清疣Ⅱ號洗劑對SiHa細(xì)胞HPV E7蛋白及PCNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

清疣Ⅱ號洗劑對SiHa細(xì)胞HPVE7蛋白及PCNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究清疣Ⅱ號洗劑對SiHa細(xì)胞HPVE7蛋白及PCNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

摘要：人乳頭瘤病毒（HPV）感染是導(dǎo)致宮頸癌的主要原因之一，其感染帶來的主要后果是細(xì)胞增殖的異常及細(xì)胞周期調(diào)控的紊亂。本實(shí)驗(yàn)旨在探究清疣Ⅱ號洗劑對HPV感染細(xì)胞株SiHa中HPVE7蛋白和細(xì)胞增殖標(biāo)志物PCNA表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，清疣Ⅱ號洗劑處理能夠抑制SiHa細(xì)胞系中HPVE7蛋白和PCNA的高表達(dá)，從而有效抑制細(xì)胞的異常增殖，為臨床治療和預(yù)防HPV感染相關(guān)疾病提供了新的思路和方法。

關(guān)鍵詞：清疣Ⅱ號洗劑；SiHa細(xì)胞；HPVE7蛋白；PCNA；細(xì)胞增殖

引言

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，是由人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起的。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年約有50萬新發(fā)宮頸癌病例，其中大多數(shù)發(fā)生在發(fā)展中國家（1）。HPV感染病毒通過DNA病毒家族感染上皮細(xì)胞，其中HPV類型16和18感染最為常見，它們的E6和E7蛋白是引起宮頸癌發(fā)展的主要原因。特別是E7蛋白的過度表達(dá)可以抑制細(xì)胞周期調(diào)控蛋白pRb，從而導(dǎo)致細(xì)胞逃脫DNA損傷的檢測和修復(fù)，以及異常細(xì)胞增殖（2）。

清疣Ⅱ號洗劑是一種由中草藥提取物研制的藥物，已被廣泛應(yīng)用于宮頸上皮內(nèi)瘤變的臨床治療。前期研究表明，清疣Ⅱ號洗劑能夠有效抑制HPV感染細(xì)胞的增殖，減少異常細(xì)胞的數(shù)量（3）。然而，清疣Ⅱ號洗劑對HPVE7蛋白和細(xì)胞增殖標(biāo)志物PCNA的影響及其機(jī)制仍不清楚。

材料與方法

細(xì)胞培養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)使用人宮頸癌細(xì)胞株SiHa，購自xx生物科技公司。SiHa細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)基中添加10%胎牛血清（FBS），以37°C、5%CO2的條件下培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

將SiHa細(xì)胞分為對照組和清疣Ⅱ號洗劑處理組。對照組細(xì)胞在培養(yǎng)基中添加相同體積的PBS，處理組細(xì)胞在培養(yǎng)基中添加清疣Ⅱ號洗劑，濃度為xμg/ml。細(xì)胞在孵化箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，收集細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的分析。

蛋白質(zhì)提取與Westernblot分析

用RIPA溶液裂解細(xì)胞，收集上清液作為蛋白提取液。通過BCA法測定蛋白的濃度，將蛋白樣品加入SDS膠，電泳分離，然后轉(zhuǎn)膜到PVDF膜上。膜上的蛋白質(zhì)進(jìn)行非特異性結(jié)合的阻斷，再與特異性抗體孵育，最后使用ECL系統(tǒng)檢測蛋白的表達(dá)水平。

細(xì)胞增殖分析

細(xì)胞增殖分析采用CCK-8試劑，根據(jù)試劑說明書操作。將不同時(shí)間點(diǎn)收集的細(xì)胞加入含有CCK-8試劑的96孔板中，孵育1小時(shí)后，使用酶標(biāo)儀讀取450nm的吸光度值。

結(jié)果

清疣Ⅱ號洗劑處理后，SiHa細(xì)胞中HPVE7蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)。Westernblot結(jié)果顯示，清疣Ⅱ號洗劑處理組中HPVE7蛋白的表達(dá)水平較對照組明顯降低。同時(shí)，清疣Ⅱ號洗劑處理組的SiHa細(xì)胞中PCNA蛋白的表達(dá)也顯著降低。

細(xì)胞增殖分析結(jié)果顯示，清疣Ⅱ號洗劑處理后，SiHa細(xì)胞的增殖能力明顯降低。處理組的細(xì)胞增殖曲線相對于對照組下移，說明清疣Ⅱ號洗劑能夠有效抑制SiHa細(xì)胞的異常增殖。

討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，清疣Ⅱ號洗劑處理能夠降低HPV感染細(xì)胞中HPVE7蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞的異常增殖。HPVE7蛋白的過度表達(dá)可以抑制細(xì)胞周期調(diào)控蛋白pRb，從而導(dǎo)致細(xì)胞逃脫DNA損傷的檢測和修復(fù)。清疣Ⅱ號洗劑可能通過抑制HPVE7蛋白的表達(dá)，恢復(fù)細(xì)胞周期調(diào)控，抑制細(xì)胞的異常增殖。此外，清疣Ⅱ號洗劑還能降低SiHa細(xì)胞中PCNA的表達(dá)，PCNA是細(xì)胞增殖的標(biāo)志物，其下調(diào)可能是清疣Ⅱ號洗劑抑制細(xì)胞增殖的一個(gè)重要機(jī)制。

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明清疣Ⅱ號洗劑對SiHa細(xì)胞中HPVE7蛋白及PCNA的表達(dá)具有顯著的影響，能夠有效抑制細(xì)胞的異常增殖。這為清疣Ⅱ號洗劑在臨床治療和預(yù)防HPV感染相關(guān)疾病中的應(yīng)用提供了新的思路和方法。然而，清疣Ⅱ號洗劑對其他細(xì)胞株和多種HPV類型的作用還需要進(jìn)一步研究，以及對其作用機(jī)制的進(jìn)一步探究。通過深入研究，有望為臨床治療和預(yù)防宮頸癌等相關(guān)疾病提供有效的新藥和新方法綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出結(jié)論：清疣Ⅱ號洗劑處理能夠有效抑制HPV感染細(xì)胞的異常增殖，降低HPVE7蛋白的表達(dá)，恢復(fù)細(xì)胞周期調(diào)控，并降低PCNA的表達(dá)。這為清疣Ⅱ號洗劑在臨床治療和預(yù)防HPV感染相關(guān)