通竅止咳液對實驗性炎癥反應(yīng)的影響

通竅止咳液對實驗性炎癥反應(yīng)的影響

新引入的系統(tǒng)呼吸道粘膜疾病是一種新的臨床診斷和治療理念。它的特點是將臨床上見不到的疾?。ㄈ缈人浴⑾?、炎炎癥體、喉嚨炎等）結(jié)合起來。通過口服客運粘膜雙重藥物治療鼻子和呼吸道炎癥，有效降低整個呼吸道的炎癥負荷，控制呼吸道疾病的發(fā)生和發(fā)展。通竅止咳液(TQZKL)是根據(jù)我院林定增主任的專利處方配制的中藥制劑,主要含辛夷、蒼耳等中藥,其組方設(shè)計和臨床應(yīng)用正是遵循“呼吸道黏膜病”的新理念,使藥液通過口鼻直接作用于整個呼吸道黏膜,從而達到快速止咳、利咽、清喉的獨特的效果。近年來,在臨床上治療系統(tǒng)性呼吸道黏膜病,取得了良好的效果(另文發(fā)表)。這種治療方法既符合現(xiàn)代醫(yī)學對呼吸道疾病認識的最新診治理念,又充分發(fā)揮了傳統(tǒng)中醫(yī)從整體出發(fā),治療求因、標本兼治的特色。為了探討通竅止咳液的作用機理,本文觀察了其對小鼠和大鼠實驗性炎癥的影響,以期為進一步作為新藥開發(fā)提供藥效學依據(jù)。1材料和機器1.1通1.4-乙酰氧基-4-甲基苯磺酸酯溶液的配制通竅止咳液的制備:將處方中的辛夷水蒸氣蒸餾,收集蒸餾液,其余藥材與辛夷藥渣合并,加水提取2次,第1次2h,第2次1.5h,過濾,合并濾液,濃縮至相對密度1.15~1.20(50℃),放冷后,加入乙醇至含醇量70%,攪拌均勻,放置24h,過濾。回收乙醇,濃縮至相對密度1.10~1.15(50℃),加入辛夷蒸餾液和適量蒸餾水配制成通竅止咳液貯備液(規(guī)格:5g生藥/mL,批號050801),備用。布地奈德鼻噴霧劑:阿斯利康制藥有限公司出品,規(guī)格:32μg/噴;每瓶120噴,藥液濃度為0.64mg/mL,批號041112?；|(zhì)液為不含藥物的空白制劑,由廣州醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院制劑室提供,批號:050801,規(guī)格:100mL/瓶。1.2sd大鼠鼠KM小鼠,雄性,鼠齡8~9周,體質(zhì)量18~22g。合格證(粵檢證字):2003A035號。SD大鼠,雄性,鼠齡12~14周,體質(zhì)量200~230g,合格證(粵檢證字):2003A024號。均由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。1.3菜膠、伊文思藍的配制二甲苯,AR級,重慶天府精細化學品廠提供,規(guī)格500mL/瓶,批號2005222。角叉菜膠,Sigma出品,規(guī)格1g/瓶,批號LOT46H0910。臨用時,用0.9%氯化鈉配成質(zhì)量濃度為1%溶液備用。伊文思藍:Uni-CHEM,lot:GD3020368,規(guī)格:5g/瓶。冰醋酸:AR級,成都化學試劑廠出品,規(guī)格500mL/瓶,批號041020。1.4儀器電子天平(Sartorius,BP121S);可見/紫外分光光度計(UV2450,日本SHIMADZU)。2方法2.1單次給藥劑量ld50將動物隨機分為5組,每組10只,分別為正常對照組、受試藥物TQZKL組3個劑量分別為:低劑量組(小鼠0.03g·kg-1;大鼠0.027g·kg-1)、中劑量組(小鼠0.06g·kg-1;大鼠0.054g·kg-1)、高劑量組(小鼠0.12g·kg-1;大鼠0.108g·kg-1),各組均按體質(zhì)量計算給藥量,并均以滴鼻和噴喉的方式同時給藥。正常對照組給予基質(zhì)液,陽性藥對照組為布地奈德鼻噴霧劑。2.2多次給藥對小鼠耳廓引起炎的抑制率取KM小鼠50只,分為5組,每組10只。分別以滴鼻和噴喉的方式同時給藥,3次/日,連續(xù)3d。末次給藥后30min,各組動物用二甲苯50μL涂于小鼠左耳廓兩面致炎,致炎60min剪取雙耳相同部位耳片,稱重,按下式計算腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度(mg)=致炎側(cè)耳片重(mg)-非致炎側(cè)耳片重(mg)腫脹抑制率=對照組腫脹度-給藥組腫脹度對照組腫脹度×100%2.3膨脹度和水腫抑制率測定大鼠足跖長度選取50只SD大鼠,按體重隨機分為5組,每組10只。分別以滴鼻和噴喉的方式同時給藥,3次/日,連續(xù)5d。與末次給藥60min后,于大鼠足掌皮下注射1%角叉菜膠溶液0.1mL/只致炎,分別于致炎后1、2、3、4、5、6h測量致炎前后足跖周長。按下式計算腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度(mL)=致炎后足周長(mL)-致炎前足周長(mL)腫脹抑制率=對照組腫脹度-給藥組腫脹度對照組腫脹度×100%2.4肉芽腫脹度測定取KM小鼠50只,于腹壁外側(cè)皮下植入同等大小的無菌棉球(20mg),隨機分為5組,每組10只。術(shù)后次日滴鼻和噴喉給藥,每天3次,連續(xù)7d。各組末次給藥后次晨,脫頸椎處死小鼠,將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出,剔除脂肪組織,置烘箱中60℃烘干6h,稱棉球肉芽腫干重,并按下式計算肉芽腫脹度和肉芽抑制率。肉芽腫脹度=棉球肉芽腫干重(mg)-棉球原質(zhì)量(20mg)肉芽腫抑制率=對照組肉芽腫脹度-給藥組肉芽腫脹度對照組肉芽腫脹度×100%2.5小鼠毛細血管通透性試驗取KM小鼠50只,隨機分成5組,每組10只。分別以滴鼻和噴喉的方式同時給藥,3次/日,連續(xù)5d。末次給藥1h后,各鼠均尾靜脈注射0.5%伊文思藍0.9%氯化鈉溶液0.1mL·10g-1體質(zhì)量,隨即腹腔注射0.6%HAc0.20mL/只,20min后脫頸椎處死,用6mL0.9%氯化鈉注射液分數(shù)次洗滌腹腔,用吸出洗滌液,合并后加入0.9%氯化鈉至10mL,3000r/min離心10min;取上清液于590nm比色測定,測吸光度(A),并按下式計算抑制率。抑制率=對照組吸光度-給藥組吸光度對照組吸光度×100%2.5dows統(tǒng)計分析采用SAS8.0forwindows統(tǒng)計軟件進行分析。數(shù)據(jù)以ˉx±s表示,各組間比較采用t檢驗,以P<0.05為差異有顯著性。3結(jié)果3.1苯所致小鼠耳廓水腫的抑制率通竅止咳液高劑量組、中劑量組與對照組比較,對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有顯著的抑制作用,其腫脹抑制率分別為18.27%和12.97%(P<0.05,P<0.01),提示本品具有抗炎作用。見表1。3.2不同劑量兩組對角叉菜膠所致大鼠足水腫的抑制作用分別觀察致炎1~6h后的腫脹度,通竅止咳液高劑量組和中劑量組對角叉菜膠所致大鼠足腫脹具有顯著的抑制作用(P<0.05和P<0.01),提示通竅止咳液具有抗炎作用。3.3小鼠棉球肉芽活檢指標通竅止咳液的高劑量組和中劑量組的抑制率分別為20.34%、7.91%,表明通竅止咳液能顯著抑制小鼠棉球肉芽增生腫脹(P<0.01,P<0.05)。提示通竅止咳液具有明顯的抗腫消炎作用。見表3。3.4組患者一般資料比較通竅止咳液的高劑量組和中劑量組的抑制率分別為40.44%和31.23%。與正常對照組比較差異有顯著性(P<0.01和P<0.05)。這表明通竅止咳液可明顯減少毛細血管對伊文思藍的滲出,對炎癥時的毛細血管通透性增加有明顯的抑制作用,見表4。4通湯藥物的臨床使用價值通竅止咳液用于治療臨床上常見的包括咳嗽、咽喉炎、鼻炎在內(nèi)的系統(tǒng)性呼吸道黏膜病,其治療方法既符合現(xiàn)代醫(yī)學對呼吸道疾病的最新診治理念,又充分發(fā)揮了傳統(tǒng)中醫(yī)從整體出發(fā),治療求因、標本兼治的特色。特別值得提出的是,由純中藥制得的通竅止咳液,其藥液無苦味,加上方便快捷的給藥方式,為患者免除了傳統(tǒng)煎劑的麻煩,更易于攜帶和使用,使通竅止咳液更具有廣闊的臨床開發(fā)利用價值。本文通過觀察通竅止咳液對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹、對小鼠棉球肉芽腫以及對小鼠毛