小鼠缺氧實驗指導(dǎo)

PAGEPAGE4實驗三實驗性缺氧【實驗?zāi)康摹?.掌握各型（低張性和血液性）缺氧動物模型復(fù)制的方法，了解缺氧的分類。2.觀察不同類型缺氧時機體的變化（活動狀況、呼吸、粘膜及肝臟的顏色）及存活時間；3.觀察不同年齡和中樞興奮狀態(tài)對機體缺氧耐受性的影響，理解條件因素在缺氧發(fā)病中的重要性。4.掌握各型缺氧的發(fā)生機制及特點。5.了解常見血液性缺氧的解救措施?！緦嶒炘怼繉?dǎo)致低張性缺氧最常見的原因包括吸入氣氧分壓過低和外呼吸功能障礙。本實驗將小鼠放置于加入鈉石灰的密閉廣口瓶內(nèi)，隨著小鼠的呼吸消耗，廣口瓶中氧氣含量逐漸降低，模擬外環(huán)境氧分壓過低引起的低張性缺氧。觀察低張性缺氧時機體的變化（活動狀況、呼吸、粘膜及肝臟的顏色）及存活時間。影響機體對缺氧耐受性的因素很多，除缺氧時間、速度、類型和程度外，還與缺氧時中樞功能狀態(tài)和年齡等因素有關(guān)。本實驗通過應(yīng)用藥物改變小鼠的中樞興奮狀態(tài)及選擇不同年齡的小鼠，觀察不同條件下低張性缺氧小鼠的活動狀況和存活時間。血液性缺氧是由于血紅蛋白的數(shù)量減少或性質(zhì)改變從而降低血液攜氧能力或血紅蛋白結(jié)合的氧不易釋出所引起的缺氧。本實驗將復(fù)制兩種常見血液性缺氧模型：一氧化碳中毒和亞硝酸鹽中毒引起的血液性缺氧。一氧化碳可與血紅蛋白結(jié)合，形成碳氧血紅蛋白而失去結(jié)合氧的能力，從而導(dǎo)致血液攜氧能力降低而引起機體缺氧。亞硝酸鈉是強氧化劑，可使血紅蛋白分子內(nèi)二價Fe2+氧化成為三價Fe3+而形成高鐵血紅蛋白，高鐵血紅蛋白同樣失去攜氧能力而引起血液性缺氧?！緦嶒瀸ο蟆砍赡晷∈螅ㄐ詣e、年齡、體重近似、雌雄不拘）、新生小鼠【實驗藥品和器材】3.75%尼可剎米、0.25%氯丙嗪、生理鹽水、鈉石灰、5%亞硝酸鈉、1%亞甲蘭、濃硫酸、草酸。缺氧瓶帶氣壓平衡裝置、耗氧量測定裝置（圖1）、1ml注射器、5ml注射器、電子天平、紗布、濾紙、眼科剪、眼科鑷、小燒杯、酒精燈、火柴、CO發(fā)生裝置（圖2）、氣囊袋?！緦嶒灢襟E】1.低張性缺氧（1）取體重接近的成年小鼠2只，稱重后分別放入盛有鈉石灰（大約4~5g，以雙層紗布包裹）的兩個缺氧瓶（A瓶和B瓶）中，A瓶不蓋膠塞，暴露于空氣中，B瓶用膠塞塞緊瓶口。（2）比較觀察2只小鼠的活動狀況、皮膚（口唇）黏膜和肝臟顏色、呼吸頻率（次數(shù)/10s）和深度，記錄小鼠出現(xiàn)抽搐的時間及存活時間。（3）通過耗氧量測定裝置測量低張性缺氧（B瓶）的小鼠耗氧量。（4）計算耗氧率（計算方法見附錄）。（5）當(dāng)B瓶小鼠死亡后，將A瓶中小鼠斷頸處死，解剖2只小鼠腹腔，取出小鼠肝臟組織，置于標(biāo)記的白色濾紙上，比較觀察肝臟的顏色。2.不同年齡對缺氧耐受性的影響(1)取成年小鼠和新生幼鼠各1只，將2只小鼠分別放入缺氧瓶內(nèi)（每瓶均放置紗布包裹的鈉石灰5g），蓋上膠塞。(2)觀察小鼠的活動狀況、皮膚（口唇）黏膜和肝臟顏色、呼吸頻率（次數(shù)/10s）和深度，記錄小鼠出現(xiàn)抽搐的時間及存活時間。表一、低張性缺氧各項指標(biāo)變化及不同年齡對低張性缺氧耐受性的影響分組活動狀況黏膜顏色呼吸耗氧率抽搐出現(xiàn)時間（s）存活時間（s）肝臟顏色正常對照（A組）低張性缺氧（B組）新生幼鼠組H2SO4HCOOHCO+H2O△2.鈉石灰的作用缺氧瓶內(nèi)加入鈉石灰的目的是吸收小鼠呼出的CO2，使瓶內(nèi)環(huán)境為單純性低張性缺氧。試劑型鈉石灰為粉紅色顆粒狀物質(zhì)，其吸收CO2的反應(yīng)式如下：NaOH?CaO+CO2→Na2CO3+H2O3.亞甲藍(lán)的作用機制亞甲藍(lán)(mgthyeneblue)又稱美藍(lán)或甲烯藍(lán)，是一種堿性染料。其氧化型呈藍(lán)色，還原型為無色。適當(dāng)劑量亞甲藍(lán)可作為亞硝酸鹽中毒時的搶救藥物。機制是當(dāng)氧化型亞甲藍(lán)進(jìn)入機體后可接受還原性輔酶Ⅱ傳遞的氫離子而轉(zhuǎn)變成為還原型無色亞甲藍(lán)，而無色亞甲藍(lán)能夠迅速使高鐵血紅蛋白轉(zhuǎn)化為正常血紅蛋白，在此過程中，無色亞甲藍(lán)又被氧化成為亞甲藍(lán)，如此反復(fù)循環(huán)，達(dá)到解毒作用。但必須指出，亞甲藍(lán)本身是一種氧化劑，因此它也是高鐵血紅蛋白形成劑，如果應(yīng)用劑量過大，還原性輔酶Ⅱ不能很快將其全部還原為無色亞甲藍(lán)，那么氧化型亞甲藍(lán)會促進(jìn)更多高鐵血紅蛋白的形成而加重病情。因此，應(yīng)用亞甲藍(lán)治療搶救高鐵血紅蛋白血癥時，使用劑量一定要適當(dāng)，切忌大劑量應(yīng)用。4.小鼠耗氧率的測定（1）測定原理：在密閉缺氧瓶有限的空間內(nèi)，小鼠不斷消耗氧氣和呼出CO2，后者被鈉石灰吸收，隨著氧分壓的逐漸下降，使缺氧瓶內(nèi)形成負(fù)壓，當(dāng)把缺氧瓶橡膠管與測氧裝置的刻度移液管連通并打開螺旋夾后，移液管內(nèi)液面因為瓶內(nèi)負(fù)壓吸引而上升，其液面從“0”參考點上升的毫升數(shù)既該小鼠消耗的氧量（見圖1）。（2）方法與步驟1)量筒內(nèi)加入約2/3高度的水，插入刻度移液管，移液管一端與缺氧瓶連接膠管連通。2)當(dāng)移液管中液體達(dá)到平衡位置時記下“0”3)測定時將缺氧瓶與移液管連通后，開啟螺旋夾待移液管液面上升穩(wěn)定后，