色譜分析技術(shù)-高效液相色譜儀的基本操作（藥檢儀器課件）

高效液相色譜儀操作規(guī)范高效液相色譜法高壓高速高效應(yīng)用范圍廣國家藥品質(zhì)量標準高效液相色譜儀規(guī)范操作學習目標本講小結(jié)思考題高效液相色譜儀操作流程及關(guān)鍵點謝謝觀看泵pump單元泵二元泵四元泵結(jié)構(gòu)與工作原理二元泵兩個泵頭兩種溶劑精度高混合比例準確四元泵四元比例閥四種溶劑靈活方便混合精度稍差梯度洗脫曲線梯度洗脫溶劑過濾器管道過濾器管道過濾器脈動阻尼器高效液相色譜法高壓高速高效應(yīng)用范圍廣結(jié)構(gòu)與分類1本講小結(jié)要求與注意事項2單元泵二元泵四元泵在高壓下工作

輸出流量穩(wěn)定

重復性高不能有任何顆粒進入思考題泵的種類與特點謝謝觀看進樣器injector進樣示意停流進樣裝置手動進樣器學習目標自動進樣器手動進樣器手動進樣器手動進樣器手動進樣器扳閥處于load與inject間阻死液流壓力驟增沖擊色譜柱頭Rheodyne公司進樣閥Rheodyne7725i手動進樣器微量注射器平頭微量注射器微量注射器微量注射器自動進樣器拉式推式集成自動進樣器-拉式自動進樣器-拉式設(shè)計簡單樣品殘存難于清洗交叉污染拉式自動進樣器自動進樣器-推式自動進樣器-推式推式自動進樣器管路緊湊無樣品浪費減少交叉污染大多采用自動進樣器-集成自動進樣器-集成自動進樣器-集成集成自動進樣器無樣品殘留需高壓密封增加成本發(fā)展快高效液相色譜法高壓高速高效應(yīng)用范圍廣種類與原理1本講小結(jié)要求與注意事項2手動進樣器：7725i+微量注射器自動進樣器：拉式推式集成體積準確重復性好密封性好死體積小進樣前過濾取樣準確思考題項目六通閥拉式推式集成手動/自動取樣準確度結(jié)果精密度樣品殘留更換定量環(huán)謝謝觀看色譜柱column色譜柱正常色譜圖拖尾峰未完全分離出峰順序改變常見固定相學習目標色譜柱規(guī)格固定相基質(zhì)無機基質(zhì)-硅膠、氧化鋁聚合物基質(zhì)固定相基質(zhì)無機基質(zhì)-硅膠、氧化鋁聚合物基質(zhì)化學鍵合正相反相離子交換親和固定相基質(zhì)無機基質(zhì)-硅膠、氧化鋁聚合物基質(zhì)正相反相離子交換親和液態(tài)一定厚度液體易流失柱效下降化學鍵合固定相固定相固定相固定相柱頭塌陷峰拖尾色譜柱內(nèi)徑（i.d.）：1.0mm、2.1mm、3.0mm、4.6mm色譜柱內(nèi)徑（i.d.）：1.0mm、2.1mm、3.0mm、4.6mm長度（length）：10-25cm色譜柱色譜柱常用色譜柱規(guī)格：15cm*4.6mm、25cm*4.6mm5cm*2.1mm、10cm*2.1mm10cm*3.0mm色譜柱色譜柱收集雜質(zhì)延長壽命色譜柱色譜柱越長

分離效果越好耗時

溶劑消耗量大色譜柱越粗

載樣量越大影響分離效果色譜柱連接管線長度不夠空腔or死體積峰展寬色譜柱連接管線過長漏液管線過短峰展寬柱溫箱改變分離效率分析高分子化合物分析黏度大樣品分析生物活性樣品高效液相色譜法高壓高速高效應(yīng)用范圍廣類型商品名稱生產(chǎn)廠商全多孔硅膠YQG北京化學試劑研究所YQG-1青島海洋化工廠ZorbaxSILDuPont（美）DG1-4天津化學試劑二廠PorasilA-DWaters（美）種類與規(guī)格1本講小結(jié)對分離效果影響2十八烷基硅烷鍵合硅膠C18粒徑2-10μm內(nèi)徑：1.0、2.1、3.0、4.6mm長度：10-25cm固定相裝填均勻緊密管路與色譜柱連接緊密思考題謝謝觀看色譜過程與基本概念菊粉、玻璃柱、石油醚作用與名稱學習目標色譜過程色譜過程分離色譜過程2.流動相-流動，氣態(tài)液態(tài)

石油醚3.固定相-固定的填充物菊粉色譜過程4.玻璃柱-裝填固定相

實現(xiàn)混合物分離

不銹鋼-色譜柱色譜過程1.混合試樣5.檢測器色譜過程t0色譜過程t1-t4色譜過程色譜過程色譜過程色譜過程色譜圖常用基本概念時間電信號強度色譜峰基線色譜圖常用基本概念W

峰寬通過色譜峰兩側(cè)拐點做切線，在基線上所截得的距離常用基本概念W

h/2

半峰寬峰高一半處的峰寬反映了色譜柱或所選色譜條件的好壞常用基本概念t0

死時間不被固定相保留的組分從進樣到其在柱后出現(xiàn)濃度極大時的時間間隔常用基本概念tR

保留時間從進樣開始到某組分的色譜峰頂點的時間間隔基本定性參數(shù)tR

調(diào)整保留時間保留時間減去死時間常用基本概念‘常用基本概念A

峰面積色譜峰與基線間包圍的面積常用基本概念h

峰高色譜峰頂點至基線之間的垂直距離基本定量參數(shù)常用基本概念分配系數(shù)K

在固定相和流動相中的濃度之比容量因子

k在固定相和流動相中的質(zhì)量之比一定溫度和壓力下組分在兩相中達到分配平衡后色譜法分離效能高應(yīng)用范圍廣靈敏度