奶牛真胃人工變位模型的建立及初步應(yīng)用

奶牛真胃人工變位模型的建立及初步應(yīng)用

20世紀(jì)50年代，begg首次報(bào)告了祖母動(dòng)物檢疫（da），主要發(fā)生在奶牛場(chǎng)的圍產(chǎn)期。人們通過(guò)大量的流行病學(xué)調(diào)查和研究發(fā)現(xiàn)了很多與真胃變位有關(guān)的因素,但該病的主要原因和確切的發(fā)病機(jī)制尚不明確。筆者以奶牛為研究對(duì)象,采用人工手術(shù)致奶牛真胃變位的方法,觀察真胃變位對(duì)機(jī)體血液及胃液電解質(zhì)等指標(biāo)的影響,為深入探討該病的發(fā)病機(jī)理提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1農(nóng)牧場(chǎng)提供精料5～6歲經(jīng)產(chǎn)荷斯坦奶牛6頭,處于干奶期,無(wú)既往病史,由揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)牧場(chǎng)提供。每天飼喂青干草6～8kg、混合精料3.5kg。隨機(jī)分為2組,3頭/組。1.2edica-saba-18生化分析常規(guī)外科器械;金屬探測(cè)器;GC-14BPTF氣相色譜儀(日本島津);MedicaEasylyte電解質(zhì)分析儀;SABA-18生化分析儀;DELTA-320酸度計(jì);鈣檢測(cè)試劑盒(偶氮胂Ⅲ法),購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物工程公司;葡萄糖檢測(cè)試劑盒(葡萄糖氧化酶),購(gòu)自北京博歐實(shí)德生物技術(shù)有限公司。1.3真胃固定線的制作奶牛仰臥保定,腹底壁臍前腹中線右側(cè)與乳靜脈之間切口,打開(kāi)腹腔;將真胃緩慢牽引出腹腔,并進(jìn)行隔離。用金屬探測(cè)器確定真胃內(nèi)無(wú)金屬異物后,將一薄鐵片固定于真胃大彎處;然后在胃大彎處漿膜肌層縫置3根固定線,將真胃推送回腹腔內(nèi),并用手掌將真胃推至左側(cè)髖結(jié)節(jié)水平處、展平,使之夾于瘤胃左側(cè)與左側(cè)腹壁之間;術(shù)者手持固定線尾伸至左側(cè)腹腔內(nèi)并指示真胃的位置,助手依據(jù)術(shù)者的指示位置用手術(shù)刀在皮膚上作3個(gè)1cm長(zhǎng)的小切口;將牽引線從該處切口引出體外,皮下打結(jié)固定,使胃壁靠近左側(cè)腹壁;常規(guī)閉合腹腔,打結(jié)系繃帶。第1組試驗(yàn)牛,術(shù)后待牛站立、運(yùn)動(dòng)30min后,用金屬探測(cè)器測(cè)定真胃的位置,確定真胃在左側(cè)腹腔后,剪斷真胃固定線,2h后再用金屬探測(cè)器測(cè)定真胃的位置;第2組試驗(yàn)牛,不剪斷真胃固定線,使真胃保持在瘤胃與左腹壁之間。1.4術(shù)后生理指標(biāo)術(shù)后觀察2組試驗(yàn)牛的精神狀況及采食飲水量,分別于術(shù)前(0h),術(shù)后12、24、72、120、168、216和264h記錄其體溫、呼吸、脈搏等生理指標(biāo)。1.5血液、瘤液和真液中葡萄糖、ca2+、k-、cl-和na+含量檢測(cè)分別于術(shù)前(0h),術(shù)后12、12、72、120、168、216和264h分別采集血液、瘤胃液、真胃液,檢測(cè)血液中葡萄糖、Ca2+、K+、Cl-和Na+的含量,以及血清pH值,瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)含量、pH值和纖毛蟲(chóng)活性,真胃液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)含量和pH值。1.5.1纖毛蟲(chóng)活性檢測(cè)頸靜脈采血,常溫下放置5min,待血液凝固后,2000r/min,離心2min,分離血清于-20℃冰箱內(nèi)保存,待測(cè)。用胃導(dǎo)管采集瘤胃液,4層紗布過(guò)濾后在顯微鏡下觀察纖毛蟲(chóng)活性與數(shù)量,其余樣品裝于指形管中,-20℃冷凍保存,待測(cè)。通過(guò)真胃穿刺術(shù)采集真胃液,樣品過(guò)濾后裝于指形管中,-20℃冷凍保存,待測(cè)。1.5.2酸相色譜法測(cè)定揮發(fā)性脂肪酸(VFA):高效氣相色譜法。取胃液3ml,15000r/min,離心15min,取上清液1ml,加20%偏磷酸(含60mmol/L巴豆酸)0.2ml,混勻后離心(12000r/min,15min),取上清液0.4μl,采用日本島津GC-14BPTF氣相色譜儀測(cè)定。色譜條件:毛細(xì)管柱CP-WAX(長(zhǎng)30m,內(nèi)徑0.53mm,膜厚1μm);氣化溫度200℃;FID監(jiān)測(cè)器溫度200℃;柱溫采用程序升溫法,初溫100℃,末溫150℃,升溫速率3℃/min,衰減為25,進(jìn)樣量0.4μl。pH值和電解質(zhì)濃度測(cè)定采用離子選擇電極法測(cè)定。血鈣檢測(cè)用偶氮胂Ⅲ法、血糖用葡萄糖氧化酶法。1.6均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理用SPSS13.0進(jìn)行。所有測(cè)定值均取其平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差;采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較和方差分析,顯著水平0.05,置信區(qū)間95%,對(duì)差異顯著的再進(jìn)行顯著水平0.01,置信區(qū)間99%多重比較和方差分析。2結(jié)果與分析2.1術(shù)后牛的食性第1組試驗(yàn)牛在剪斷真胃固定線2h后,用金屬探測(cè)器測(cè)定發(fā)現(xiàn)真胃回到右側(cè)腹腔的正常位置;牛的食欲在24h后基本恢復(fù)正常。第2組試驗(yàn)牛,術(shù)后3d內(nèi)奶牛采食量較少,5d后采食量逐漸增加,但直到術(shù)后第11天時(shí)試驗(yàn)牛也未恢復(fù)正常采食;體溫、脈搏與呼吸均無(wú)顯著變化,術(shù)后排便干燥,數(shù)量減少;變位7d后左側(cè)真胃固定線附近“聽(tīng)—叩診”,出現(xiàn)“鋼管音”。2.2手術(shù)前后瘤胃ph值和na+含量的變化由表1可知,手術(shù)致奶牛真胃變位后,瘤胃液中的K+和Cl-的含量較手術(shù)前升高,差異顯著(P<0.05),瘤胃液中Na+的含量降低,與變位前相比差異顯著(P<0.05),瘤胃pH值總體呈下降趨勢(shì)。2.3兩組患兒術(shù)后總酸度的變化由表2可知,奶牛真胃變位后瘤胃液的乙酸濃度均低于術(shù)前,差異顯著(P<0.05),丙酸和丁酸的含量上升;術(shù)后總酸度比術(shù)前低,差異顯著(P<0.05);乙酸與丙酸的比例呈波動(dòng)下降趨勢(shì),術(shù)后168h降到最低點(diǎn),然后緩慢回升。2.4真胃ph值變化情況由表3可知,手術(shù)致奶牛真胃變位后,真胃液中K+和Cl-濃度升高,Na+濃度降低,差異均顯著(P<0.05),真胃pH值總體呈下降趨勢(shì)。2.5酸、丙酸含量的變化由表4可知,手術(shù)致奶牛真胃變位后,真胃液中乙酸、丙酸的含量上升,丁酸含量下降,總酸度上升,乙酸與丙酸的比例呈波動(dòng)下降趨勢(shì),術(shù)后24h下降到最低點(diǎn),然后緩慢回升,但較手術(shù)前仍有下降。2.6葡萄糖、電解質(zhì)和血液中ph的變化由表5可知,手術(shù)致奶牛真胃變位后,血清中Na+濃度升高,K+、Cl-和Ca2+濃度降低,pH值無(wú)明顯變化。3真胃變位和反液壓藥對(duì)真胃的影響近60年來(lái),國(guó)內(nèi)外對(duì)奶牛真胃變位做了大量的調(diào)查和研究工作,檢測(cè)奶牛生理指標(biāo)的變化主要是通過(guò)自然病例獲得,所以對(duì)一些指標(biāo)的變化與真胃變位的因果關(guān)系不清楚。筆者通過(guò)手術(shù)建立奶牛真胃變位模型,模擬該病的發(fā)病狀態(tài),檢測(cè)奶牛生理指標(biāo)的變化。第1組真胃變位奶牛,術(shù)后30min剪斷其真胃固定線,2h后監(jiān)測(cè)真胃已回至正常位置,術(shù)后監(jiān)測(cè)其精神狀態(tài),飲食,生命體征及血清常量元素,均未發(fā)生明顯的變化。所以,健康真胃即使被壓在瘤胃下方,隨著瘤胃和真胃的蠕動(dòng),也可以恢復(fù)到原位或右側(cè)腹腔;各項(xiàng)生理指標(biāo)無(wú)明顯改變,可以排除手術(shù)對(duì)奶牛機(jī)體的影響。第2組奶牛由于變位手術(shù)的應(yīng)激作用,術(shù)后3d內(nèi)奶牛采食量較少,5d后采食量逐漸增加,但由于真胃變位導(dǎo)致瘤胃內(nèi)容物排空受阻,術(shù)后第11天時(shí)試驗(yàn)牛仍未恢復(fù)正常采食。在真胃變位的初期叩診真胃區(qū)域通常聽(tīng)不到“鋼管音”,在真胃變位造模7d內(nèi),叩診也無(wú)明顯的“鋼管音”,表明真胃內(nèi)沒(méi)有積液、積氣;到手術(shù)變位7d后,叩診出現(xiàn)“鋼管音”,說(shuō)明真胃壁發(fā)生弛緩,胃內(nèi)積液、積氣。K+吸收的主要部位在小腸。瘤胃液中最大濃度出現(xiàn)在采食后3～4h;真胃變位導(dǎo)致采食下降,并且真胃排空障礙,K+無(wú)法進(jìn)入小腸吸收,在瘤胃和真胃內(nèi)積聚,出現(xiàn)低血鉀癥。同樣原理,瘤胃液和真胃液中Cl-濃度的升高可導(dǎo)致低血氯癥。試驗(yàn)性真胃變位奶牛在術(shù)后11d,血清Ca2+下降,Na+稍上升,因此,低血鈣與真胃變位特別是左方變位有一定的關(guān)系。Delgado-Lecaroz等的研究表明,67%的LDA和70%真胃變位、真胃扭轉(zhuǎn)病牛出現(xiàn)不同程度的低血鈣癥。Geishauser發(fā)現(xiàn)真胃變位的奶牛,泌乳第2周血漿中鈣水平明顯降低。Massey報(bào)道奶牛分娩前患低鈣血癥易增加左方真胃變位的發(fā)生幾率。另外,反芻動(dòng)物K+的主要來(lái)源是草料,而牧草含K+高,含Mg2+低,K+可以競(jìng)爭(zhēng)性地抑制腸道對(duì)Mg2+的吸收,并促進(jìn)體內(nèi)Mg2+和Ca2+的排泄,這也可能造成低血鈣和低血鎂。由于真胃弛緩、真胃內(nèi)容物滯留、胃液分泌減少、胃酸不能進(jìn)入小腸,使酸堿平衡失調(diào),繼而引起低血氯癥和低血鉀癥。由此可見(jiàn),瘤胃液、真胃液及血清中的各個(gè)離子的濃度與真胃運(yùn)動(dòng)是相互影響,相互制約的,如某一環(huán)節(jié)控制不當(dāng),即有可能發(fā)生真胃變位。真胃變位后,瘤胃中VFA總含量呈上升趨勢(shì),pH值出現(xiàn)下降,與變位前相比,均出現(xiàn)顯著性差異(P<0.05)。這可能是因?yàn)檎嫖缸兾缓?由于胃排空受阻和采食量的降低,前胃的運(yùn)動(dòng)性下降,瘤胃內(nèi)VFA的吸收和排出出現(xiàn)障礙,導(dǎo)致瘤胃內(nèi)環(huán)境改變,使瘤胃處于酸中毒狀態(tài),進(jìn)一步影響瘤胃蠕動(dòng),加重病情。另外,真胃變