病理學(xué)技術(shù)-特殊染色技術(shù)

病理學(xué)技術(shù)-特殊染色技術(shù)大體觀察（肉眼觀察）組織和細(xì)胞學(xué)觀察（鏡下觀察）組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)觀察

免疫組織化學(xué)觀察超微結(jié)構(gòu)觀察（電鏡觀察）流式細(xì)胞術(shù)圖像分析技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)病理學(xué)技術(shù)結(jié)締組織染色肌肉組織染色糖類染色色素類染色病理內(nèi)源性沉著物染色病原微生物染色內(nèi)分泌細(xì)胞染色特殊染色結(jié)締組織復(fù)合染色法膠原纖維染色網(wǎng)狀纖維染色彈性纖維染色結(jié)締組織染色結(jié)締組織（connectivetissue)廣泛分布于人體和動物體內(nèi)，其結(jié)構(gòu)特點是細(xì)胞分散，有大量的細(xì)胞間質(zhì)纖維和基質(zhì)，而化學(xué)成分是含有大量的蛋白和多糖。結(jié)締組織一般分為固有結(jié)締組織（其中包括疏松、致密和網(wǎng)狀結(jié)締組織等）、軟骨組織和骨組織。在病理形態(tài)學(xué)上用以判定各種組織病變程度與修復(fù)情況。對于鑒別梭形細(xì)胞軟組織腫瘤的來源屬于纖維性、肌肉性還是神經(jīng)性，可用Mallory和Masson三色染色法進(jìn)行鑒別。結(jié)締組織復(fù)合染色Masson氏染色時膠原纖維呈藍(lán)色(被苯胺藍(lán)所染)或綠色（被亮綠所染），肌纖維呈紅色(被酸性品紅和麗春紅所染)，這與陰離子染料分子的大小和組織的滲透性有關(guān)。如已固定的組織用一系列陰離子水溶性染料先后或混合染色，則可發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞被最小分子的陰離子染料著染，肌纖維與胞質(zhì)被中等大小的陰離子染料著染，而膠原纖維則被大分子的陰離子染料著染。由此說明了紅細(xì)胞對陰離子染料的滲透性最小，肌纖維與胞質(zhì)次之，而膠原纖維具有最大的滲透性。染色原理膠原纖維(collagenfiber)是結(jié)締組織中的三種纖維之一，

分布最為廣泛，

其纖維主要是由纖維母細(xì)胞產(chǎn)生的一種膠原蛋白絞鏈而成。此種纖維在HE染色中顯示淺紅色，

粗細(xì)不等，

難以與其它纖維相區(qū)別，只有經(jīng)過特殊的染色法，才能夠鑒別。膠原纖維分子中含有堿性氨基酸，

能夠與酸性染料進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)，

由于酸性染料具有不同程度的擴(kuò)散性，

小分子染料擴(kuò)散性高(如苦味酸)就容易進(jìn)入結(jié)構(gòu)致密的狹孔組織(如肌纖維)的間隙，

對擴(kuò)散性低的大分子染料(如麗春紅)則只能進(jìn)入結(jié)締疏松的寬孔組織（膠原纖維）的間隙。膠原纖維染色，常用于鑒定腫瘤的組織來源于纖維細(xì)胞、心肌疤痕灶、早期肝硬化、以及其它組織纖維增加或減少等。膠原纖維染色網(wǎng)狀纖維(Reticularfiber)是網(wǎng)狀結(jié)締組織內(nèi)的一種纖維，由交錯排列纖細(xì)的纖維組成，還有大量堆集時則形成致密的網(wǎng)狀，

故有網(wǎng)狀纖維之稱。若用銀氨溶液浸染能使纖維變成黑色，

故又稱為嗜銀纖維(argentaffinfibres)。其染色的基本原理是由于組織蛋白質(zhì)與銀化合物的結(jié)合，

再經(jīng)過甲醛還原成為金屬銀而沉淀于組織內(nèi)及表面的物質(zhì)。·網(wǎng)狀纖維的應(yīng)用非常廣泛，

常用于區(qū)別上皮性還是非上皮性來源的惡性腫瘤、血管內(nèi)皮組胞癌或外皮細(xì)胞瘤、惡性淋巴瘤或組織細(xì)胞肉瘤、骨異質(zhì)增生或骨化性纖維瘤、粘液纖維瘤與粘液肉瘤、鑒別腦膜瘤與星形細(xì)胞瘤，還可用于判斷肝組織的網(wǎng)狀支架塌陷破壞或增生的情況。網(wǎng)狀纖維染色彈性纖維(elasticfiber)通常被認(rèn)為是一種凝膠，由隨機(jī)交聯(lián)的盤繞肽鏈組成，其主要成分是由豐富的二硫鍵(R_s_s_R)組成的糖蛋白，所以又稱為彈性蛋白，強(qiáng)嗜酸性易與染色液中的堿基結(jié)合。呈平行排列而且也很緊密，在鏡下具有折光性，經(jīng)過特殊染色，就很容易被辨認(rèn)。彈性纖維常用于鑒別皮膚組織增殖和變化、

呼吸道的支氣管擴(kuò)張、老年性肺氣腫的纖維斷裂、變性或萎縮、心血管的心內(nèi)膜彈性纖維異常增殖和高血壓小動脈的異常增生、

動脈粥樣硬化彈性纖維的崩解、斷裂；

腎臟組織和腫瘤組織中的纖維病變，

以及各種實驗動物組織中的血管壁纖維損害和增生情況。彈性纖維染色結(jié)締組織染色肌肉組織染色糖類染色色素類染色病理內(nèi)源性沉著物染色病原微生物染色內(nèi)分泌細(xì)胞染色特殊染色肌組織主要由肌細(xì)胞構(gòu)成，根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能，又分為骨骼肌、心肌和平滑肌，而前二者的肌纖維含有橫紋，所以又稱為橫紋肌，其基本病變主要是指肌纖維的變性、壞死及修復(fù)等。肌組織的特殊染色常用于腫瘤方面的鑒別。包括橫紋肌瘤、橫紋肌肉瘤和含有成肌細(xì)胞的混合性中胚葉腫瘤等，

其共同的病理變化特點是腫瘤細(xì)胞中可出現(xiàn)橫紋肌纖維，用磷鎢酸蘇木素(pTAH)即可顯示肌纖維成分。

橫紋肌組織染色結(jié)締組織染色肌肉組織染色糖類染色色素類染色病理內(nèi)源性沉著物染色病原微生物染色內(nèi)分泌細(xì)胞染色特殊染色糖原系由多糖衍化而來，是單純的多糖。在正常的動物和人體的肝臟、心肌和骨骼肌含量最多，存在于細(xì)胞漿內(nèi)。糖原能溶于水，在酶的作用下很容易分解為葡萄糖，而葡萄糖更易溶于水，當(dāng)機(jī)體組織死亡后其糖原又很快分解為葡萄糖，根據(jù)糖原的特性，必須及時取新鮮組織用特殊固定液才能把糖原保存下來。糖原染色應(yīng)用于鑒別空泡狀變性，證明石蠟切片HE中所出現(xiàn)的細(xì)胞漿內(nèi)空泡是否糖原被水溶性固定液溶解，還是脂肪被脂溶劑溶解，可進(jìn)行糖原染色；糖原累積疾病和糖尿病器官組織細(xì)胞中也有糖原顆粒沉著；腫瘤組織中的肝細(xì)胞癌；橫紋肌、平滑肌和軟骨肉瘤、汗腺瘤的化學(xué)感受器瘤等均有糖原的存在。糖類染色-糖原染色在動物體和人體中的各種腺體及許多器官組織細(xì)胞都能制造或分泌粘液物質(zhì)，

由于物質(zhì)中含酸基的不同，而又分為中性粘液物質(zhì)(neutralmucosubstanes)、酸性粘液物質(zhì)(acidmucosubstanes)，和混合粘液物質(zhì)(mixedmucosubstanes)，也可稱為中性粘多糖、酸性粘多糖和混合性粘多糖。中性粘多糖內(nèi)含有氨基己糖和游離的己糖基，但不含有任何酸根，故稱為中性粘多糖；酸性粘多糖中含有氨基己糖，并含有各種酸根成分稱為酸性粘多糖。混合性多糖是顯示中性與酸性之間的另一種不同的混合性物質(zhì)。粘液物質(zhì)用于一般粘液性疾病的鑒別診斷；

腫瘤方面的胃癌，粘液瘤和粘液肉瘤、軟骨粘液樣纖維瘤，橫紋肌肉瘤等。糖類染色-粘液物質(zhì)(粘多糖)染色結(jié)締組織染色肌肉組織染色糖類染色色素類染色病理內(nèi)源性沉著物染色病原微生物染色內(nèi)分泌細(xì)胞染色特殊染色在組織切片中?？梢姷礁鞣N不同的色素，有些是體內(nèi)產(chǎn)生，均屬細(xì)胞代謝的正常產(chǎn)物，有些是在病理情況下過量產(chǎn)生或沉著于異常部位的組織中，有些是外生性色素及沉著物，還有是人為色素及沉著物。無論是從體內(nèi)產(chǎn)生、體外進(jìn)入或人為因素所引起存在的物質(zhì)等，都可以被稱為色素。黑色素是一種正常的色素，黑色素是穩(wěn)定的物質(zhì)，不溶于水和有機(jī)溶劑，在強(qiáng)堿中可以被溶解，也可以通過強(qiáng)氧化劑進(jìn)行脫色，黑色素細(xì)胞中含有硫和酪氨酸酶成分能夠與硫酸亞鐵和鐵氰化鉀的離子進(jìn)行結(jié)合，黑色素具有強(qiáng)的還原性，能夠?qū)y液內(nèi)的銀離子還原成金屬銀而呈黑色。黑色素的特殊染色常用于鑒別惡性黑色素瘤、淋巴結(jié)腫瘤、色素性神經(jīng)瘤、皮膚性淋巴結(jié)炎、紅斑狼瘡、神經(jīng)性黑色素病等。色素類染色結(jié)締組織染色肌肉組織染色糖類染色色素類染色病理內(nèi)源性沉著物染色病原微生物染色內(nèi)分泌細(xì)胞染色特殊染色一、纖維素染色纖維素(fibrin)又稱為纖維蛋白，

它是存在于血液內(nèi)的纖維蛋白原分子聚合而形成的特殊蛋白質(zhì)。在病理狀態(tài)下，

血管內(nèi)和血管外以及其它組織中，均可見到纖維素沉著物。常見于炎癥滲出性改變，

彌漫性血管內(nèi)凝血

、高血壓的小血管壁和一些膠原性疾病的疏松纖維，腎小球的毛細(xì)血管腔內(nèi)和基底膜等均有纖維素的存在。纖維素是特殊的蛋白，在形態(tài)上可呈滴狀及團(tuán)塊狀樣物質(zhì)。它能夠與嗜酸性染料進(jìn)行結(jié)合，HE染色呈紅色，但是顯示的結(jié)果較差，辨別較困難，因此可用甲紫、MSB和PAS等染色法以顯示纖維素成分。病理內(nèi)源性沉著物染色二、淀粉樣物質(zhì)淀粉樣物質(zhì)是一種嗜伊紅性物質(zhì)，其性質(zhì)一般認(rèn)為屬于糖蛋白成分。組織中出現(xiàn)此種物質(zhì)稱為淀粉樣變性，可分為原發(fā)性和繼發(fā)性病變，其分布廣泛，以浸潤的形式多見于肝臟、脾臟、腎臟和腎上腺等，也可見于心臟、神經(jīng)、腸壁、皮膚，還常用于腫瘤的診斷和鑒別。淀粉樣物質(zhì)的鑒別常用剛果紅染色，在偏光顯微鏡下呈現(xiàn)出特殊的折射。病理內(nèi)源性沉著物染色結(jié)締組織染色肌肉組織染色糖類染色色素類染色病理內(nèi)源性沉著物染色病原微生物染色內(nèi)分泌細(xì)胞染色特殊染色微生物(microorganisms)的基本形態(tài)可分為細(xì)胞形態(tài)和非細(xì)胞形態(tài)。在細(xì)胞形態(tài)中，

有致病作用真核微生物的真菌等，原核微生物的細(xì)菌和螺旋體等。在非細(xì)胞形態(tài)中的病毒有包涵體和乙肝炎表面抗原等，這些物質(zhì)經(jīng)過組織切片和染色，

都能夠在光鏡下觀察到結(jié)果。病原微生物染色真菌(fungus)又稱為霉菌，其種類較多，常見的致病菌如毛霉菌、曲霉菌、新型隱球菌、放線菌和白色念球菌等，近年來由于抗生素、激素、化療和免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，使人體的抵抗力低下，導(dǎo)致了發(fā)病率增高，因此病理診斷的范圍較為廣泛，這就更需要提高準(zhǔn)確的染色效果。霉菌的基本結(jié)構(gòu)成分是含有較多的粘多糖和蛋白質(zhì)。這些物質(zhì)經(jīng)過適量的氧化劑和通過一定的氧化時間，就能促使糖類結(jié)構(gòu)分子的乙二醇或氨羥基的碳鍵斷開，生成醛類化合物，然后使暴露的游離基與可靠的Schiff(品紅醛試劑)和MethenamineSilVer（六胺銀）試劑進(jìn)行結(jié)合，再用對應(yīng)的復(fù)染劑來增強(qiáng)組織結(jié)構(gòu)成分的對比度，進(jìn)而對其做出鑒定。一、真菌染色細(xì)菌(bacteria)是常見的一類病原微生物，其體積較小，一般需放大到百倍(油鏡)以上才能看到，根據(jù)特殊染色方法可以把細(xì)菌分為一般細(xì)菌和抗酸桿菌兩大類。一般細(xì)菌常用的方法是選用革蘭氏等染色法，所用的堿性染料在與細(xì)菌的核糖酸鎂鹽一蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合，因此革蘭陽性菌攝取結(jié)晶紫多且較牢固，其結(jié)果呈藍(lán)色或紫色，而革蘭陰性菌缺乏或含核糖酸鎂極少，即易被酸性復(fù)紅和中性紅等染成紅色。

.抗酸桿菌(acidfastbacteria)體內(nèi)含有脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和多糖類并由糖脂形成一個蠟質(zhì)的外殼，能與苯酚堿性復(fù)紅結(jié)合成復(fù)合物，這種復(fù)合物能抵抗酸的脫色，

所以稱為抗酸桿菌。二、細(xì)菌染色病毒是最小的非細(xì)胞型微生物，當(dāng)病毒引起疾病的時候，其感染的細(xì)胞內(nèi)可以形成包涵體，而存在于細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)，但有時胞漿和胞核內(nèi)同時可見到包涵體，在一般的情況下，RNA病毒形成胞漿內(nèi)包涵體，DNA病毒形成核內(nèi)包涵體。包涵體病毒在常規(guī)的HE染色中，對于比較典型的可以見到，形態(tài)大小與紅細(xì)胞相似，胞核一般呈嗜酸性，周圍有透明暈，胞漿呈嗜酸性，少部分呈嗜堿性。但是對于皰疹病毒感染時的核內(nèi)包涵體和麻疹病毒包涵體，須通過特殊染色方法才能得到證明。三、病毒包涵體染色結(jié)締組織染色肌肉組織染色糖類染色色素類染色病理內(nèi)源性沉著物染色病原微生物染色內(nèi)分泌細(xì)胞染色特殊染色一、彌散神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞染色(diffuseneuroendocrinesystem，DNES)彌散神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的細(xì)胞具有細(xì)胞化學(xué)、病理和超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)特點。從生物化學(xué)方面而言，這些內(nèi)分泌細(xì)胞都能合成和分泌胺，而且細(xì)胞是通過攝取胺前體(氨基酸)經(jīng)脫羧后產(chǎn)生胺的。隨著對細(xì)胞研究的深入，發(fā)現(xiàn)其不僅產(chǎn)生胺，而且還產(chǎn)生肽。DNES的組成至今已有40多種細(xì)胞，分為中樞和周圍兩大部分。中樞部分包括下丘腦一垂體軸的細(xì)胞和松果體細(xì)胞。周圍部分包括胃、腸、胰、呼吸道和泌尿生殖道的內(nèi)分泌細(xì)胞，以及甲狀腺濾泡旁組胞，甲狀旁腺細(xì)胞，嗜鉻細(xì)胞，頸動脈體細(xì)胞等。日前證明這些細(xì)胞的染色方法較多，但常用的是使用親銀和嗜銀反應(yīng)來鑒別細(xì)胞漿中的銀顆粒。內(nèi)分泌細(xì)胞染色腎上腺的髓質(zhì)中含有嗜鉻細(xì)胞，這種細(xì)胞的形態(tài)不一，成多形性，成