食品安全檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

食品安全檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

自中國(guó)食品檢驗(yàn)方法（gb4799-84）頒布以來，中國(guó)的食品微生物檢驗(yàn)逐漸走上了標(biāo)準(zhǔn)化的發(fā)展道路。隨著微生物檢驗(yàn)方法的逐步形成和完善，為了保證中國(guó)微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量，許多微生物檢驗(yàn)工作者進(jìn)行了不斷的探索和積累，并逐步形成了一些有效的方法。2000年中國(guó)疾病預(yù)防控制中心(CDC)建立了全國(guó)食品污染物監(jiān)測(cè)體系,構(gòu)建了國(guó)家級(jí)監(jiān)控網(wǎng)絡(luò)和數(shù)據(jù)庫(kù),將微生物危險(xiǎn)性評(píng)估技術(shù)、DNA指紋圖譜分型技術(shù)、病原微生物PCR快速檢測(cè)技術(shù)作為食品安全關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行攻關(guān)研究,運(yùn)用到我國(guó)的食源性疾病監(jiān)控體系上,該監(jiān)測(cè)網(wǎng)的建立使我國(guó)疾病預(yù)防控制部門及時(shí)掌握食源性疾病的狀況,快速應(yīng)對(duì)重大食源性疾病突發(fā)事件,為食源性疾病監(jiān)控提供了一個(gè)技術(shù)平臺(tái),為縮小我國(guó)食源性疾病監(jiān)控技術(shù)與發(fā)達(dá)國(guó)家的差距奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。目前我國(guó)食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)方法種類繁雜,既有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法,又有大量行業(yè)方法和企業(yè)方法。本文就國(guó)內(nèi)外的食品微生物檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用和研究狀況綜述如下。1微生物檢驗(yàn)方法落后，不能應(yīng)對(duì)快速高效檢驗(yàn)方法的要求2003年頒布的《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物學(xué)部分GB4789-2003》更新和完善了各類微生物的生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，但傳統(tǒng)的食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)方法須經(jīng)過增殖培養(yǎng)、分離純化、生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)等，檢驗(yàn)步驟繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，不能應(yīng)對(duì)市場(chǎng)需求快速準(zhǔn)確檢驗(yàn)方法的要求。為了解決上述矛盾，產(chǎn)生許多改進(jìn)的新方法，如目前已經(jīng)生產(chǎn)出了多種微型化的生化試劑盒、鑒別培養(yǎng)基、快速測(cè)試片等產(chǎn)品可供實(shí)際應(yīng)用。1.1實(shí)驗(yàn)改進(jìn)的效果生化試劑盒(生化鑒定管)的原理就是將多種常用的細(xì)菌生化分析試劑、培養(yǎng)基集成在特定的微型化的裝置中，將傳統(tǒng)方法中需要多次完成的實(shí)驗(yàn)改進(jìn)為一次完成，能夠在短時(shí)間內(nèi)獲得結(jié)果，從而節(jié)約了樣品的分析時(shí)間，節(jié)約成本，提高了檢驗(yàn)速度。1.2微生物培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，使難以區(qū)分的微生物經(jīng)培養(yǎng)后呈現(xiàn)出明顯差別，因而有助快速鑒別某種微生物的一種培養(yǎng)基。例如對(duì)大腸桿菌O157:H7進(jìn)行檢測(cè)的SMAC瓊脂培養(yǎng)基等，其主要原理是細(xì)菌產(chǎn)生特定的代謝產(chǎn)物同培養(yǎng)基中生化物質(zhì)進(jìn)行反應(yīng)，從而根據(jù)不同的顏色進(jìn)行判斷。1.3檢品的質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定快速測(cè)試片法是指以紙片、膠片等作為培養(yǎng)基載體，將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在載體上面，通過微生物在其上的生長(zhǎng)、顯色來測(cè)定食品中微生物的方法。其具有以下優(yōu)點(diǎn)：可測(cè)定少量檢品、操作簡(jiǎn)便、易消毒保存、價(jià)格低廉、污染小、能真實(shí)反應(yīng)檢品中的細(xì)菌數(shù)等。近年來這種集化學(xué)、高分子學(xué)和微生物學(xué)于一體的檢測(cè)方法開始發(fā)展起來，以濾紙和已經(jīng)通過AOAC(國(guó)際分析化學(xué)協(xié)會(huì))認(rèn)可的美國(guó)3M公司的Petrifilm為載體的測(cè)試片已開始被廣泛應(yīng)用，目前已商品化的微生物測(cè)試片有：菌落總數(shù)測(cè)試片、大腸菌群測(cè)試片、霉菌和酵母菌測(cè)試片、沙門氏菌測(cè)試片和金黃色葡萄球菌測(cè)試片。1.4vitek-ams檢測(cè)微生物的自動(dòng)化檢測(cè)具有操作標(biāo)準(zhǔn)化、簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確率高等特點(diǎn)，是微生物檢測(cè)發(fā)展的方向之一。國(guó)內(nèi)外現(xiàn)在已有很多全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)問世，如Vitek系統(tǒng)、Biolog系統(tǒng)、Midd系統(tǒng)、Sensititre系統(tǒng)、Autosceptor系統(tǒng)、BAX系統(tǒng)和Phoenix細(xì)菌鑒定/藥敏試驗(yàn)系統(tǒng)等，其中法國(guó)生物梅里埃的Vitek-Ams系統(tǒng)已被AOAC列為法定分析法。Vitek系統(tǒng)的原理是將菌懸液接種到在含有干燥的生化試劑或培養(yǎng)基的聚苯乙烯卡片內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)，然后將卡片放入具有讀數(shù)功能的孵箱內(nèi)，每隔一定時(shí)間，儀器會(huì)自動(dòng)檢測(cè)培養(yǎng)基的發(fā)酵情況，并換算成能被計(jì)算機(jī)所接受的信息，最后由計(jì)算機(jī)比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)得出鑒定結(jié)果。2新技術(shù)的建立早在1896年，Widal就利用傷寒病人血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象成功地診斷傷寒病。后來根據(jù)凝集反應(yīng)的原理，以后又發(fā)展了各種間接凝集試驗(yàn)、間接凝集抑制試驗(yàn)以及固相免疫吸附血凝試驗(yàn)、各類標(biāo)記技術(shù)(如熒光、放射、膠體金等)等新方法，逐步建立了免疫血清法、乳膠凝集法、免疫擴(kuò)散法、免疫磁珠法、免疫沉淀法、抗體印跡法、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附)法和免疫膠體金技術(shù)等微生物免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。免疫學(xué)方法具有快速、靈敏度高、特異性好等優(yōu)點(diǎn)，近年來以ELISA法、免疫膠體金技術(shù)、酶聯(lián)熒光免疫分析技術(shù)(VIDAS)發(fā)展最為迅速，下面簡(jiǎn)單介紹下這兩種方法。2.1抗體檢測(cè)方法ELISA法是一種固相免疫測(cè)定技術(shù)，其先將抗體或抗原包被到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。檢測(cè)時(shí)將待檢樣本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，再加入酶標(biāo)抗體與免疫復(fù)合物結(jié)合，用洗滌的方法分離抗原抗體復(fù)合物和游離的未結(jié)合成分，最后加入酶反應(yīng)底物，根據(jù)底物被酶催化產(chǎn)生的顏色及其吸光度值的大小進(jìn)行定性或定量分析。根據(jù)檢測(cè)目的和操作步驟不同，有雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法三種類型的常用方法。白封閉劑遮蔽,使檢測(cè)靈敏度受影響。Ngai等先將金黃色葡萄球菌蛋白A(ProteinA)固相化，然后利用ProteinA能和IgG的Fc段穩(wěn)定結(jié)合的特點(diǎn)，使IgG抗體有序性地結(jié)合到固相上，大大增加抗體對(duì)抗原的有效結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度大幅提高。2.2膠體金標(biāo)記的作用免疫膠體金技術(shù)(immunogoldlabellingtechnique)是指氯金酸(HAuCI4)在還原劑存在下，被還原析出納米級(jí)的金顆粒，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。蛋白質(zhì)等被吸附到膠體金顆粒表面形成包被而被膠體金標(biāo)記，于顯微鏡下可見黑褐色顆粒。當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而可用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)。目前在微生物學(xué)檢驗(yàn)中常用的是快速免疫金滲透法和免疫層析法。2.3熒光免疫分析法2002年，美國(guó)開始生產(chǎn)自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫檢測(cè)系統(tǒng)(VIDAS)。酶聯(lián)熒光免疫分析技術(shù)將酶系統(tǒng)與熒光免疫分析結(jié)合起來，在普通酶免疫分析的基礎(chǔ)上用理想的熒光底物代替生色底物,就可提高分析的靈敏度和增寬測(cè)量范圍，減少試劑的用量。酶放大技術(shù)、固相分離及熒光檢測(cè)三者的聯(lián)合成為熒光免疫分析中最靈敏的方法，已用于檢測(cè)李斯特菌、沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7等。3代謝研究技術(shù)代謝學(xué)技術(shù)是指利用微生物代謝的理論，通過比對(duì)微生物生理生長(zhǎng)的一些如底物、電阻抗、代謝產(chǎn)物的變化特性，而達(dá)到微生物檢測(cè)目的的方法。3.1其他反應(yīng)物用量ATP普遍存在于包括微生物在內(nèi)的一切活細(xì)胞內(nèi)，其做為熒光素酶直接作用底物。在生物發(fā)光反應(yīng)中，當(dāng)其他反應(yīng)物過量時(shí)，發(fā)出的總光量和最大光強(qiáng)度同ATP的量成正比。ATP生物發(fā)光技術(shù)的原理是熒光素酶(fireflyluciferase)以D-熒光素(D-luciferin)、三磷酸腺苷(ATP)和O2為底物，在Mg2+存在時(shí)，將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能，發(fā)出光量子，反應(yīng)可表示如下：3.2培養(yǎng)基電阻變化電阻抗技術(shù)是指微生物在生長(zhǎng)繁殖的過程中，會(huì)使底物大分子電惰性物質(zhì)如碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂類等，代謝降解為具有電活性的小分子物質(zhì)，如乳酸鹽、醋酸鹽等，使培養(yǎng)基的電阻發(fā)生變化，通過檢測(cè)培養(yǎng)基的電阻變化情況，即可判定微生物在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)繁殖情況。陳廣全等已用該法檢測(cè)食品中沙門氏菌。3.3生物的檢出和鑒別微熱量計(jì)技術(shù)是通過測(cè)定微生物生長(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生的熱量變化進(jìn)行微生物的檢出和鑒別。用微量熱計(jì)測(cè)量微生物在生長(zhǎng)過程中產(chǎn)熱量等數(shù)據(jù)經(jīng)計(jì)算機(jī)分析，并在繪制成以產(chǎn)熱量和時(shí)間組成的熱曲線圖，并和已知微生物熱曲線圖直觀比較，對(duì)微生物做出鑒別。3.4放射性14c標(biāo)記放射測(cè)量技術(shù)是根據(jù)微生物在生長(zhǎng)繁殖過程中代謝碳水化合物產(chǎn)生CO2的原理，把微量的放射性14C標(biāo)記引入碳水化合物或鹽類等底物分子中進(jìn)行檢測(cè)的。在微生物生長(zhǎng)時(shí)，這些底物被利用并釋放出含放射性的CO2，然后通過14C自動(dòng)化放射測(cè)定儀Bactec測(cè)量CO2的含量，從而根據(jù)碳14CO2含量的多少來判斷微生物的數(shù)量。4檢測(cè)方法學(xué)上的應(yīng)用生物傳感器的工作原理是，待測(cè)物質(zhì)進(jìn)入固定的生物功能敏感元件(由酶、抗原、抗體、細(xì)胞器、完整細(xì)胞、激素、核酸等制成)后，經(jīng)分子識(shí)別而發(fā)生生物學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生的信息如光、熱等被相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)換器變?yōu)榭啥亢涂商幚淼碾娦盘?hào)，從而換算出被測(cè)物質(zhì)的量或濃度。目前已經(jīng)商品化的傳感器有酶?jìng)鞲衅鳌⒚庖邆鞲衅?、微生物傳感器、DNA雜交傳感器、細(xì)胞器傳感器、仿生傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器的出現(xiàn)掀起了微生物檢測(cè)方法學(xué)上的一場(chǎng)革命，可以也使食品工業(yè)生產(chǎn)和包裝過程中微生物自動(dòng)檢測(cè)成為可能。He等提出了一項(xiàng)新的生物納米技術(shù)，該技術(shù)是采用生物修飾的納米顆粒(納米顆粒起到極強(qiáng)的信號(hào)放大作用)，通過熒光信號(hào)為基礎(chǔ)的免疫試驗(yàn)，快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出單個(gè)細(xì)菌。4.1光催化機(jī)械工作原理光纖傳感器由光學(xué)系統(tǒng)、電子學(xué)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)及控制與處理系統(tǒng)組成。目前使用的光纖材料是聚苯乙烯。光纖傳感器中激光激發(fā)光路產(chǎn)生的光波在光纖全反射的過程中激發(fā)光纖纖芯表面標(biāo)記在生物分子(蛋白、核酸等)上的熒光染料，接受光路接受熒光信號(hào)，并由光電倍增管轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，計(jì)算機(jī)對(duì)輸出的電信號(hào)進(jìn)行分析并給出光電倍增作電壓的控制電壓值、光信號(hào)值、功率值及光信號(hào)/功率值。Anderson等應(yīng)用光纖傳感器RAPTOR，光后檢測(cè)鼠疫桿菌F1抗原、葡萄球菌腸海素、蓖麻海素、炭拍芽他、土拉弗氏菌等。魏華等用光纖生物傳感器FOB-3檢測(cè)炭疽桿菌、鼠疫桿菌及葡萄球菌腸毒素B。4.2spr檢測(cè)原理表面等離子共振(SPR)傳感器根據(jù)不同待測(cè)生物分子的特點(diǎn)，將已知生物分子(蛋白、核酸等)借助共價(jià)鍵或非特異性吸附等作用固化在幾十納米厚的金屬膜表面，然后加入能夠與之結(jié)合的目標(biāo)生物分子，由此引發(fā)的光學(xué)信號(hào)隨即被SPR傳感器轉(zhuǎn)化成電信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)并分析，SPR檢測(cè)方法能夠?qū)崟r(shí)對(duì)生物分子或無機(jī)分子之間的相互作用模式及動(dòng)力學(xué)進(jìn)行檢測(cè)。Meeusen等應(yīng)用SPR生物傳感器對(duì)食品中的鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)及大腸桿菌(Escherichiacoli)O157:H7進(jìn)行檢測(cè)。5流式細(xì)胞儀檢測(cè)流式細(xì)胞技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometer,FCM)是采用流式細(xì)胞儀對(duì)單個(gè)細(xì)胞或其他生物微粒進(jìn)行快速定性、定量分析與分選的一門技術(shù)。FCM可通過熒光染料標(biāo)記可檢測(cè)病原菌、毒素和血清抗體，還可在細(xì)胞懸液中原位雜交產(chǎn)生熒光檢出被病毒感染細(xì)胞內(nèi)的特異性病毒核酸(DNA或RNA)。流式細(xì)胞儀主要由細(xì)胞流動(dòng)室(包括樣品管、鞘液管)、激光聚焦區(qū)、檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等4部分組成，其工作原理是將被檢測(cè)對(duì)象制備成一定濃度的細(xì)胞(微粒)懸液，經(jīng)熒光染色后放入流式細(xì)胞儀的樣品管中，細(xì)胞在氣體的壓力下進(jìn)入鞘液管，在鞘液的約束下，細(xì)胞(微粒)排列成單列從流動(dòng)室的噴嘴高速噴出成為細(xì)胞(微粒)液粒，經(jīng)熒光染色后的細(xì)胞經(jīng)過激光聚焦區(qū)時(shí)受激光激發(fā)，產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)，通過一些波長(zhǎng)選擇通透性濾光片，可以將不同波長(zhǎng)的散射光和熒光信號(hào)區(qū)分而將單個(gè)細(xì)胞(微粒)液滴分離，并由計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖象及數(shù)據(jù)處理?，F(xiàn)在該技術(shù)已經(jīng)能夠檢測(cè)純化的DNA可達(dá)pg級(jí)水平，在10min內(nèi)可以完成數(shù)據(jù)的收集和分析。Cohen等用熒光染料EB和光散射信號(hào)在2h內(nèi)分別在43個(gè)不同來源的臨床標(biāo)本中檢測(cè)出細(xì)菌。Tapp等使用類似方法對(duì)蘇云金桿菌產(chǎn)生的毒素進(jìn)行檢驗(yàn)和示蹤，結(jié)果顯示FCM比斑點(diǎn)ELISA法更敏感、快速。6其他微生物檢測(cè)PCR是在體外合適條件下，以DNA(或RNA)為模板，以一對(duì)人工合成的寡核苷酸為引物在熱穩(wěn)定DNA聚合酶作用下特異性擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。整個(gè)反應(yīng)過程通常由20～40個(gè)PCR循環(huán)組成，每個(gè)PCR循環(huán)包括高溫變性—低溫復(fù)性—適溫延伸三個(gè)步驟。自1985年美國(guó)PE-Cetus公司Mullis等人發(fā)明PCR技術(shù)以來，經(jīng)發(fā)展并結(jié)合其他技術(shù)衍出了許多PCR優(yōu)良技術(shù)，如反轉(zhuǎn)錄PCR、多重PCR、不對(duì)稱PCR、錯(cuò)配PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP、PCR-ASO、RAPD-PCR、DDRT-PCR、定量PCR、免疫PCR等。PCR法檢測(cè)食品中的微生物首先要富集細(xì)菌細(xì)胞，通常經(jīng)離心沉淀、濾膜過濾等方法可從樣品中獲得微生物細(xì)胞，然后裂解細(xì)胞,使細(xì)胞中的DNA釋放，再根據(jù)微生物所特有的特異性序列來設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增細(xì)胞靶特異性的DNA序列，最后用電泳法或特異性核酸探針檢測(cè)擴(kuò)增的用細(xì)菌中特異性的DNA序列。PCR技術(shù)只需數(shù)小時(shí)，就可以電泳法檢測(cè)出0.01mgDNA中僅含數(shù)個(gè)拷貝的模板序列，特異性極高。近年來用PCR技術(shù)檢測(cè)食品中的致病菌的方法有多種，如常規(guī)PCR、套式PCR、熒光定量PCR、多重PCR等，也可幾種方法結(jié)合運(yùn)用。保守16～23SrRNA區(qū)域幾乎存在于所有細(xì)菌中，這也為細(xì)菌的檢測(cè)提供了理論依據(jù)，可通過反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增此16～23SrRNA區(qū)間序列鑒別出非常接近的菌種和種內(nèi)細(xì)菌。Rahn等以沙門氏菌侵襲因子invA基因?yàn)槟康幕?，用PCR法對(duì)沙門氏傷寒進(jìn)行檢測(cè)。LukeT.Daum等利用Real-TimePCR法3h內(nèi)可從雞肉中檢出沙門氏菌。Tsen等通過選擇大腸桿菌的16SrRNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增來檢測(cè)水中的大腸桿菌細(xì)胞，可以達(dá)到1E.coilcell/100ml的檢測(cè)限。盧林耿等用PCR法檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的產(chǎn)志賀樣毒素基因，實(shí)驗(yàn)表明引物具有高特異性。楊小鵑等利用多重PCR對(duì)副溶血弧菌進(jìn)行了檢測(cè)。7dna探針檢測(cè)方法基因探針微生物檢測(cè)技術(shù)是在SouthernBlotting等生物技術(shù)基礎(chǔ)上結(jié)合了PCR技術(shù)發(fā)展起來的，其原理是從微生物中提取或擴(kuò)增特異性的DNA片段，純化后再將此DNA片段標(biāo)記上可被檢測(cè)的指示劑，如放射性同位素、熒光物質(zhì)等，使之成為特異性的DNA探針。微生物經(jīng)過處理后固定于另一固相表面上，經(jīng)洗滌變性后加入DNA探針進(jìn)行雜交，DNA探針可以與同源性的靶DNA進(jìn)行互補(bǔ)性結(jié)合，依據(jù)指示劑選用合適的方法進(jìn)行檢測(cè)。Chiton公司于1994年推出了檢測(cè)微生物的分支探針試劑盒。KerdahiKF等曾進(jìn)行了無放射性的探針進(jìn)行檢測(cè)單核細(xì)胞增生李氏菌，認(rèn)為敏感性和特異性都很好。8生物材料的犯罪表現(xiàn)形式生物芯片是通過縮微技術(shù)，根據(jù)分子間特異性地相互作用的原理，將生物分子(寡聚核苷酸、cDNA、基因組、DNA、多肽、抗原、抗體等)固定于硅片、玻璃片、塑料片、凝膠、尼龍膜等固相介質(zhì)上形成的生物分子點(diǎn)陣。在待分析樣品中的生物分子與生物芯片的探針分子發(fā)生雜交或相互作用后，利用激光共聚焦顯微掃描儀等對(duì)雜交信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)和分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因及其它生物組分的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測(cè)。按照芯片上固化的生物材料的不同，可以將生物芯片劃分為基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片和組織芯片。按照生物芯片的制作技術(shù)，可以將生物芯片劃分為微矩陣和原位合成芯片。8.1dna芯片分類現(xiàn)有的PCR擴(kuò)增法1次只能對(duì)1種基因成分進(jìn)行檢測(cè),對(duì)有多種細(xì)菌污染的食品則無從下手，基因芯片具有高通量能并行檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，僅靠一個(gè)實(shí)驗(yàn)就能檢測(cè)出大量的未知菌，所以基因芯片技術(shù)在微生物研究領(lǐng)域的成功經(jīng)驗(yàn)為其應(yīng)用于食品微生物特別是致病菌的檢測(cè)打下了基礎(chǔ)。根據(jù)芯片上探針分子種類的不同，基因芯片可以分為寡核苷酸芯片、cDNA芯片與DNA芯片。按照基因芯片的用途可分為表達(dá)譜芯片、診斷芯片、指紋圖譜芯片、測(cè)序芯片、毒理芯片等等。1992年，Affymatrix公司Fodor領(lǐng)導(dǎo)的小組運(yùn)用半導(dǎo)體照相平板技術(shù)，對(duì)原位合成制備的DNA芯片作了首次報(bào)道，這是世界上第一塊基因芯片。1995年，Stanford大學(xué)的BrownP實(shí)驗(yàn)室發(fā)明了第一塊以玻璃為載體的基因微矩陣芯片，標(biāo)志著基因芯片技術(shù)進(jìn)入了廣泛研究和應(yīng)用的時(shí)期?；蛐酒芯吭趪?guó)內(nèi)也有了很快的發(fā)展，如復(fù)旦大學(xué)、中科院上海冶金所、清華大學(xué)、聯(lián)合基因有限公司、軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中科院上海細(xì)胞所等單位已在生物芯片技術(shù)方面取得了較大突破。Appelbaum設(shè)計(jì)了一種鑒別診斷芯片，將高度保守基因序列和血清型所特有的標(biāo)志基因固著于芯片表面，同時(shí)含有細(xì)菌所共有的16SrDNA保守序列以確定為細(xì)菌污染標(biāo)志，對(duì)幾種細(xì)菌進(jìn)行鑒別。李君文等建立了以基因芯片技術(shù)為基礎(chǔ)的水中常見致病菌的快速檢測(cè)與鑒定技術(shù)獲得了較高的敏感性。8.2激光掃描檢測(cè)蛋白質(zhì)芯片是對(duì)固相載體