木姜葉柯總黃酮對大小鼠血糖和糖耐量的影響

木姜葉柯總黃酮對大小鼠血糖和糖耐量的影響

木姜葉科植物是水生百合科植物的李遠(yuǎn)東（hace）葉片的干燥葉子，也被稱為多穗科植物科多科又稱多穗科。主要分布在廣東省、云南、湖南、廣東等山區(qū)茂密的森林中。其二氫查耳酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)高達(dá)12.6%,主要是根皮苷(phlorizin)和三葉苷(trilobatin)。Dong等用大孔樹脂等一步分離得到質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.87%的根皮苷,根皮苷可快速降低血糖,對預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥具有重要意義,同時能逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗?fàn)顟B(tài),根皮苷的苷元(根皮素)可促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化和脂肪細(xì)胞因子(adiponectin)的表達(dá),提高胰島素敏感性。三葉苷對腸道根皮苷水解酶具有抑制作用,可以提高根皮苷的生物利用度。本課題制備的木姜葉柯總黃酮包含根皮苷、天然三葉苷和根皮苷異構(gòu)化生成的三葉苷。因此,該總黃酮是天然的藥動學(xué)協(xié)同作用的良好降糖。處方。本文報道該木姜葉柯總黃酮對高血糖模型大小鼠血糖和糖耐量的影響1實驗材料1.1木姜葉柯的制備廣西平果縣海城鄉(xiāng)產(chǎn)的木姜葉柯經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院植物分類學(xué)教授方鼎先生鑒定為木姜葉柯Lithocarpuslitseifolius(Hance)Chun干燥葉。取木姜葉柯經(jīng)乙醇回流熱提,聚酰胺吸附,洗脫液濃縮,真空干燥,得到棕黃色木姜葉柯總黃酮,質(zhì)量分?jǐn)?shù)88%,根皮苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)75%。優(yōu)降糖,批號20090125,天津太平洋制藥有限公司出品。血糖測定試劑盒(葡萄糖氧化酶法),北京利德曼生化技術(shù)有限公司產(chǎn)品。1.2實驗設(shè)備AMS—18A全自動生化分析儀,張家口奧普森科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品。1.3小鼠、小鼠體質(zhì)量KK/Upj-Ay/J小鼠50只,3月齡,體質(zhì)量35~45g,雌雄各半,具有高血糖、高胰島素、葡萄糖耐受不良特征,合格證號00080269,北京華阜康生物科技股份有限公司提供,許可證號SCXK11-00-0006。7~9周齡雄性昆明種小鼠,體質(zhì)量26~30g,合格證號0001326。7~8周齡Wistar雄性大鼠,體質(zhì)量180~200g,SPF級,合格證號0001238,均由廣西實驗動物中心提供,許可證號:SCXK桂2009-0002。2方法2.1模型大鼠木姜葉柯總黃酮的測定取空腹血糖在11.0mmol/L以上的KK/Upj-Ay/J小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為5組,每組10只,即模型組,優(yōu)降糖(3mg/kg)陽性對照組,木姜葉柯總黃酮低、中、高劑量(50、100、200mg/kg)組。模型組每天ig蒸餾水1次,給藥組每天ig給藥1次,連續(xù)4周,末次給藥前12h禁食,末次給藥后1.5h從眼眶取血測定血糖。2.2模型小鼠血糖水平的測定取昆明種小鼠70只,留10只作正常對照組,其余按體質(zhì)量一次iv四氧嘧啶80mg/kg,造高血糖動物模型,7d后測空腹血糖值。選取空腹血糖值在12.0mmol/L以上的小鼠50只,按血糖水平均勻分為5組:模型組,優(yōu)降糖(3mg/kg)陽性對照組,木姜葉柯總黃酮低、中、高劑量(50、100、200mg/kg)組,每組10只。除正常對照組和模型組ig蒸餾水外,其余4個給藥組每天給藥1次,給藥容積均為10mL/kg,連續(xù)7d,末次給藥后1.5h,眼內(nèi)眥取血,分離血清,用全自動生化分析儀測血清葡萄糖。2.3單次給藥后大鼠血糖測定造模過程及分組同“2.2”。分組后,各組小鼠禁食3~5h后,正常對照組和模型組ig蒸餾水,4個給藥組ig給予相應(yīng)劑量的優(yōu)降糖和木姜葉柯總黃酮,20min后,各組ig給予葡萄糖溶液2.0g/kg,然后測定0、0.5、2h的血糖值,計算各個動物血糖曲線下面積[AUC=0.25×(0h血糖值+4×0.5h血糖值+3×2h血糖值)]。2.4模型大鼠血糖水平取Wistar雄性大鼠70只,留10只作正常對照組,其余按體質(zhì)量iv鏈脲菌素80mg/kg,造高血糖動物模型,7d后測空腹血糖值,選取空腹血糖值在12.0mmol/L以上的大鼠50只,按血糖水平均勻分為5組:模型組,優(yōu)降糖(1.5mg/kg)陽性對照組,木姜葉柯總黃酮低、中、高劑量(30、60、120mg/kg)組,每組10只。除正常對照組和模型組ig蒸餾水外,其余4個給藥組動物分別按體質(zhì)量ig給予相應(yīng)劑量的優(yōu)降糖和木姜葉柯總黃酮,給藥容積均為10mL/kg,每天給藥1次,連給7d,末次給藥后1.5h,眼內(nèi)眥取血,分離血清,按照試劑盒說明書輸入?yún)?shù),用全自動生化分析儀測血清葡萄糖。2.5模型總血糖含量的測定造模過程及分組同“2.4”,分組后各組大鼠禁食3~5h,正常對照組和模型組ig給予蒸餾水,優(yōu)降糖和木姜葉柯總黃酮組分別ig給予相應(yīng)劑量的優(yōu)降糖和木姜葉柯總黃酮,20min后,各組ig給予葡萄糖溶液2.0g/kg,然后測定0、0.5、2h的血糖值,計算各個動物血糖曲線下面積。2.6顯著性分析采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件,數(shù)據(jù)均以表示。采用方差檢驗,方差齊性,采用LSD法進(jìn)行多組間差異的顯著性分析;方差不齊用Tamhane法分析。3結(jié)果3.1木姜與總黃酮的影響是遺傳誘導(dǎo)小鼠空腹血糖木姜葉柯總黃酮低、中、高劑量組和優(yōu)降糖組的空腹血糖均低于模型組,差異具有顯著性(P<0.05、0.001),見表1。3.2比較兩組的顯著性木姜葉柯總黃酮低、中、高劑量組和優(yōu)降糖組的血糖均低于模型組,差異具有顯著性(P<0.05、0.001);木姜葉柯總黃酮低、中、高劑量組和優(yōu)降糖組的血糖曲線下面積均低于模型組,差異具有顯著性(P<0.05、0.001),見表2。3.3比較兩組的顯著性木姜葉柯總黃酮低、中、高劑量組和優(yōu)降糖組的血糖均低于模型組,差異具有顯著性(P<0.001);木姜葉柯總黃酮低、中、高劑量組和優(yōu)降糖組的血糖曲線下面積均低于模型組,差異具有顯著性(P<0.05、0.01、0.001),見表3。4木姜葉柯總黃酮對小鼠血糖的影響胰島素抵抗和糖尿病并發(fā)癥與長期的高血糖有關(guān),根皮苷一方面可以阻斷腸道葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白,抑制葡萄糖的吸收,減少血糖來源;另一方面又可阻斷腎小管葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白,抑制腎小管對葡萄糖的重吸收,促進(jìn)糖排泄,降低血糖,從而減少高血糖的毒性反應(yīng)(糖尿病并發(fā)癥),使胰島素抵抗大鼠模型的糖耐量和胰島素敏感性恢復(fù)正常。本課題制備的木姜葉柯總黃酮對遺傳性小鼠高血糖、四氧嘧啶誘發(fā)的小鼠高血糖均顯示出降低空腹血糖的作用,也可提高高血糖小鼠的糖耐量;對鏈脲菌素誘發(fā)的大鼠高血糖模型顯示出降低空腹血糖作用,對高血糖大鼠糖耐量亦有提高作用。這種作用可能與其根皮苷有關(guān),根皮苷水解產(chǎn)生的根皮素(其苷元)具有增強(qiáng)脂肪細(xì)胞的分化和脂肪細(xì)胞因子(adiponectin