸在分子生物學和細胞生物學研究中的用途和意義:1、快速檢測目的基因的轉錄情況;2、分析轉錄因子調節(jié)基因轉錄的過程;3、分析啟動子序列的活性;4、分析轉錄因子、DNA結合蛋白和RNA剪切因子的組成和作用5、染色質結構調整與基因轉錄的關系6、制備RNA探钅2019年11月12日星期基因體外轉錄體糸在分子生物學和6基因體外轉錄的基本原理基本原理:以DNA為模板,在無細胞體系中一系列轉錄因子的作用下經RNA聚合酶合成RNA的過程。質粒DNA模)線性DNA板核小體形式存在的DNA2019年11月12日星期基因體外轉錄的基本原理7能用于體外轉錄的質粒載體轉錄的必要條件:無論是真核細胞的轉錄體系還是原核細胞的轉錄體系,基因轉錄時都必須有啟動子序列,且該序列能被轉錄體系識別。原核細胞體外轉錄體糸常用的啟動子有T3、T7及SP6啟動子。真核細胞體外轉錄體糸除需啟動子增強子等順式作用元件外,還需各種反式作用元件的參與2019年11月12日星期能用于體外轉錄的質粒載體8基因體外轉錄體系DNA模板:含有轉錄啟動子及必要的調控序列(起始和終止序列等)的DNA及為研究基因轉錄調控的需要在體外組裝成的核小體鏈(注意避免RNase的污染)。2019年11月12日星期基因體外轉錄體系9細胞核抽提物的制備:細胞核抽提物:DNA轉錄由RNA聚合酶各種轉錄因子及必要的環(huán)境條件等,這切必需由細胞提供。常用于制備細胞核抽提物的細胞有酵母細胞、兔網織紅細胞和Hela細胞1、一般方法優(yōu)點:細胞核完整、內含物豐富缺點:在分離的細胞核中可能存在少量細胞質成分2019年11月12日星期細胞核抽提物的制備:10基因的體外轉錄和翻譯課件11基因的體外轉錄和翻譯課件12基因的體外轉錄和翻譯課件13基因的體外轉錄和翻譯課件14基因的體外轉錄和翻譯課件15基因的體外轉錄和翻譯課件16基因的體外轉錄和翻譯課件17基因的體外轉錄和翻譯課件18基因的體外轉錄和翻譯課件19基因的體外轉錄和翻譯課件20基因的體外轉錄和翻譯課件21基因的體外轉錄和翻譯課件22基因的體外轉錄和翻譯課件23基因的體外轉錄和翻譯課件24基因的體外轉錄和翻譯課件25基因的體外轉錄和翻譯課件26基因的體外轉錄和翻譯課件27基因的體外轉錄和翻譯課件28基因的體外轉錄和翻譯課件29基因的體外轉錄和翻譯課件30基因的體外轉錄和翻譯課件31基因的體外轉錄和翻譯課件32基因的體外轉錄和翻譯課件33基因的體外轉錄和翻譯課件34基因的體外轉錄和翻譯課件35基因的體外轉錄和翻譯課件36基因的體外轉錄和翻譯課件37基因的體外轉錄和翻譯課件38基因的體外轉錄和翻譯課件39基因的體外轉錄和翻譯課件40基因的體