復(fù)方酮康唑乳膏的安全性評價

復(fù)方酮康唑乳膏的安全性評價

氨基溶膠的主要成分是咪唑，是第二代抗真菌藥物。這是一種高效、光譜的抗真菌藥物。它可以抑制真菌膜的麥角醇生物合成，影響膜的滲透性，抑制其生長。其對皮膚癬菌如毛發(fā)癬菌屬、表皮癬菌屬、小孢子菌屬及酵母菌如念珠菌等具有抑制作用,可用于手癬、足癬、體癬、股癬、花斑癬及皮膚念珠菌病。酮康唑口服劑型雖在胃酸內(nèi)溶解易吸收。但吸收后分布廣泛,血藥濃度波動較大,會帶來許多如惡心、嘔吐、腹痛、頭痛等不良反應(yīng),偶有肝損害及過敏反應(yīng)。近年來根據(jù)臨床給藥途徑與現(xiàn)代制藥方法制成了乳膏劑、洗劑、搽劑、滴耳劑、噴膜劑等酮康唑的外用劑型。多種劑型減輕了酮康唑的不良反應(yīng),擴(kuò)大了臨床用藥范圍,帶來了給藥的靈活性。乳膏劑為皮膚科最常用的劑型,酮康唑加入乳膏基質(zhì)中,可充分發(fā)揮其在皮膚表面的抑菌作用,并具有潤滑、保護(hù)皮膚的作用。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)《新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))》提供的方法進(jìn)行復(fù)方酮康唑乳膏的家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)及白色豚鼠皮膚過敏性實(shí)驗(yàn)。通過觀察家兔完整及破損皮膚多次涂敷復(fù)方酮康唑乳膏后的皮膚刺激反應(yīng)和豚鼠皮膚重復(fù)涂敷復(fù)方酮康唑乳膏后機(jī)體免疫系統(tǒng)在皮膚上的表現(xiàn)情況,評價該制劑的安全性,為其臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。1實(shí)驗(yàn)材料1.1致敏劑、儀器和儀器復(fù)方酮康唑乳膏、復(fù)方酮康唑乳膏基質(zhì),江西源生狼和生物科技有限公司試制,批號:20090801,規(guī)格15g/支;碘伏,購自江西草珊瑚消毒用品有限公司,批號:20090808;致敏劑2,4-二硝基氯苯(臨用時用芝麻油配制成l%的致敏濃度和0.1%的激發(fā)濃度),天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所,批號:20091112。電子天平,福州華志科學(xué)儀器有限公司;剪毛剪,5號針頭,繃帶等。1.2實(shí)驗(yàn)動物科技普通健康家兔8只,體重1.8~2.2kg,雌雄各半;健康豚鼠30只,體重250~300g,雌雄各半,均購自長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動物科技服務(wù)部,許可證號:SCXK(湘)2009-0012。實(shí)驗(yàn)期間將動物置于恒溫、恒濕空調(diào)實(shí)驗(yàn)室分籠喂養(yǎng),自由進(jìn)食、飲水、適應(yīng)環(huán)境3天后方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2實(shí)驗(yàn)方法2.14-酮苯基醇乳膏的皮膚刺激性試驗(yàn)2.1.1皮膚主動保護(hù)的測試8只健康家兔按體重、性別隨機(jī)分為兩組,即完整皮膚和破損皮膚組,每組4只。于給藥前24h將各組家兔背部脊柱兩側(cè)用剪毛剪對稱去毛,去毛面積左右各5cm×5cm。破損皮膚組脫毛部位先用碘伏消毒,再用無菌針頭劃“﹟”字,以輕度滲血為度。實(shí)驗(yàn)采用同體左右側(cè)自身對照法,將受試物按0.5g/只均勻涂布于各組家兔一側(cè)已去毛的皮膚上,再用一層玻璃紙或類似物覆蓋,再用無刺激性膠布和繃帶加以固定,單籠飼養(yǎng)。另一側(cè)涂布同樣劑量的乳膏基質(zhì)作對照。涂藥后貼敷時間至少4h。貼敷結(jié)束后,除去受試物并用溫水清潔給藥部位。每天同一方法,同一時間給藥1次,持續(xù)給藥7d。2.1.2皮膚主動貼實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)期間于自然光線下觀察皮膚反應(yīng)。在每次去除受試物后1h以及再次涂敷前觀察及記錄皮膚紅斑和水腫、涂敷部位是否有色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄等情況及其發(fā)生時間和消退時間。末次貼敷后,在去除受試物后1h、24h、48h和72h肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫等情況。按表1給出的評分標(biāo)準(zhǔn)對皮膚紅斑和水腫進(jìn)行評分;按表2進(jìn)行皮膚刺激性強(qiáng)度評價。2.2單尾醇醇乳膏皮膚過敏實(shí)驗(yàn)2.2.1給藥、給藥與造模將30只豚鼠按體重、性別隨機(jī)分為3組,每組10只。第1組為給藥組,給復(fù)方酮康唑乳膏0.2g;第2組空白對照組,給空白基質(zhì)0.2g;第3組為陽性對照組,給1%2,4一二硝基氯苯0.2mL。給藥前24h將各組豚鼠背部脊柱兩側(cè)用剪毛剪對稱去毛,去毛面積左右各3cm×3cm。給藥前修剪受試部位殘存毛發(fā),在各組動物左側(cè)去毛區(qū)分別涂以相應(yīng)受試物致敏。為確保受試藥物與皮膚接觸達(dá)到有效停留時間,給藥后以一層玻璃紙和兩層紗布覆蓋,再用無刺激性膠布封閉、固定,持續(xù)6h,第7天和第14天以同樣方法重復(fù)給藥1次。第28天激發(fā)給藥,用上述同樣方法將相應(yīng)受試物(陽性對照組改用0.1%2,4-二硝基氯苯激發(fā))分別涂在各組動物背部右側(cè)脫毛區(qū),同法覆蓋、固定6h。貼敷結(jié)束后,除去受試物并用溫水清潔給藥部位。2.2.2皮膚主動光催化酶活性評價實(shí)驗(yàn)期間于自然光線下觀察皮膚反應(yīng)。除去受試物后即刻和第24h、48h、7h觀察和記錄局部皮膚紅斑、水腫情況。按表4對皮膚紅斑和水腫進(jìn)行評分并統(tǒng)計反應(yīng)平均值和致敏率;按表5的致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)判斷致敏性。同時密切觀察動物是否出現(xiàn)有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重全身過敏反應(yīng)。3從大鼠皮膚和破損皮膚主動因素看實(shí)驗(yàn)結(jié)果:家兔完整皮膚和破損皮膚接觸相同劑量的復(fù)方酮康唑乳膏和基質(zhì)后不同時間,動物均未見局部紅斑和水腫及色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄等情況,同體左右側(cè)比較未見異常反應(yīng),見表3。本實(shí)驗(yàn)表明復(fù)方酮康唑乳膏對家兔正常皮膚和破損皮膚均無刺激性。試驗(yàn)結(jié)果:復(fù)方酮康唑乳膏和基質(zhì)在激發(fā)接觸后6h、24h、48h、72h未見豚鼠有皮膚紅斑和水腫、哮喘、站立不穩(wěn)、休克等過敏反應(yīng),致敏率為0。各組動物活動、攝食及體重均未見異常。而陽性對照組豚鼠皮膚在激發(fā)接觸后6h、24h、48h、72h均出現(xiàn)明顯的紅斑和水腫。見表6。4皮膚水腫造成的術(shù)后觀察在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(1)給藥方法問題:家兔皮膚刺激實(shí)驗(yàn)采用的給藥方法是每日貼敷。為確保受試藥物與皮膚接觸達(dá)到有效停留時間,一次貼敷至少4h,不能過長,否則會影響家兔皮膚的透氣,導(dǎo)致皮膚局部水腫壞死。(2)實(shí)驗(yàn)中需要注意的關(guān)鍵問題:破損皮膚去毛后先用碘伏消毒,再用無菌針頭劃“﹟”字,以輕度滲血為度。為防止動物破壞貼敷部位,使藥物不能與受試部位充分接觸,涂藥后要用無刺激性膠布和繃帶等固定并