培訓(xùn)班質(zhì)譜課件

質(zhì)譜法是將樣品離子化，變?yōu)闅鈶B(tài)離子混合物，并按質(zhì)荷比（m/z）分離的分析技術(shù);

質(zhì)譜儀是實現(xiàn)上述分離分析技術(shù),從而測定物質(zhì)的質(zhì)量與含量及其結(jié)構(gòu)的儀器。在有機混合物的分析研究中證明了質(zhì)譜分析法比化學(xué)分析法和光學(xué)分析法具有更加卓越的優(yōu)越性，當(dāng)代研究有機化合物已經(jīng)離不開質(zhì)譜儀。

1一.儀器概述1.基本結(jié)構(gòu)質(zhì)譜儀由以下幾部分組成

數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng)┏━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓進樣系統(tǒng)離子源質(zhì)量分析器檢測接收器┗━━━━━╋━━━━━━┛

真空系統(tǒng)

一.儀器概述1.基本結(jié)構(gòu)2(1)進樣系統(tǒng):把分析樣品導(dǎo)入離子源的裝置,包括:直接進樣,GC,LC及接口,加熱進樣,參考物進樣等。(1)進樣系統(tǒng):把分析樣品導(dǎo)入離子源的裝置,包括:直接進樣,3(2)離子源:使被分析樣品的原子或分子離化為帶電粒子(離子)的裝置,并對離子進行加速使其進入分析器，根據(jù)離子化方式的不同,有機常用的有如下幾種,其中EI,ESI最常用。(2)離子源:使被分析樣品的原子或分子離化為帶電粒子(離子)4

EI(ElectronImpactIonization):電子轟擊電離——硬電離。CI(ChemicalIonization):化學(xué)電離——核心是質(zhì)子轉(zhuǎn)移。FD(FieldDesorption):場解吸——目前基本被FAB取代。FAB(FastAtomBombardment):快原子轟擊——或者銫離子(LSIMS,液體二次離子質(zhì)譜)。

ESI(ElectrosprayIonization):電噴霧電離——屬最軟的電離方式。

APCI(AtmosphericPressureChemicalIonization):大氣壓化學(xué)電離——同上，更適宜做小分子。APPI(AtmosphericPressurePhotoSprayIonization):大氣壓光噴霧電離——同上，更適宜做非極性分子。

MALDI(MatrixAssistedLaserDesorption):基質(zhì)輔助激光解吸電離。EI(ElectronImpactIonization5EI(ElectronImpactIonization):電子轟擊電離——最經(jīng)典常規(guī)的方式,其他均屬軟電離。EI使用面廣，峰重現(xiàn)性好，碎片離子多。缺點：不適合極性大、熱不穩(wěn)定性化合物，且可測定分子量有限，一般≤1,000。EI(ElectronImpactIonization)6

MALDI(MatrixAssistedLaserDesorption):基質(zhì)輔助激光解吸離子化——是一種用于大分子離子化方法，利用對使用的激光波長范圍具有吸收并能提供質(zhì)子的基質(zhì)（一般常用小分子液體或結(jié)晶化合物），將樣品與其混合溶解并形成混合體，在真空下用激光照射該混合體，基體吸收激光能量，并傳遞給樣品，從而使樣品解吸離子化。MALDI的特點是準(zhǔn)分子離子峰很強。通常將MALDI用于飛行時間質(zhì)譜和FT-MS，特別適合分析蛋白質(zhì),多肽等大分子。

MALDI(MatrixAssistedLaserD7hn激光MH++/-20kVGrid(0V)

樣品板hn激光MH++/-20kVGrid(0V)8(3)質(zhì)量分析器:是質(zhì)譜儀中將離子按質(zhì)荷比分開的部分,離子通過分析器后,按不同質(zhì)荷比(M/Z)分開,將相同的M/Z離子聚焦在一起,組成質(zhì)譜。(3)質(zhì)量分析器:是質(zhì)譜儀中將離子按質(zhì)荷比分開的部分,離子通9(4)檢測接收器:接收離子束流的裝置,有:二次電子倍增器光電倍增管微通道板(4)檢測接收器:接收離子束流的裝置,10(5)數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng):將接收來的電信號放大、處理并給出分析結(jié)果及控制質(zhì)譜儀各部分工作。從幾伏低壓到幾千伏高壓。(5)數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng):將接收來的電信號放大、處理并給出分析結(jié)11(6)真空系統(tǒng):由機械真空泵(前極低真空泵),擴散泵或分子泵(高真空泵)組成真空機組,抽取離子源和分析器部分的真空。只有在足夠高的真空下,離子才能從離子源到達接收器,真空度不夠則靈敏度低。(6)真空系統(tǒng):由機械真空泵(前極低真空泵),擴散泵或分子泵122.分類:按質(zhì)量分析器,常見下列幾種:雙聚焦扇形磁場-電場串聯(lián)儀器(sector).四極質(zhì)譜儀(Q).離子阱質(zhì)譜儀（TRAP）.飛行時間質(zhì)譜儀(TOF).付利葉變換-離子回旋共振質(zhì)譜儀(FT-ICRMS).┏混合型如四極+TOF,QTRAP等串列式多級質(zhì)譜儀┫三重四極

(MS/MS) ┗TOF+TOF2.分類:按質(zhì)量分析器,常見下列幾種:133.分析原理:四極分析器quadrupole

由兩組對稱的電極組成。電極上加有直流電壓和射頻電壓（

(U+Vcos

t)）。相對的兩個電極電壓相同，相鄰的兩個電極上電壓大小相等，極性相反。帶電粒子射入高頻電場中，在場半徑限定的空間內(nèi)振蕩。在一定的電壓和頻率下，只有一種質(zhì)荷比的離子可以通過四極桿達到檢測器，其余離子則因振幅不斷增大，撞在電極上而被“過濾”掉。利用電壓或頻率掃描，可以檢測不同質(zhì)荷比的離子。優(yōu)點是掃描速度快,比磁式質(zhì)譜價格便宜,體積小,常作為臺式進入常規(guī)實驗室,缺點是質(zhì)量范圍及分辨率有限。3.分析原理:四極分析器quadrupole14飛行時間質(zhì)譜儀（TOF）:利用相同能量的帶電粒子,由于質(zhì)量的差異而具有不同速度的原理,不同質(zhì)量的離子以不同時間通過相同的漂移距離到達接收器。公式M/Z=2E/v2v=d/t代入M/Z=Kt2E:離子動能v:離子速度d:飛行距離t:飛行時間K:常數(shù)=2E/d2優(yōu)點:掃描速度快,靈敏度高,不受質(zhì)量范圍限制以及結(jié)構(gòu)簡單,造價低廉等.缺點:定量較差。以前分辨率較低,最近新儀器分辨率大幅提高如MALDI-TOF,GC-T，LC-T可得高分辨結(jié)果。

飛行時間質(zhì)譜儀（TOF）:利用相同能量的帶電粒子,由于質(zhì)量的15串聯(lián)質(zhì)譜儀

(MS/MS或Tandem）:離子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器

MS1MS2串聯(lián)質(zhì)譜儀

(MS/MS或Tandem）:離子源→第一分析器16串列式┏混合型Q+TOF,Q+TRAP等多級質(zhì)譜儀┫三重四極(QQQ)(MS/MS)┗TOF+TOF串列式┏混合型Q+TOF,Q+TRAP等17進行MS/MS的儀器從原理上可分為兩類。第一類儀器利用質(zhì)譜在空間中的順序，是由兩臺質(zhì)譜儀串聯(lián)組裝而成。即前面列出的串列式多級質(zhì)譜儀。第二類利用了一個質(zhì)譜儀時間順序上的離子儲存能力，由具有存儲離子的分析器組成，如離子回旋共振儀（ICR）和離子阱質(zhì)譜儀。但不能進行母離子掃描或中性丟失。進行MS/MS的儀器從原理上可分為兩類。18選擇一定質(zhì)量的離子作為母體離子,進入碰撞室,室內(nèi)充有靶子反應(yīng)氣體(碰撞氣體：N2、He、Ar、Xe、CH4等)，發(fā)生離子—分子碰撞反應(yīng)，從而產(chǎn)生‘子離子’，再經(jīng)MS2的分析器及接受器得到子離子質(zhì)譜（productionspectrun）。一般稱做CID(collision-induceddissociation)譜，或者稱為MS/MS譜。最常用的就是三級四極型MS/MS.選擇一定質(zhì)量的離子作為母體離子,進入碰撞室,室內(nèi)充有靶子反應(yīng)19另外，也有子找母離子的MS/MS譜，（MS/MSprecursorionspectrum）研究MS/MS譜（一般指子離子質(zhì)譜，與在源內(nèi)裂解產(chǎn)生的正常碎片質(zhì)譜類似，但有區(qū)別，現(xiàn)不能檢索），可以了解到被分析樣品的混合物性質(zhì)和成分，對一些混合物不必進行色譜分離可直接分析，與色譜法相比，有很快的響應(yīng)速度，省時省樣品省費用，具有高靈敏度和高效率的優(yōu)點。另外一個特點是通過子

母及母

子MS/MS譜可以掌握一定的結(jié)構(gòu)信息,做為目前有力的結(jié)構(gòu)解析手段。另外，也有子找母離子的MS/MS譜，（MS/MSprecu204.儀器性能指標(biāo)(1)質(zhì)量范圍:例如2-3000Da4.儀器性能指標(biāo)(1)質(zhì)量范圍:21(2)分辨率(R):R=M/ΔMM為相鄰兩峰之一的質(zhì)量數(shù).ΔM為差.例如:500與501兩個峰剛好分開.則R=500/1=500.若R=50000則可區(qū)別開500與500.01。對于四極桿儀器,通常做到單位分辨,高低質(zhì)量區(qū)R數(shù)值不同.培訓(xùn)班質(zhì)譜課件22(3)靈敏度:有多種定義方法,粗略地說是表示所能檢查出的最小量,一般可達到10-9-10-15克甚至更低,實際還應(yīng)看信噪比。(3)靈敏度:23二.質(zhì)譜的表示法及解析譜圖法：列表法:質(zhì)量數(shù),相對豐度......高分辨表示法:列表元素組成.二.質(zhì)譜的表示法及解析譜圖法：.241.幾個術(shù)語:質(zhì)荷比M/Z:在質(zhì)譜中不能用平均分子量計算離子的化學(xué)組成,例如:不能用氯的平均分子量35.5,而用35和37。同理,溴也是如此,79和81,無80。相對豐度基峰總離子流(TIC):動態(tài)范圍:本底(BG):1.幾個術(shù)語:質(zhì)荷比M/Z:25質(zhì)量色譜圖/Masschromatogram（MC）又叫提取離子色譜圖/extractionchromatography(XIC)是質(zhì)譜法處理數(shù)據(jù)的一種方式

以指定離子的強度為縱坐標(biāo)，以時間作為橫坐標(biāo)，表示質(zhì)量與時間的關(guān)系。質(zhì)量色譜圖/Masschromatogram（MC）262.離子的種類(1)分子離子M+·在ESI中,往往生成質(zhì)量大于分子量的離子如M+1,M+23,M+39,M+18......稱準(zhǔn)分子離子,表示為:[M+H]+,[M+Na]+等2.離子的種類(1)分子離子M+·27(2)碎片離子:碎片峰的數(shù)目及其豐度則與分子結(jié)構(gòu)有關(guān),數(shù)目多表示該分子較容易斷裂,豐度高的碎片峰表示該離子較穩(wěn)定,也表示分子比較容易斷裂生成該離子。(2)碎片離子:28(3)多電荷離子指帶有2個或更多電荷的離子,有機質(zhì)譜中,單電荷離子是絕大多數(shù),只有那些不容易碎裂的基團或分子結(jié)構(gòu)-如共軛體系結(jié)構(gòu)-才會形成多電荷離子.它的存在說明樣品是較穩(wěn)定的.采用電噴霧的離子化技術(shù),可產(chǎn)生帶很多電荷的離子,最后經(jīng)計算機自動換算成單質(zhì)/荷比離子。(3)多電荷離子29(4)同位素離子各種元素的同位素,基本上按照其在自然界的豐度比出現(xiàn)在質(zhì)譜中,這對于利用質(zhì)譜確定化合物及碎片的元素組成有很大方便,在前面M/Z提到過,如氯35和37,還可利用穩(wěn)定同位素合成標(biāo)記化合物,如:氘等標(biāo)記化合物,再用質(zhì)譜法檢出這些化合物,在質(zhì)譜圖外貌上無變化,只是質(zhì)量數(shù)的位移,從而說明化合物結(jié)構(gòu),反應(yīng)歷程等。同位素峰C13(4)同位素離子30同位素峰C13同位素峰C1331(5)負(fù)離子通常堿性化合物適合正離子,酸性化合物適合負(fù)離子,某些化合物負(fù)離子譜靈敏度很高,可提供很有用的信息。(5)負(fù)離子323.由質(zhì)譜推斷化合物結(jié)構(gòu)質(zhì)譜是一種語言,但需要翻譯.與其他類型譜圖比較,學(xué)習(xí)如何由質(zhì)譜圖識別一個簡單分子要容易得多。質(zhì)譜圖直接給出分子及其碎片的質(zhì)量,因此化學(xué)家不需要學(xué)習(xí)任何新的知識3.由質(zhì)譜推斷化合物結(jié)構(gòu)質(zhì)譜是一種語言,但需要翻譯.33如何看質(zhì)譜圖如何看質(zhì)譜圖34培訓(xùn)班質(zhì)譜課件35(1)確定分子離子,即確定分子量氮規(guī)則:含偶數(shù)個氮原子的分子,其質(zhì)量數(shù)是偶數(shù),含奇數(shù)個氮原子的分子,其質(zhì)量數(shù)是奇數(shù)。與高質(zhì)量碎片離子有合理的質(zhì)量差,凡質(zhì)量差在3～8和10-14,21,25之間均不可能,則說明是碎片或雜質(zhì)(1)確定分子離子,即確定分子量氮規(guī)則:36(2)確定元素組成，即確定分子式或碎片化學(xué)式低分辨,利用元素的同位素豐度,例:(2)確定元素組成，即確定分子式或碎片化學(xué)式低分辨,利用元素37培訓(xùn)班質(zhì)譜課件38(3)峰強度與結(jié)構(gòu)的關(guān)系豐度大反映離子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,在元素周期表中自上而下,自右至左,雜原子外層未成鍵電子越易被電離,容納正電荷能力越強,S>N>O,n>π>σ,含支鏈的地方易斷,這同有機化學(xué)基本一致,總是在分子最薄弱的地方斷裂。(3)峰強度與結(jié)構(gòu)的關(guān)系豐度大反映離子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,39不同類型有機物有不同的裂解方式,相同類型有機物有相同的裂解方式,只是質(zhì)量數(shù)的差異,需要經(jīng)驗記憶,很有用。不同類型有機物有不同的裂解方式,404.質(zhì)譜解析的一般步驟(適于低分辨小分子譜圖,若已經(jīng)高分辨得到元素組成更好)(1)核對獲得的譜圖,扣除本底等因素引起的失真,考慮操作條件是否適當(dāng),(2)綜合樣品其他知識:例如熔點,沸點,溶解性等理化性質(zhì),樣品來源,光譜,波譜數(shù)據(jù)等.4.質(zhì)譜解析的一般步驟(適于低分辨小分子譜圖,若已經(jīng)高分辨得41(3)盡可能判斷出分子離子.(4)假設(shè)和排列可能的結(jié)構(gòu)歸屬:高質(zhì)量離子所顯示的,在裂解中失去的中性碎片,如M-1,M-15,M-18,M-20,M-31......,意味著失H,CH3,H2O,HF,OCH3......(5)假設(shè)一個分子結(jié)構(gòu),與已知參考譜圖對照,或取類似的化合物,并作出它的質(zhì)譜進行對比.(3)盡可能判斷出分子離子.42三.有機質(zhì)譜的特點與應(yīng)用1.優(yōu)點:(1)定分子量準(zhǔn)確,其它技術(shù)無法比。(2)靈敏度高,常規(guī)10-7—10-8g,單離子檢測可達10-12g。(3)快速,幾分甚至幾秒。(4)便于混合物分析,LC/MS,MS/MS對于難分離的混合物特別有效,其它技術(shù)無法勝任。(5)多功能,廣泛適用于各類化合物。三.有機質(zhì)譜的特點與應(yīng)用1.優(yōu)點:432.局限性:(1)異構(gòu)體,立體化學(xué)方面區(qū)分能力差。(2)重復(fù)性稍差,要嚴(yán)格控制操作條件。所以不能象低場NMR,IR等自己動手,須專人操作.(3)有離子源產(chǎn)生的記憶效應(yīng),污染等問題。(4)價格稍顯昂貴,操作有點復(fù)雜。2.局限性:443.應(yīng)用(1)有機化工a.合成中原料及產(chǎn)品雜質(zhì)分析——LC/MSb.中間步驟監(jiān)測c.反應(yīng)機理的研究(2)石油(3)環(huán)保a.農(nóng)藥殘毒檢測b.大氣污染c.水分析d.特定成分定量測定3.應(yīng)用(1)有機化工45(4)食品、香料a.酒：判斷真酒假酒,有無害.b.化妝品(5)生化、醫(yī)藥a.蛋白質(zhì),多肽研究,前沿生命科學(xué),b.天然產(chǎn)物.(6)法醫(yī)、毒化(4)食品、香料46液相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

李立軍色譜是快速靈敏分離有機物的有效手段，各種檢測器中，除了應(yīng)用最廣泛的FID（GC）和UV（LC）外，質(zhì)譜（MS）盡管價格較昂貴，但是其選擇性、靈敏度、分子量及結(jié)構(gòu)信息等優(yōu)勢，已被公認(rèn)為高級的通用型檢測器，液相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)李立軍47一.液相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用適用范圍首先看看氣相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用的特點：·要求樣品氣化后進入質(zhì)譜儀·用電子轟擊方式（EI）得到的譜圖，可與標(biāo)準(zhǔn)譜庫對比·用毛細管色譜柱分離化合物，分高效率高·操作條件穩(wěn)定、使用方法成熟·適宜分析小分子、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定的化合物一.液相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用適用范圍首先看看氣相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用的特48液相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用主要可解決如下幾方面的問題：①不揮發(fā)性化合物分析測定；②極性化合物的分析測定；③熱不穩(wěn)定化合物的分析測定；④大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等）的分析測定；液相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用主要可解決如下幾方面的問題：49培訓(xùn)班質(zhì)譜課件50二．液相色譜／質(zhì)譜接口的發(fā)展起步于70年代，先后研究出27種接口1．傳送帶（MB）2．熱噴霧（TS）3．粒子束（PB）4．連續(xù)流動快原子轟擊（CFFAB）5．大氣壓電離（API）（接口與電離相結(jié)合）二．液相色譜／質(zhì)譜接口的發(fā)展起步于70年代，先后研究出2751目前大氣壓電離特指：電噴霧（ESI），離子噴霧（IS）和大氣壓化學(xué)電離（APCI）及APPI。(1).由于產(chǎn)生多電荷離子（在ESI和IS下），測定分子量可以達到10萬道爾頓以上(2)．靈敏度達fg-pg(3)．適用于極性和離子型化合物(4)．進樣方式多樣靈活a）直接流動進樣b）與液相色譜聯(lián)用c）與毛細管電泳聯(lián)用目前大氣壓電離特指：電噴霧（ESI），離子噴霧（IS）和大氣52三．接口原理1．電噴霧電離(ESI)電噴霧電離是一種“軟”電離技術(shù)，ESI－MS既可分析小分子也可分析大分子。(1)．電噴霧機理“離子蒸發(fā)”，如圖所示。(2)．電噴霧離子源(離子噴霧)IncludesIonSpray,TurboIonspray,NanoSpray三．接口原理1．電噴霧電離(ESI)53培訓(xùn)班質(zhì)譜課件54調(diào)節(jié)錐體電壓（DP）可使離子源輸出的離子數(shù)達最佳條件，它通常以[M＋H]+或[M-H]-是否最佳來衡量。但是，錐體電壓增加越大，離子碎裂也越加劇。這種效應(yīng)可產(chǎn)生反映樣品結(jié)構(gòu)信息的碎片，而且重現(xiàn)性好，還可用碎片離子準(zhǔn)確進行物質(zhì)的定量分析。由此可產(chǎn)生裂片的功能稱為源內(nèi)CID（碰撞誘導(dǎo)分解）。調(diào)節(jié)錐體電壓（DP）可使離子源輸出的離子數(shù)達最佳條件，它通常552·大氣壓化學(xué)電離（HeatedNebulizer或APCI）2·大氣壓化學(xué)電離（HeatedNebulizer或APC563．電噴霧與大氣壓化學(xué)電離的比較·電離機理：電噴霧采用離子蒸發(fā)，而APCI電離是高壓放電,發(fā)生了質(zhì)子轉(zhuǎn)移而生成[M＋H]+或[M-H]-離子。·樣品流速：APCI源可從0．2到2ml／min；而電噴霧源允許流量相對較小.·斷裂程度；APCI源的探頭處于高溫，對熱不穩(wěn)定的化合物就足以使其分解.·靈敏度：通常認(rèn)為電噴霧有利于分析生物大分子及其它分子量大的化合物，而APCI更適合于分析極性較小的化合物。·多電荷：APCI源不能生成一系列多電荷離子.3．電噴霧與大氣壓化學(xué)電離的比較574．NanoFlowAPI接口專門設(shè)計的NanoSpray離子源特別適合于做微量的生化樣品，其流速范圍可從5nL／min到luL／min。一滴樣品就可做數(shù)小時的分析?？稍谧钚〉臉悠废牧肯芦@得最大靈敏度。靈敏度可高達fmole。并可直接與微孔HPLC聯(lián)用。4．NanoFlowAPI接口585.液相色譜一質(zhì)譜各種聯(lián)用技術(shù)的比較5.液相色譜一質(zhì)譜各種聯(lián)用技術(shù)的比較596.LC/MS與LC/UV的比較6.LC/MS與LC/UV的比較60四．LC／MS對LC的要求

1．不加熱ESI的最佳流速是1—50ul／min，應(yīng)用4.6mm內(nèi)徑LC柱時要求柱后分流，目前大多采用l—2mm內(nèi)徑的微柱，TIS源最高允許lml／min，建議200-400ul／min。2．APCI的最佳流速～lml／min，常規(guī)的直徑4.6mm柱最合適。四．LC／MS對LC的要求1．不加熱ESI的最佳流速是1—613．LC／MS接口避免進入不揮發(fā)的緩沖液，避免含磷和氯的緩沖液，含鈉和鉀的成分必須＜lmmol/l。含甲酸（或乙酸）＜2％。含三氟乙酸≤0.5％。含三乙胺＜l％。含醋酸銨＜10一5mmol/l。送樣前一定要摸好LC條件，能夠基本分離，緩沖體系符合MS要求。3．LC／MS接口避免進入不揮發(fā)的緩沖液，避免含磷和氯的緩沖624．總離子流（TIC）可以與UV圖相對照，但不一定完全對應(yīng)，特征離子的質(zhì)量色譜在復(fù)雜混合物分析及痕量分析時是LC／MS測定中最有用的譜圖.為了提高分析效率，常采用＜100mm的短柱（此時UV圖上并不能獲得完全分離）。4．總離子流（TIC）可以與UV圖相對照，但不一定完全對應(yīng)，635．樣品的預(yù)處理：

（1）為什么要進行樣品的預(yù)處理認(rèn)為LC／MS／MS不需要樣品預(yù)處理的理解是片面的·防止固體小顆粒堵塞進樣管道和噴嘴·獲得最佳的分析結(jié)果.從ESI電離的過程分析：從ESI電離的過程分析：ESI電荷是在液滴的表面樣品與雜質(zhì)在液滴表面存在競爭不揮發(fā)物防礙帶電液滴表面揮發(fā)帶電離子進入氣相大量雜質(zhì)防礙帶電樣品離子進入氣相狀態(tài)

大量雜質(zhì)離子的存在增加電荷中和的可能5．樣品的預(yù)處理：64

（2）樣品的預(yù)處理常用方法

a）超濾b）溶劑萃?。}c）固相萃取d）灌注（Perfusion）凈化／去鹽e）色譜分離反相色譜分離親和技術(shù)分離f）沉淀蛋白（2）樣品的預(yù)處理常用方法65五．用大氣壓電離質(zhì)譜儀得到的分子量信息

分子離子是最有用的特征離子。

1.測定分子量的方式:

·對于極性化合物使用ESI方式

正離子掃描

負(fù)離子掃描

·對于中性或弱極性化合物使用APCI方式

五．用大氣壓電離質(zhì)譜儀得到的分子量信息分子離子是最有用的特66正離子方式常出現(xiàn)如下離子:-Na22Da.higherthanM+H-K38Da.higherthanM+H-Li6Da.higherthanM+H-NH417Da.higherthanM+H-ACN40Da.higherthanM+H2M+H,2M+Na等負(fù)離子方式常出現(xiàn)如下離子:-TFA114Da.higherthenM-H(113and227background)-Acetate60Da.higherthenM-H-Formic46Da.higherthenM-H-Cl36Da.higherthanM-H

正離子方式常出現(xiàn)如下離子:672.影響分子量測定的因素1）PH的影響2）氣流和溫度3）溶劑和緩沖液流量4）溶劑和緩沖液的類型5）選擇合適的液相色譜類型6）合適的電壓7）樣品結(jié)構(gòu)和性質(zhì)8）雜質(zhì)的影響2.影響分子量測定的因素683．根據(jù)多電荷離子計算分子量有些化合物，如蛋白質(zhì)類，經(jīng)常帶有多個電荷·質(zhì)譜儀分析荷質(zhì)比（m／z），這些離子以“表觀”質(zhì)量數(shù)出現(xiàn)在質(zhì)譜圖上，既得到M1，M2，M3…．·相鄰兩個質(zhì)譜峰的電荷數(shù)差1，即n1=n2＋1·設(shè)樣品的真實分子量為M·可以列出方程組：

3．根據(jù)多電荷離子計算分子量69n1=n2＋1……………（l）(M+n1H)/n1=M1………（2）(M+n2H)/n2=M2，……(3）M為真實分子量H為質(zhì)子的質(zhì)量n1，n2，為電荷數(shù)M1，M2為質(zhì)譜測得的離子的“表觀”質(zhì)量數(shù)解方程組，得到電荷數(shù)，進而算出分子量Mn2=(M1-H)/(M2-M1)，(n2取最接近的整數(shù)）M=n2·（M2－H）

n1=n2＋1……………（l）704．分子量測定中的誤判·溶劑中的雜質(zhì)來自于塑料添加劑的峰樣品容器不干凈常見表面活性劑的峰·進樣系統(tǒng)污染·樣品在源內(nèi)碎裂，形成碎片離子4．分子量測定中的誤判71LC-MS中常見的本底離子m/z15-150,溶劑離子，[(H2O)nH+，n=3-112]m/z102,H+乙腈+乙酸,C4H7NO2H+,102.0549m/z149,管路中鄰苯二甲酸酯的酸酐,C8H4O3H+,149.0233m/z288,2mm離心管的產(chǎn)生的特征離子m/z279,管路中鄰苯二甲酸二丁酯C16H22O4H+,279.1591m/z316,2mm離心管的產(chǎn)生的特征離子m/z384,瓶的光穩(wěn)定劑產(chǎn)生的離子m/z391,管路中鄰苯二甲酸二辛酯,C24H38O4H+,391.2843m/z538,乙酸+氧+鐵（噴霧管）,Fe3O(O2CCH3)6,537.8793

LC-MS中常見的本底離子725．分子量測定失敗的原因a）流動相不合適b）不揮發(fā)性鹽的影響c）成分復(fù)雜，雜質(zhì)太多d)樣品濃度不夠e）pH值不合適f）樣品在源內(nèi)分解或碎裂5．分子量測定失敗的原因73六．LC/MS/MS1.化合物鑒別

(1)全掃描方式

全掃描數(shù)據(jù)采集用于鑒別是否有未知物，并確認(rèn)一些判斷不清的化合物，如合成化合物的質(zhì)量及結(jié)構(gòu)。

六．LC/