五味子乙素預(yù)處理對(duì)汞致大鼠急性腎損傷作用的影響

五味子乙素預(yù)處理對(duì)汞致大鼠急性腎損傷作用的影響

人類參與汞的可能性越來(lái)越高。無(wú)辜的汞尤其容易受到腎臟的損害，尤其是腎小管的損害。五味子乙素(schisandrinB,SchB)是中藥五味子的有效成分之一,新近研究證明,SchB對(duì)中草藥引發(fā)的肝、腎損害有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)研究的主要目的是觀察染汞對(duì)大鼠腎臟的損傷,同時(shí)探討SchB預(yù)處理對(duì)汞致大鼠急性腎損傷作用的影響,為急性汞中毒的發(fā)病機(jī)制和防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1schb預(yù)處理由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的Wistar大鼠30只,雌雄各半,按體重隨機(jī)分成5組。第1組為正常對(duì)照組,第2~4組分別為低、中、高劑量單純?nèi)竟M,第5組為SchB預(yù)處理組。正式實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)7d。氯化汞用生理鹽水溶解并配制成實(shí)驗(yàn)各組濃度,SchB用大豆油溶解配制。對(duì)照組和單純?nèi)竟M空腹以大豆油灌胃,SchB預(yù)處理組空腹灌胃16mg/kgSchB,灌胃容量為5ml/kg;2h后,對(duì)照組皮下注射生理鹽水,低、中、高劑量單純?nèi)竟M分別皮下注射2.2μmol/kg、4.4μmol/kg、8.8μmol/kg氯化汞(HgCl2),SchB預(yù)處理組皮下注射8.8μmol/kg氯化汞,注射容量為5ml/kg。第二日重復(fù)上述操作。1.2腎皮質(zhì)gsh-px活性檢測(cè)于第二次染毒后將大鼠放入代謝籠,收集24h尿液,測(cè)定尿NAG、LDH及ALP活力和尿蛋白、尿汞含量。而后將大鼠乙醚麻醉,腹主動(dòng)脈采血,用于測(cè)定BUN含量;切取大鼠雙側(cè)腎臟,于冰浴下剝離腎被膜,切取腎皮質(zhì)450mg,經(jīng)高速分散均質(zhì)機(jī)及超聲波細(xì)胞破碎機(jī)處理制成10%的組織勻漿,用于測(cè)定腎皮質(zhì)GSH和MDA含量、SOD和GSH-Px活力。另取腎皮質(zhì)100mg,加入2.0ml硝酸消化12h,用于測(cè)定腎皮質(zhì)汞含量。1.3腎皮質(zhì)alp、gsh-px活力和gsh-px活力的測(cè)定尿汞和腎皮質(zhì)汞含量的測(cè)定應(yīng)用冷原子吸收法,尿NAG活力的測(cè)定應(yīng)用試劑盒,尿LDH活力的測(cè)定應(yīng)用2,4-二硝基苯肼比色法,尿ALP活力的測(cè)定應(yīng)用試劑盒,尿蛋白含量的測(cè)定應(yīng)用考馬斯亮藍(lán)G-250改進(jìn)法,尿肌酐含量的測(cè)定應(yīng)用堿性苦味酸比色法,BUN含量的測(cè)定應(yīng)用二乙酰-肟法,腎皮質(zhì)GSH含量的測(cè)定應(yīng)用DTNB比色法,腎皮質(zhì)MDA含量的測(cè)定應(yīng)用硫代巴比妥酸(TBA)比色法,腎皮質(zhì)SOD和GSH-Px活力的測(cè)定應(yīng)用試劑盒,組織蛋白含量的測(cè)定應(yīng)用Lowry法。1.4顯著性檢驗(yàn)su實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以x±s表示,用SPSS11.5軟件單因素方差分析進(jìn)行組間差異的顯著性檢驗(yàn),兩組間比較用Q檢驗(yàn)(Students-Newman-Keuls,SNK)。2結(jié)果2.1組尿汞含量的比較大鼠2次SchB預(yù)處理與染汞后,測(cè)定各組大鼠尿汞及腎皮質(zhì)汞含量,結(jié)果見(jiàn)表1。與對(duì)照組比較,4.4μmol/kgHgCl2組、8.8μmol/kgHgCl2組和SchB預(yù)處理組尿汞含量顯著升高。與對(duì)照組比較,單純?nèi)竟鲃┝拷M和SchB預(yù)處理組腎皮質(zhì)汞含量均顯著升高(P<0.01)。2.2schb預(yù)處理前后尿蛋白和bun含量的變化測(cè)定各組大鼠尿蛋白及BUN含量,結(jié)果見(jiàn)表2。與對(duì)照組比較,2.2、4.4和8.8μmol/kgHgCl2組尿蛋白含量顯著升高;與8.8μmol/kgHgCl2組比較,SchB預(yù)處理組尿蛋白含量顯著降低。與對(duì)照組比較,4.4μmol/kgHgCl2組和8.8μmol/kgHgCl2組BUN含量顯著升高;與8.8μmol/kgHgCl2組比較,SchB預(yù)處理組BUN含量明顯降低(P<0.05)。2.3schb預(yù)處理組尿nag、ldh、年齡對(duì)尿alp活力的影響各組大鼠尿中NAG、LDH及ALP的活力見(jiàn)表3。與對(duì)照組比較,4.4μmol/kgHgCl2組和8.8μmol/kgHgCl2組尿NAG活力顯著升高;與8.8μmol/kgHgCl2組比較,SchB預(yù)處理組尿NAG活力顯著降低。與對(duì)照組比較,單純?nèi)竟鲃┝拷M尿LDH活力顯著升高;與8.8μmol/kgHgCl2組比較,SchB預(yù)處理組尿LDH活力明顯降低。與對(duì)照組比較,4.4μmol/kgHgCl2組和8.8μmol/kgHgCl2組尿ALP活力顯著升高;與8.8μmol/kgHgCl2組比較,SchB預(yù)處理組尿ALP活力顯著降低。2.4schb預(yù)處理對(duì)腎皮質(zhì)gsh含量的影響大鼠腎皮質(zhì)中GSH和MDA的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。與對(duì)照組相比,單純?nèi)竟鲃┝拷M腎皮質(zhì)GSH含量顯著升高;與8.8μmol/kgHgCl2組相比,SchB預(yù)處理組腎皮質(zhì)GSH含量顯著降低。與對(duì)照組相比,各劑量單純?nèi)竟M腎皮質(zhì)MDA含量顯著升高;與8.8μmol/kgHgCl2組相比,SchB預(yù)處理組腎皮質(zhì)MDA含量顯著降低。2.5schb預(yù)處理組腎皮質(zhì)活力變化從表5可以看出,與對(duì)照組比較,單純?nèi)竟鲃┝拷M腎皮質(zhì)SOD活力顯著降低,與8.8μmol/kgHgCl2組相比,SchB預(yù)處理組腎皮質(zhì)SOD活力顯著升高。與對(duì)照組比較,單純?nèi)竟鲃┝拷M腎皮質(zhì)GSH-Px活力顯著降低,與8.8μmol/kgHgCl2組相比,SchB預(yù)處理組腎皮質(zhì)GSH-Px活力明顯升高。3schb預(yù)處理大鼠腎皮質(zhì)的主要活性成分不同方式進(jìn)入體內(nèi)的汞及其化合物,均可在腎內(nèi)蓄積,引起不同程度的腎損傷。汞離子進(jìn)入機(jī)體后,大部分聚集在腎臟,這主要和腎臟富含金屬硫蛋白(metallothioncin,MT)有關(guān)。金屬硫蛋白廣泛存在于生物體內(nèi),含大量半胱氨酸殘基,具有參與微量元素的儲(chǔ)存與運(yùn)輸、重金屬的解毒、消除自由基等多種生物功能,含大量巰基,是腎組織與汞結(jié)合的主要成分,也是汞在腎內(nèi)蓄積的主要原因。進(jìn)入機(jī)體的汞主要隨尿排出體外。本實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,腎皮質(zhì)汞含量及尿汞含量隨染汞劑量加大而顯著升高,低、中、高劑量染汞組腎皮質(zhì)汞含量分別是對(duì)照組腎皮質(zhì)汞含量的29、42、47倍,尿汞含量分別是對(duì)照組的3、15、20倍。有研究結(jié)果表明,汞在腎臟分布是不均勻的,在近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)汞含量最高,且汞主要損傷腎近曲小管上皮細(xì)胞。當(dāng)腎小管損傷,上皮細(xì)胞壞死時(shí),尿中可排泄大量的細(xì)胞內(nèi)酶,其活性增高程度與腎損傷程度密切相關(guān)。尿蛋白可以反映腎臟損傷的程度及腎病治療的效果,可作為輔助參考指標(biāo)。BUN在腎功能損害早期變化不大,可在正常范圍,當(dāng)腎臟損害到一定程度后,BUN含量才迅速升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,單純?nèi)竟M大鼠腎皮質(zhì)汞、尿汞,尿NAG、LDH、ALP活力,尿蛋白和BUN含量都明顯高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,單純?nèi)韭然M大鼠腎皮質(zhì)GSH和MDA含量均明顯高于對(duì)照組,并呈現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系;而其腎皮質(zhì)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量顯著升高,SOD及GSH-Px活力顯著降低并呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系,可見(jiàn)染汞對(duì)大鼠腎皮質(zhì)造成嚴(yán)重的氧化損傷。SchB是從五味子中分離的主要活性成分。體內(nèi)外研究證明,SchB具有明顯的清除自由基和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SchB預(yù)處理組大鼠腎皮質(zhì)GSH和MDA含量均明顯低于單純?nèi)靖邉?/p>