臨床微生物學檢驗：實驗十二 不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的檢驗(一)

實驗十二不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的檢驗(一)目的要求：1.熟悉不發(fā)酵革蘭陰性菌的分離鑒定程序及臨床意義；2.掌握不發(fā)酵革蘭陰性菌的形態(tài)、生化反應特點和數值鑒定方法；3.掌握鑒定不發(fā)酵革蘭陰性菌生化反應試驗的操作方法和結果分析。實驗內容：1.制備普通瓊脂平板（小組作，每人一個）2.銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌和不動桿菌接種普通瓊脂平板（2人一組，2人接種一種細菌）不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的鑒定程序

細菌對糖類的利用有2種類型：一種是從糖類發(fā)酵產酸，不需要以分子氧作為最終受氫體，稱發(fā)酵型產酸，它在有氧無氧條件下均能分解葡萄糖；另一種則以分子氧作為最終受氫體，稱氧化型產酸，它在無氧條件下不分解葡萄糖，這種細菌也稱產堿型。前者包括的菌種類型為多數。

不發(fā)酵菌（NonfermentativeBacilli）是一群不發(fā)酵葡萄糖（-）或僅以氧化形式(o)利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌；多為條件致病菌，主要引起院內感染。其共同的生化特征有：

1.葡萄糖氧化發(fā)酵試驗（O/F試驗）常顯示是氧化型或產堿型（O/-）。

2.氧化酶陽性：非發(fā)酵菌中，除不動桿菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌外氧化酶試驗均為陽性。

3.多有鞭毛（除外不動桿菌），但半固體上動力不明顯，可用懸滴法或鞭毛染色法檢測其動力。

4.KIA表層生長底層不生長（缺氧）。非發(fā)酵菌包括的菌種較多，主要有下列菌屬：假單胞菌屬:銅綠假單胞菌…

不動桿菌屬:鮑曼不動桿菌…

窄食單胞菌屬:嗜麥芽窄食單胞菌…

伯克菌屬、產堿桿菌屬、無色桿菌屬、莫拉菌屬、金氏桿菌屬、黃桿菌屬、艾肯菌屬、土壤桿菌屬、黃單胞菌屬、叢毛單胞菌屬、食酸菌屬……醫(yī)院環(huán)境用品/臨床標本肉湯培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基血平板麥康凱平板可疑菌落OF試驗涂片革蘭染色O革蘭陰性桿菌、氧化酶陽性非發(fā)酵菌系列生化反應鑒定到種產綠膿素、青膿素

42℃生長、極端單鞭毛

乙酰胺酶陽性銅綠假單胞菌（鑒定程序）

臨床最常見院內感染病原菌42度生長；精氨酸水解；明膠液化；色素；鞭毛數量操作步驟：倒普通瓊脂平板（小組作，每人一個）注意點：培養(yǎng)基冷卻溫度2.銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌接種普通瓊脂平板（2人一組，每人接種一種細菌），溫箱培養(yǎng)

注意點：劃線接種；無菌操作臨床意義：多為條件致病菌，主要引起院內感染，最常見的是：呼吸道感染、尿道感染、傷口感染，也可引起腦膜炎、菌血癥、醫(yī)源性敗血癥、心內膜炎等。引起細菌定植和感染的危險因素有：機械通氣、廣譜抗生素的預防性應用、化療、插管和中性粒細胞減少等。在非發(fā)酵菌引起的感染中，銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌是臨