兔腦磷脂抗炎免疫藥理研究

兔腦磷脂抗炎免疫藥理研究

動(dòng)物飼養(yǎng)的本質(zhì)是務(wù)夫ricu家蠶。近年證明兔腦制劑有促凝血、促血小板增生和抗50Co輻射所致血小板減少等功能。臨床試用于血小板減少性出血和外用止血療效顯著。本文研究了兔腦磷脂的抗炎免疫藥理作用。1樣品與藥物的配制新鮮兔腦剔除腦膜和血塊,勻漿后,用丙酮脫水去膽固醇,再用乙醚反復(fù)提取得兔腦磷脂(RBP),RBP經(jīng)冷熱乙醇分離得卵磷脂(L)和腦磷脂(C)。RBP、L和C分別以乙醇制成乳劑供實(shí)驗(yàn)用。地塞米松(DX):河北秦皇島制藥廠,批號(hào):900205。強(qiáng)的松龍(HP):浙江仙居制藥廠,批號(hào):9107175。左旋咪唑(LMS):山東莒南制藥廠,批號(hào):910902。cGMP藥盒和3H-TdR:中國科學(xué)院原子能研究所產(chǎn)。LACA小鼠,BALA/C小鼠,20士2g♂♀兼用,Wistar大鼠,180±10g♂。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由濰坊醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2方法和結(jié)果2.1關(guān)于炎癥模型的影響2.1.1l-1角叉菜膠0.0.0.2ml時(shí)取健康大鼠60只,按附圖分6組,給藥后1h,參考文獻(xiàn)方法,測定各鼠sc10g·L-1角叉菜膠0.1ml前與1、2、4和5h足爪容積。結(jié)果表明,不同劑量的RBP及L、C、DX均顯示明顯抗角叉菜膠性炎癥作用(P<0.05或P<0.01),RBP抗角叉菜膠性炎癥作用依劑量增加而增強(qiáng)(P<0.01)。2.1.2皮膚染色面積和染料滲出量測定大鼠40只,依表1分組,ip各藥lh后,參考文獻(xiàn)方法,iv10g·L-1曲利本藍(lán)2ml·kg-1,并sc組胺0.1mg·只-1,30min后處死動(dòng)物,測皮膚染色面積和染料滲出量。結(jié)果表明,不同劑量RBP和DX均明顯減少染色面積和染料滲出量(P<0.01)。2.1.3致炎側(cè)耳廓與對(duì)側(cè)耳廓重量差值的測定LACA小鼠40只,分、4組,分別ipNS、2.5mg·kg-1DX,100mg·kg-1和200mg·kg-1RBP1h后,參考文獻(xiàn)方法,測定致炎側(cè)耳廓(█7mm打孔稱重)與對(duì)側(cè)耳廓重量差值,分別為4.60±1.39(x±s),0.80±0.46,2.03±0.76與1.53±0.98mg。結(jié)果表明,DX和不同劑量RBP均明顯減輕小鼠巴豆油性耳廓腫(P<0.01)。2.1.4伊文氏藍(lán)的滲出量小鼠40只,分組與劑量同上,分別scNS,DX,二種劑量RBP,1h后參照文獻(xiàn)方法,測定腹腔液中伊文氏藍(lán)的滲出量,分為4.87±1.73(x±s),1.24±0.96,1.80±0.96和1.59±0.77mg·L-1。結(jié)果表明,二種劑量RBP和DX均明顯減少小鼠腹腔染料的滲出量(P<0.01)。2.1.5肉芽干重的測定大鼠40只,分4組,參考文獻(xiàn)方法,各鼠皮下植入30±1mg滅菌棉球2枚,分別ipNS,2.5mg·kg-1·d-1DX和100、200mg·kg-1·d-1RBP,于d7取出肉芽,按mg·kg-1體重算得肉芽干重,分別為629±221,419±228,705±177與833±299mg·kg-1。結(jié)果表明,DX有減輕肉芽腫作用(P<0.01),但兩種劑量RBP對(duì)肉芽腫干重均無影響(P>0.05)。2.2影響小鼠吞咽細(xì)胞功能2.2.1小鼠碳粒廓清率測定LACA小鼠40只,按表2分組,參考文獻(xiàn)方法,測定小鼠碳粒廓清率。結(jié)果表明,不同劑量RBP和LMS組的廓清指數(shù)K和吞噬系數(shù)α均明顯高于NS組(P<0.01)。2.2.2對(duì)正常小鼠咀嚼功能的影響只,分4組scNS,2.5mg·kg-1·d-1DX,200mg·kg-1·d-1RBP和DX+RBP,4d后按文獻(xiàn)方法測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬百分率(%)和吞噬指數(shù),依次為41.3±3.9,23.3±1.8,88.9±3.1,82.5±2.9和0.43±0.05,0.25±0.02,1.00±0.07,0.92±0.04。結(jié)果表明DX抑制吞噬功能明顯(P<0.01),RBP有提高正常小鼠吞噬功能作用(P<0.01),且RBP還可提高吞噬功能受抑小鼠的吞噬功能,使其達(dá)正常水平之上(P<0.01)。2.3對(duì)小鼠免疫功能的影響B(tài)ALA/C小鼠40只,scNS,im100mg·kg-1·d-1RBP,sc5mg·kg-1·d-1HP,RBP+HP,連續(xù)給藥7d,各組于d3,ip50g·L-1SRBC0.2ml·只-1。2.3.1對(duì)正常小鼠脾重的影響于d9處死小鼠稱各組脾重,結(jié)果見表3。結(jié)果表明,RBP對(duì)正常小鼠脾重?zé)o影響(P>O.05),但RBP可增加免疫受抑小鼠脾重(與HP組比較P<0.05)。2.3.2x+rbp組3h-tdr的cpm值參照文獻(xiàn)方法,測得NS,RBP,DX和DX+RBP組3H-TdR的cpm值(見表3)。結(jié)果表明,RBP可分別提高正常和免疫受抑小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率(P<0.05)。2.3.3對(duì)正常和免疫受抑小鼠溶血素抗體的抑制率按文獻(xiàn)方法,測定小鼠脾細(xì)胞介導(dǎo)溶血素生成的HC50值(見表3),結(jié)果表明,RBP可提高正常和免疫受抑小鼠溶血素抗體的生成(P<0.01)。2.3.4降血酸含量hp對(duì)免疫受抑小鼠肝臟內(nèi)鏡內(nèi)鏡cmp含量的影響依放射免疫法測定NS組,HP組和RBP+HP組小鼠肝細(xì)胞cGMP含量(見表3),結(jié)果表明HP降低肝細(xì)胞cGMP含量(P<0.05),而RBP可提高免疫受抑小鼠肝細(xì)胞cGMP含量(與HP組比較P<0.05.與NS組比較P<0.05)。2.4lgl-lrbp對(duì)巴細(xì)胞增殖的影響取13名健康成人靜脈血在體外加入0.1～100mg·L-1RBP,以3H-TdR摻入法觀察PHA誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。0.1,lmg·L-lRBP的cpm值明顯高于空白對(duì)照(見表4,P<0.05),表明0.1,1mg·L-1RBP有促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用,但100mg·L-1RBP則抑制淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化(P<0.01)。1mg·L-1RBP促進(jìn)淋巴細(xì)胞始于48h,72～120h促進(jìn)轉(zhuǎn)化作用尤為顯著。3rabp對(duì)aa的影響本研究發(fā)現(xiàn)RBP及L,C有抗急性滲出性炎癥作用,為兔腦用于治療凍瘡、火傷、癰疽熱癤惡瘡提供了理論依據(jù)。RBP抗急性炎癥的機(jī)制可能與影響花生四烯酸(AA)代謝有關(guān),因磷脂在磷脂酶A2作用下生成AA,進(jìn)一步在環(huán)氧酶和脂氧酶作用下生成有致炎作用的前列腺素和白三烯,至于RBP如何影響AA尚待探討。本研究證明RBP有提高正常和免疫受抑動(dòng)物吞噬細(xì)胞功能,體液和細(xì)胞免疫功能,并提高免疫受抑動(dòng)物肝細(xì)胞cGMP含量,體外促進(jìn)或抑制人