香果健消膠囊質量標準的研究

香果健消膠囊質量標準的研究

香果健消膠囊是在《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中程方法第8卷中關于“香果健消食片”的處方和提取過程的基礎上改進制備的膠囊。配方的劑量和臨床劑量與香果健消片一致。香果健消膠囊是由蜘蛛香(炒焦)、草果(去殼、炒焦)、木香(炒)、糯米4味藥物組成,具有健胃消食。用于消化不良,氣脹飽悶,食積腹痛,胸滿腹脹。處方中蜘蛛香味苦、辛,性溫,具有理氣止痛、消炎止瀉等功效;草果味辛性溫,可燥濕和中,多用于寒濕內阻、脘腹脹痛;木香味辛、苦,性溫,有行氣止痛、健脾消食等功效;糯米味甘性溫,可曖脾胃,止虛寒泄痢。在原劑型香果健消片的質量標準中,僅有一項加香草醛硫酸溶液的理化鑒別,指標較為單一。為了更好地控制香果健消膠囊的質量,保證療效,筆者建立了蜘蛛香、木香的薄層色譜法(TLC法)鑒別,并采用高效液相色譜法(HPLC法)對木香主要成分木香烴內酯進行含量測定,方法專屬性強,重現性好,結果較為滿意。1儀器和試劑盒1.1儀器島津LC-2010A型高效液相色譜儀,十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱(250×4.6mmS/N8082148)。1.2香、面向鑒別品木香烴內酯對照品:中國藥品生物制品檢定所提供,編號為1524-200101,按92.2%折算,供含量測定用;蜘蛛香對照藥材:由中國藥品生物制品檢定所提供,編號為1179-200001,供鑒別用;木香對照藥材:由中國藥品生物制品檢定所提供,編號為120921-200405,供鑒別用;桉油精對照品:由中國藥品生物制品檢定所提供,編號為110788-9202,供鑒別用;流動相為色譜純,其它試劑均為分析純;香果健消膠囊由云南省玉溪望子隆生物制藥有限公司生產。2方法和結果2.1同一氯大發(fā)生合成法蜘蛛香:取本品內容物2g,研細,加水20mL,超聲處理30min,離心,取上清液置分液漏斗中,加乙醚20mL振搖提取,分取乙醚液,揮干,殘渣加無水乙醇1mL溶解,作為供試品溶液。另取蜘蛛香對照藥材0.5g,同法制成對照藥材溶液,照TLC法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述2種溶液各10μL,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以環(huán)己烷-甲乙酮(8∶2)為展開劑,展開,取出,晾干,在紫外燈光下觀察,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照溶液無干擾。香果健消膠囊中蜘蛛香的薄層色譜圖見圖1。木香:取本品內容物1g,研細,加氯仿30mL,超聲處理30min,濾過,濾液揮至1mL作為供試品溶液。另取木香對照藥材0.5g,同法制成對照藥材溶液,照TLC法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述2種溶液各2μL,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以氯仿—環(huán)已烷(5∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照溶液無干擾。見圖2。草果:無對照藥材,因此參照中藥材理化鑒定草果的TLC法鑒別項下采用桉油精為對照品進行對照試驗,結果供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,陰性對照溶液出現干擾,說明此鑒別不具有一定的專屬性,故未將其列入質量控制指標。2.2研究方法總體規(guī)劃有效成分的種子通過查詢,本處方中蜘蛛香、草果中均含揮發(fā)油,且成分復雜,分離純化困難,選擇含量測定成分難度較大且意義也不大,故參照《中國藥典》2000年版一部木香項下的含量測定法,采用HPLC法對木香有效成分木香烴內酯進行含量測定。2.2.1測定波長的確定波長選擇:以甲醇為溶劑配制的對照品溶液,測定紫外吸收,其最大吸收波長位置為206nm,參照《中國藥典》2000年版一部木香[含量測定]項下的木香烴內酯吸收波長為225nm,因此,確定225nm波長為木香烴內酯的檢測波長。見圖3。色譜條件:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。甲醇-水(65∶35)為流動相,檢測波長為225nm,理論板數按木香烴內酯峰計算應不低于3000。2.2.2超聲處理的樣品制備取本品粉末1.0g,共取6份,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別精密加三氯甲烷50mL,密塞,搖勻,稱定重量,放置過夜,分別超聲處理10、20、30、40、50、60min取出,放冷,再稱定重量,用三氯甲烷補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液3mL,置蒸發(fā)皿中,揮發(fā),殘渣加甲醇2mL,微熱使溶解,轉移至10mL量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。繼續(xù)用含量測定方法分別測定,結果見表1,試驗結果表明超聲提取30min即可使測定結果穩(wěn)定,故將此條件列入質量控制指標。2.2.3對照溶液的制備精密稱取木香烴內酯對照品適量,加甲醇制成每1mL含木香烴內酯20μg的溶液,即得。2.2.4氯甲烷減失液用量的測定取本品粉末1.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加三氯甲烷50mL,密塞,搖勻,稱定重量,放置2h,超聲處理30min,取出,放冷,再稱定重量,用三氯甲烷補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液3mL,置蒸發(fā)皿中,揮發(fā),殘渣加甲醇2mL,微熱使溶解,轉移至10mL量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各20μL,注入高效液相色譜儀,測定,即得。2.2.5陰性樣品溶液的制備按處方劑量及制法和工藝要求制備不含木香的空白樣品,照供試品溶液的制備方法制成陰性溶液,同法進行測定。2.2.6除松香外其它藥材對部分材子金屬的干擾制備好的陰性樣品溶液,同法進行測定,結果在與對照品木香烴內酯相同的保留時間位置,無其它干擾峰出現,表明除木香外其它藥材對木香烴內酯的測定無干擾。見圖4～圖6。2.2.7標準曲線及線性范圍精密稱取木香烴內酯對照品6.5mg,置25mL量瓶中,加甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻,再精密吸取1mL,置10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得對照品溶液(23.97μg/mL)。精密吸取對照品溶液5、10、20、30、40、50、60μL,按含量測定方法進行測定以峰面積積分值對進樣濃度進行回歸處理,回歸方程為y=0.000555022x-0.296123,r=0.999998(n=7),表明木香烴內酯在0.1198～1.4382μg的范圍內呈現出良好的線性關系。測定結果見表2、線性關系考察見圖7。2.2.8精密度測試取同一木香烴內酯對照品溶液,按含量測定方法測定7次,結果見表3。2.2.9穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液,按含量測定方法測定7次,每次間隔時間為2h,結果見表4。試驗結果表明供試品溶液在12h內穩(wěn)定。2.2.10.重型試驗取同一批號的樣品,按含量測定方法重復進行6次試驗,結果見表5,證明此方法重現性良好。2.2.1加樣回收率試驗取重現性相同的同一批號樣品約0.5g,共6份,精密稱定,置具塞錐形瓶中,各精密加入對照品溶液(0.5255mg/mL)0.8,0.8,1.0,1.0,1.2,1.2mL,按含量測定方法分別測定,計算回收率,平均回收率為98.50%,RSD=1.47%(n=6),結果符合規(guī)定。見表6。2.2.12.樣品含量的測量以上實驗結果表明,擬定的含量測定方法切實可行。按含量測定方法,對10批小試、3批中試樣品進行了含量測定,結果見表7。3香果健消片質量標準的研究香果健消膠囊是本公司在香果健消片的基礎上改變劑型而制成的新藥品種,已于2005年7月獲得了國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品注冊批件,并組織生產投放市場。原香果健消片的質量標準中僅有一項加香草醛硫酸溶液的理化鑒別,指標較為單一。為了更好地控制香果健消膠囊的質量,