度人教版DNA的粗提取與鑒定（28張）

一、基礎知識——提取DNA的方法

選用一定的物理或化學方法分離具有不同物理或化學性質(zhì)的生物大分子。主要指蛋白質(zhì)（如、酶）和核酸等。則：提取DNA的基本思路

利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。（一）提取生物大分子的基本思路：1、DNA的溶解性①DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同：

（二）DNA分子的理化性質(zhì)：一、基礎知識——提取DNA的方法②DNA不溶于酒精溶液：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點，選擇適當?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，已達到分離目的。（提取）DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。【思考】利用這一原理，可以達到什么目的？除雜提純2、DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性（二）DNA分子的理化性質(zhì)：一、基礎知識——提取DNA的方法①蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對DNA沒有影響；②大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60－80°C的高溫，而DNA在80°C以上才會變性；③洗滌劑可以溶解細胞的細胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì),但對DNA沒有影響。3、DNA的鑒定（二）DNA分子的理化性質(zhì)：一、基礎知識——提取DNA的方法②甲基綠（綠色）★①DNA+二苯胺變藍色沸水浴二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計（一）實驗材料的選?。ǘ┢扑榧毎@取含DNA的濾液（三）去除濾液中的雜質(zhì)（四）DNA的析出與鑒定二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計（一）實驗材料的選取

凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但選用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大?！舅伎肌竣偈裁礃拥膶嶒灢牧线m合提取DNA？②你認為教材提供的材料中哪些不適合提取DNA？二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計（二）破碎細胞，獲取含DNA的濾液動物細胞的破碎較易，例如，在雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水，同時用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。1、動物細胞討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂？蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進入血細胞內(nèi)，使血細胞脹裂，再加上攪拌的機械作用，更加速了雞血細胞的破裂（細胞膜和核膜的破裂），從而釋放出DNA。二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計（二）破碎細胞，獲取含DNA的濾液植物細胞需要先用一定的洗滌劑和食鹽溶解細胞膜。2、植物細胞【討論】加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。例如，提取洋蔥DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計（二）破碎細胞，獲取含DNA的濾液2、植物細胞【討論】如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？研磨不充分會使細胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實驗結(jié)果，導致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍色等。（三）去除濾液中的雜質(zhì)為了純化提取的DNA需要將濾液作進一步處理二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計【學生活動】

閱讀教材提供的三種方法，分析其中的原理。（三）去除濾液中的雜質(zhì)二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計方案一：【討論】①此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細胞成分？可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)操作要點：反復溶解、析出【討論】②為什么反復地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？

用高鹽濃度的溶液使DNA溶解，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去在低鹽溶液中能溶解的雜質(zhì)。

因此，通過反復溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。（三）去除濾液中的雜質(zhì)二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計方案一：【討論】方案二與方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三：利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。（三）去除濾液中的雜質(zhì)二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計方案二：方案三：（四）DNA的析出與鑒定

DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液（體積分數(shù)為95％），靜置2－3min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水。1、DNA的析出二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計2、DNA的鑒定鑒定DNA時在兩只試管中先加入質(zhì)量濃度為2mol/L的NaCl溶液5mL，其中一只加入DNA絲狀物，各加入4mL二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否有藍色。（四）DNA的析出與鑒定二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設計案例：以雞血為實驗材料進行DNA的粗提?、匐u血細胞核的DNA含量豐富，材料易得;②雞血細胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細胞作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設備要求較高，操作繁瑣，歷時較長。三、實驗案例案例：以雞血為實驗材料進行DNA的粗提取【討論】提取雞血中的DNA時，為什么除去血液中的上清液？血液分為兩部分，一部分是血漿，一部分是血細胞。

DNA存在于雞血細胞中，而上清液是血漿，含大量血漿蛋白。三、實驗案例答：共“兩次蒸餾水，兩次析出，三次過濾”①兩次蒸餾水第一次：細胞吸水脹破第二次：稀釋NaCl，使含DNA的黏稠物析出【討論】

實驗過程中有幾次使用蒸餾水，幾次析出，幾次過濾？攪拌時要注意什么？案例：以雞血為實驗材料進行DNA的粗提取三、實驗案例②三次過濾第一次：DNA存在于濾液里第二次：DNA被留在紗布上第三次：DNA存在于濾液里案例一：以雞血為實驗材料進行DNA的粗提取【注】過濾時使用的紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有關。三、實驗案例【討論】

實驗過程中有幾次使用蒸餾水，幾次析出，幾次過濾？攪拌時要注意什么？案例一：以雞血為實驗材料進行DNA的粗提取③兩次析出第一次：用0.14mol／L的NaCl溶液（含雜質(zhì)多）第二次：用冷卻的95％的酒精④攪拌：均要朝一個方向、輕緩的攪拌，玻璃棒不要直插燒杯底部，這樣才能保證得到完整的DNA。三、實驗案例【討論】

實驗過程中有幾次使用蒸餾水，幾次析出，幾次過濾？攪拌時要注意什么？【鞏固訓練】1.（單選）在DNA分子的粗提取實驗中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是

A．稀釋血液、沖洗樣品

B．使血細胞吸水漲破，稀釋NaCl使DNA析出

C．使血細胞吸水漲破，增大DNA溶解度

D．使血細胞吸水漲破，提取含雜質(zhì)較少的DNAB【鞏固訓練】2．（單選）在“DNA的粗提取與鑒定”實驗中，有兩次DNA的沉淀析出，其依據(jù)的原理是:①DNA在氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L時溶解度最低；②DNA在冷卻的體積分數(shù)為95%的酒精中能沉淀析出：

A．兩次都是①

B．兩次都是②

C．第一次是①，第二次是②

D．第一次是②，第二次是①C【鞏固訓練】3．（多選）下列DNA粗提取的實驗操作中，經(jīng)過離心或過濾后，取上清液或濾液的有：

A．在新鮮雞血中加入適量的檸檬酸鈉，混合均勻后離心

B．在盛有血細胞的塑料燒杯中加蒸餾水，快速攪拌后過濾

C．在2mol/L的氯化鈉溶液中放入絲狀物，輕輕攪拌后過濾

D．在溶有DNA的氯化鈉溶液