第七章.細菌和病毒的遺傳

第七章細菌和病毒的遺傳細菌和病毒都是低等生物，在遺傳研究中作用很大，是現(xiàn)代遺傳學研究基因結(jié)構與表達的好材料，也是遺傳工程直接的操作對象?！?．細菌和病毒研究的遺傳意義一、細菌（germ）

細菌屬原核生物，體積小，結(jié)構簡單，有核物質(zhì)沒有核結(jié)構，并且大多數(shù)細菌的染色體是裸露的雙鏈環(huán)狀DNA分子，沒有蛋白質(zhì)結(jié)合。如大腸桿菌（EscherichiaColi通?？s寫為E.Coli）在現(xiàn)代遺傳學和微生物遺傳學的研究中應用廣泛，是基因克隆的最好工具。大腸桿菌的DNA以單個主染色體的形式出現(xiàn)，其分子長約1100μm，分子量約2.6×109。這種DNA不與組蛋白結(jié)合，也不形成核小體，是一個封閉的大環(huán)，沒有起點和終點。除了主染色體之外，細胞里通常還具有一個或多個小染色體，人們通常把小染色體叫質(zhì)粒，也是一個雙鏈DNA小環(huán)，也不與組蛋白結(jié)合。細菌培養(yǎng)有兩種方法：一是液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，二是固體表面培養(yǎng)基培養(yǎng)（瓊脂）。在適當條件下培養(yǎng)，20分鐘可繁殖一代，一晝夜便可達到肉眼能看得見的菌落（107個細菌）。

基本培養(yǎng)基：僅能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養(yǎng)基。無機鹽、水、有機、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)等。

細菌的突變型：1．營養(yǎng)缺陷型：野生型（即原養(yǎng)型）在基本培養(yǎng)基中能合成所需要的各種物質(zhì)，某基因突變以后，就成為營養(yǎng)缺陷型（突變型），營養(yǎng)缺陷型為致死突變，在基本培養(yǎng)基中必須添加缺陷的營養(yǎng)物質(zhì)才能存活，這類基因一般取前3個字母，原養(yǎng)型在字母后加上標“＋”，突變型不加或加“－”。2．抗性突變型：野生型對一些抗菌素或噬菌體（bacteriophage，通?？s寫為phage）敏感，有關基因突變后，就成為抗某種抗菌素或某種噬菌品系，成抗性突變型，在培養(yǎng)基中添加某種抗菌素能把野生型的殺死，但不能殺死抗性突變型。3．分解代謝功能突變型：野生型的能將一些較復雜的營養(yǎng)物質(zhì)分解，如乳糖、氨基酸、脂肪酸等，擔負這些功能的基因發(fā)生突變以后，就會喪失分解這些物質(zhì)的能力。

萊德伯格（Ledeberg，J）等人設計的印影培養(yǎng)法就是鑒定突變的一種方法：先將待測的細菌在母板上培養(yǎng)成菌落，母板上采用完全培養(yǎng)基，也不添加抗菌素，突變型和野生型均可繁殖，菌落培養(yǎng)成以后，用一塊比培養(yǎng)基略小的木板，包上一層嚴格消毒的絲絨布，印在母板上，菌落上的細菌吸附在絲絨布上，再把這塊包著絲絨的木板分別印在各種不同的添加培養(yǎng)基因上，分析各培養(yǎng)基上菌落的形成，在缺乏某種物質(zhì)的培養(yǎng)基上不能形成菌落，或者添加某種phage能生長，即為某種缺陷型或抗某phage的突變型。二、病毒病毒是靠寄生生活，根據(jù)宿主的類型又分為三種病毒：植物病毒、動物病毒和菌類病毒。噬菌體（phage）是細菌病毒。目前人們對phage了解較多，phage的遺傳物質(zhì)分為單鏈DNA、單鏈RNA、雙鏈DNA和雙鏈RNA。三、細菌和病毒在遺傳研究中的優(yōu)越性1．世代周期短：細菌在適宜的溫度下20min可繁殖一代，病毒更快，不到10min便可繁殖一代。2．便于管理和生化分析：個體小，一般在1μm至幾μm之間，操作管理方便。3．便于研究基因的突變：單倍體生物，不存在顯性掩蓋隱性問題，顯隱性突變均能表現(xiàn)出來。裸露的DNA分子(有的病毒為RNA分子)，易受環(huán)境條件的影響而發(fā)生突變；4．便于研究基因的作用：影印培養(yǎng)，易檢出營養(yǎng)缺陷型突變，有利于從生化角度來研究基因的作用。5．便于研究基因重組：細菌具有轉(zhuǎn)化、接合、性導和轉(zhuǎn)導作用，可以進行精密的遺傳學分析。6．便于研究基因結(jié)構、功能及調(diào)控機制：細菌和病毒的遺傳物質(zhì)簡單，易于進行基因定位、結(jié)構分析和分離，基因的表達調(diào)控也適于采用生理生化的方法進行深入研究。

7．便于進行遺傳操作：染色體結(jié)構簡單，沒有組蛋白和其它蛋白的結(jié)合，更宜于進行遺傳工程的操作。

第二節(jié)噬菌體的遺傳分析一、噬菌體的結(jié)構噬菌體是一種細菌病毒，結(jié)構非簡單，蛋白質(zhì)外殼內(nèi)包裹著DNA（雙鏈、單鏈、線性、環(huán)狀等）。遺傳學研究中應用最多是T噬菌體系列，通常應用T1～T7。它們的結(jié)構大同小異，外貌似蝌蚪。T偶列噬菌體（T2、T4、T6）頭部呈六角形，為蛋白質(zhì)外殼和內(nèi)含的DNA雙鏈分子，頭下的尾部包括一個中空的針狀結(jié)構及外鞘，末端是基板，由尾絲及尾針組成，T偶列噬菌體將尾絲附著在E.Coli的表面，通過尾鞘的收縮將噬菌體的DNA注入到E.Coli細胞中。噬菌體DNA注入細胞以后，對宿主細胞的影響不同，通常分為兩類：1．烈性噬菌體：DNA注入宿主以后，快速復制，組裝成許多新的子噬菌體，并使細菌細胞裂解，將噬菌體釋放出來，再重新侵染E.Coli細胞。稱為裂解途徑。2．溫和性噬菌性：溫和性噬菌體具有溶源性，即不使宿主的細胞裂解，形成共生狀態(tài)，隨著宿主細胞染色體的復制而復制，分裂而分裂，能夠相安共存，一個子細胞中有一份噬菌體拷貝，這種途徑稱為溶源途徑。溫和性噬菌體又有兩種類型：

①λ噬菌體；②P噬菌體。

λ-phage侵入宿主細胞以后，細菌不裂解附在E.coli染色體上的gal（半乳糖）和bio（生物素）位點間的attλ座位上

通過交換整合到細菌染色體上，并能阻止其它λ噬菌體的超數(shù)感染。

P1-phage代表P類噬菌體，這類噬菌體的DNA進入宿主細胞以后不整合到宿主細胞的染色體上，獨立存在和宿主共生。這兩類噬菌體的共同特點是不大量復制、轉(zhuǎn)錄和翻譯，這類噬菌體往往只有一個或少數(shù)幾個基因表達，產(chǎn)生阻遏物，使其它基因被關閉不能表達。

λ-phage通過一些誘導因素如紫外線（UV）、溫度改變、烈性噬菌體的誘導，可使關閉的基因表達，成為烈性噬菌體，進入裂解途徑。

二、T2噬菌體的基因重組與作圖赫爾歇將他研究的phage性狀分為兩類：1．侵染E.Coli細胞時，細胞裂解形成的噬菌斑形態(tài)，如斑的大小、斑的邊緣清晰或模糊。2．為宿主細胞的反應，或宿主范圍。如宿主細胞的抗裂解能力，不同基因型有不同的表現(xiàn)型。T2-phage侵染E.Coli時：

T2-phage的性狀：

野生型：r＋噬菌斑小而邊緣模糊

突變型：r－噬菌斑大而邊緣清晰E.Coli的性狀：B株突變→B/2株抗T2-phage

phage野生型h＋：能侵染E.ColiB株,不能侵染B/2株突變型h－：能侵染E.ColiB株和B/2株兩種h－r+噬菌斑小,能侵B株和B/2株h＋r－噬菌斑大,只能侵染B株

將兩種phage雜交將這兩種phage雙重侵染E.ColiB株(不能一先一后，必須是同時)，這兩種phage親本的DNA分子在宿主細胞內(nèi)重組：可以形成四種基因型的phage，接種在B株和B/2株混合培養(yǎng)基中，

表現(xiàn)為：h＋r－半透明大噬菌斑

親本類型h－r＋透明小噬菌斑h＋r＋半透明小噬菌斑

重組類型h－r－透明大噬菌斑將觀察結(jié)果記錄下來，計算重組值：重組值去掉百分號即為cM，為這兩個基因的遺傳距離。這種方法也可以采用另一個類似的過程，叫轉(zhuǎn)染（trancfection），經(jīng)過特殊處理的細菌細胞可以直接吸收裸露的DNA分子，不同的DNA分子在宿主細胞中同樣也可以復制和重組，也可以計算RF值。例溶菌性噬菌體控制溶菌速度的有三個基因，分別為、、，這三個基因突變型、、的溶菌速度不同，可以分別測得這三個基因與h基因的距離。由表7-2可知：ra－h(huán)之間RF=24%rb－h(huán)之間RF=12.3%rc－h(huán)之間RF=1.6%那么,這四個基因在環(huán)狀染色體上可以有四種排列方式是哪一種排列方式，還必須通過進一步的實驗來確定，可先考慮三個基因：rb、rc及h的排列順序：是rchrb還是hrcrb，為此需作×，求得RF值。如RFb.c=RFh.b+RFh.c為rbhrcRFb.c=RFh.b－RFh.c則為hrb

rc在這里實際測得RFb.c=RFh.b+RFh.c

∴h應位于rb及rc之間，排列順序rc－h(huán)－rb。

那么ra在h基因的左或是右，答案是都可以，因為是環(huán)狀的染色體。

rarbrchhh2412.31.6rarararahhhhrbrbrbrbrcrcrcrc三、λ-phage的基因重組與作圖和高等動、植物一樣，phage也可以進行三點基因定位，原理同高等動、植物。如凱澤（Kaiser,A·D，1955）的試驗，對三個基因進行基因定位，這三個基因是：S突變體產(chǎn)生小噬菌斑。Co1突變體產(chǎn)生中央不透明，周圍透明的噬菌斑mi突變體產(chǎn)生微?。ū萐突變體更?。┦删邔Co1mi×＋＋＋在這里和前面講的三點測驗的方法相似。雙交換最少，親本類型最多，兩種單交換類型不最少也不最多，中等。1．先確定這三個基因的排列順序。雙交換類型S＋mi

親本類型SCo1mi

＋Co1＋

＋＋＋Co1在中間S－Co1∶RF

=3.76%3.76cMRF

=6.16%6.16cM

co1mis3.766.16幾種類型的培養(yǎng)基要搞清：

基本培養(yǎng)基：只含有一些簡單大營養(yǎng)物質(zhì)，如碳源、水和少量的生物素，不加抗生素或噬菌體等。野生型的可以生長。完全培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基添加生活必需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，但不加抗生素或噬菌體等。野生型和突變型的都能生活選擇培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基增加一種營養(yǎng)物質(zhì)或添加某一種抗生素、噬菌體等?？蛇x擇和鑒定某種營養(yǎng)缺陷型或抗性突變型。

。第3節(jié)細菌的遺傳分析細菌DNA的重組有四種方式：轉(zhuǎn)化、接合、性導和轉(zhuǎn)導。這幾種方式的重組有三個共同點：①供體DNA單方向轉(zhuǎn)入受體細胞。②供體DNA在受體細胞中都形成階段或部分二倍體。③基因只有整合到環(huán)狀染色體上才能穩(wěn)定遺傳。一、轉(zhuǎn)化（transformation）轉(zhuǎn)化：指受體細胞通過細胞膜從周圍介質(zhì)中直接吸收DNA片段，并整合到本身的染色體上，使本身的基因型和表現(xiàn)型發(fā)生相應變化的現(xiàn)象。轉(zhuǎn)染：離體狀態(tài)的噬菌體核酸改變受體的遺傳組成。是轉(zhuǎn)化的一種特殊形式。轉(zhuǎn)染進入細胞的是完整的核酸，一般不整合到受體的染色體上。轉(zhuǎn)化因子（transformingprinciple）：起轉(zhuǎn)化作用的DNA片段，提供DNA分子或片段的為供體，接受DNA分子或片段的為受體。轉(zhuǎn)化實驗首先是由格瑞費斯（Griffith,F，1928）在肺炎雙環(huán)球菌中發(fā)現(xiàn)的，后來阿委瑞（Avery,O·T,1944）等又從分子水平上得到證實，轉(zhuǎn)化因子是DNA，這就證明了遺傳物質(zhì)是DNA，而且表明轉(zhuǎn)化是細菌基因重組的一種形式（參考第三章）。轉(zhuǎn)化試驗主要用3種細菌研究：1、肺炎雙環(huán)球菌2、枯草桿菌3、流感嗜血桿菌。。不同類型的細菌在培養(yǎng)基中共培養(yǎng)可以形成重組型細菌，如兩個具有不同抗性的細菌群體混合培養(yǎng)

，可以發(fā)現(xiàn)帶有雙抗性的細菌。這主要是由于細菌裂解后，DNA留在培養(yǎng)基中，其它細胞可以攝取這些DNA片斷，使其本身的基因型發(fā)生了變化。這種轉(zhuǎn)化的發(fā)生，大約有1%的受體細胞可以吸收外源DNA?？莶輻U菌可以將DNA直接分泌到活細胞表面，更有利于轉(zhuǎn)化的發(fā)生細菌細胞的轉(zhuǎn)化（一）供體DNA與受體細胞間的接觸與互作轉(zhuǎn)化的第一步是供體DNA與受體細胞接觸，并發(fā)生互作。受體細菌細胞并非任何區(qū)域都允許外源DNA片段通過，而只是在特定區(qū)域形成臨時性通道，這種特定區(qū)域稱為受體位點，當供體DNA與受體細胞發(fā)生互作時，結(jié)合的部位就是受體位點。在受體細胞表面這種位點存在的數(shù)目是有限的，當DNA分子濃度提高時，由于受到受體細胞受體位點的限制，轉(zhuǎn)化率也不會再提高，另外受體細胞還要處于感受狀態(tài)，才允許外源DNA進入受體。轉(zhuǎn)化率受轉(zhuǎn)化片段的大小、形態(tài)、供體DNA分子多少的影響，如肺炎雙環(huán)球菌的供體DNA分子要有800bp以上，枯草桿菌最少要有16000bp，否則，達不到轉(zhuǎn)化作用。在供體DNA片段的數(shù)量較少時，轉(zhuǎn)化率會隨著DNA分子的增加而提高，表現(xiàn)為正相關關系，如果足夠多時，受到受體位點數(shù)目的影響，也不會再提高。（二）、供體DNA的攝取與整合DNA分子的攝取與整合過程有以下幾個點：1．結(jié)合與穿入（bindingandpenetration）：

當細菌細胞處于感受態(tài)時，具有一定長度的雙鏈的DNA分子可以結(jié)合在受體位點，這種結(jié)合，剛開始時是可逆的，有時被核酸酶降解，有時會被沖洗下來，但這階段時間很短，一般只有4～5秒。一旦結(jié)合位點達到飽和狀態(tài)，即阻止其它DNA分子的結(jié)合。

結(jié)合在受體位點的DNA分子，經(jīng)過很短時間即達到穩(wěn)定狀態(tài)，隨后被細胞縱向攝取，這個過程是不可逆的，并不受培養(yǎng)基中的DNA酶破壞，供體DNA在受體位點被受體DNA外切酶或DNA移位酶將雙鏈DNA分子中的一條鏈降解，并利用降解產(chǎn)生的能量將另一條鏈拉入受體細胞。

2．聯(lián)會（synapsis）：供體的單鏈DNA片段進入受體細胞以后，尋找和其具有同源性的染色體部位形成階段二倍體，這種同源性取決于供體細胞與受體細胞的親緣關系，親緣關系越近越容易找到同源部位。3．整合（integration）：階段二倍體可以通過交換，置換下原受體細胞的DNA片段，將供體的單鏈DNA整合到受體細胞的DNA分子中。這個階段二倍體的交換要發(fā)生兩次以上的偶次，交換一次只能打開一個缺口，使其成為鏈狀，發(fā)生兩次以上的偶次，就穩(wěn)定的插入到了受體的DNA分子上。（三）轉(zhuǎn)化與基因重組作圖外源DNA進入受體細胞以后，形成階段二倍體，階段二倍體也可以發(fā)生基因重組，利用重組率可以進行基因作圖。以trp2+his2＋tyr＋為供體基因型、trp2－h(huán)is2－tyr－為受體基因型

注意：在計算RF值時：trp2－h(huán)is2：不考慮685，trp2－h(huán)is2－，trp2－h(huán)iy1：不考慮418，trp2－h(huán)iy1－

his2－try1：不考慮2600his2－

try1－

是因為相應的基因可能沒有進入受體細胞，所以無所謂重組和非重組。由上表可以看出，這三個基因在一起的最多，說明這三個基因是緊密連鎖的，his2、tyr1連鎖更緊密，因為它們并發(fā)轉(zhuǎn)化的最多，根據(jù)RF值，進行染色體作圖。

二、接合（Conjugation）接合：是指兩個不同交配型的細胞，通過直接接觸，將遺傳信息從供體細胞轉(zhuǎn)移到受體細胞的過程。（一）E.Coli接合的發(fā)現(xiàn)1946年，萊德伯格和塔特姆發(fā)現(xiàn)了在E.Coli之間轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)的另一種途徑——接合。他們的實驗是：選擇兩種不同營養(yǎng)缺陷型的E.ColiK12菌株。

A菌株：met－bio－thr＋leu＋為甲硫氨基、生物素缺陷型

B菌株：met＋bio＋thr－leu－為蘇氨酸、亮氨酸缺陷型這兩種類型都是兩種物質(zhì)缺陷，在基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)都不能生長，除非這兩個基因都發(fā)生回復突變，每個基因的突變率都是10－6，兩個同時發(fā)生回復突變幾乎是不可能的，在完全培養(yǎng)基上都可以生長。。把兩種不同營養(yǎng)缺陷型的E.Coli以同等的數(shù)量同時接種在基本培養(yǎng)基上，發(fā)現(xiàn)長出了一些原養(yǎng)型菌落,基因型為（met＋bio＋thr＋leu＋）。這種原養(yǎng)型的出現(xiàn)是什么原因，有兩個疑問：1．重組是否為轉(zhuǎn)化發(fā)生，因為在親本細胞的處理過程中，可能發(fā)生細胞破裂、釋放出轉(zhuǎn)化因子和另一個親本重組產(chǎn)生原養(yǎng)型；2．培養(yǎng)基中是否含有某些代謝產(chǎn)物，兩個親本的代謝產(chǎn)物互補使其可以在基本培養(yǎng)基上生長。針對這兩個問題，萊德伯格和塔特姆進一步作實驗，將一個親本的培養(yǎng)基經(jīng)過細菌漏斗過濾，除去細胞（代謝物質(zhì)），營養(yǎng)物質(zhì)和DNA片段可以通過，然后將其加入另一親本的培養(yǎng)基中，結(jié)果并未產(chǎn)生原養(yǎng)型。這就排除了以上兩個疑問。因而設想A、B菌株重組的必要條件是兩種細胞的直接接觸。1950年戴維斯（Davis,B）設計了一個U型管實驗進一步驗證了以上的設想。

U型管的底部有一濾片，上有微孔，可以通過0.1μm以下的顆粒，細菌的細胞無法通過，將A、B兩個品系置于兩個臂中，兩個臂輪流加壓和吸引促進交流和混合，DNA片段、營養(yǎng)物質(zhì)也可以通過，兩種細胞無法接觸，然后再將兩個臂中的AB菌株分別接種在基本培養(yǎng)基中，結(jié)果沒有菌落生成，即沒有發(fā)生重組，這就更有力的排除了轉(zhuǎn)化和代謝物質(zhì)互補的可能，同時證明細菌的直接接觸是重組的必要條件。

1952年，海斯（Hayes,W）的試驗證明，結(jié)合時遺傳物質(zhì)的交換是單方向轉(zhuǎn)移。即A菌株的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)向B菌株，B菌株的遺傳物質(zhì)不能轉(zhuǎn)向A菌株，A為供體，相當于高等生物的“雄性”，B為受體，相當于高等生物的“雌性”。（一）F因子及F＋向F－的轉(zhuǎn)移

萊德伯格等人認為，所謂供體或雄性是因為細胞內(nèi)有一種致育因子（fertilityfactor,F），用F＋表示，而雌性受體缺乏這種因子，以F－表示。

F因子是一個小的DNA分子，可以看作染色體外的遺傳物質(zhì)。它由3個不同的區(qū)域組成：

1．原點（origin），是轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)的起點；

2．致育基因(fertililygene)，這些基因使其本身具感染性，其中一些基因是編碼生成F纖毛（FPillus）的蛋白質(zhì)，F(xiàn)纖毛是F＋細胞表面的一種管狀結(jié)構稱為接合管（conjugation），接合時F纖毛和F－細胞表面的受體相結(jié)合，在兩個細胞之間形成一個通道即細胞質(zhì)橋，通過細胞質(zhì)橋，遺傳物質(zhì)可以從供體細胞進入受體細胞；3.配對區(qū)

3．配對區(qū)（pairingregion），F(xiàn)因子的這一區(qū)域與細菌染色體中多處的核苷酸序列相對應，可以同源配對?？梢酝ㄟ^交換整合到環(huán)狀染色體上，成為受體細胞染色體的一部分，F(xiàn)因子在細菌細胞中存在有兩種狀態(tài)：

①是獨立存在的復制子；

②又可以整合到染色體上即為附加體（episome）。

根據(jù)F因子的存在可把E.Coli分為3種類型：

①沒有F因子，即為F－；②F因子在細胞質(zhì)中獨立存在，為F＋；③F因子整合到染色體上，為Hfr(highfrequencerecombination高頻重組)型。帶有F因子的細菌可以作為供體，不帶F因子的細菌作受體，細菌雜交時，兩個親本起碼要有一個有F因子，轉(zhuǎn)移時F因子雙鏈在原點處被切開，然后切開的鏈從5`開始進入受體F－細胞，在F－細胞中，再按5`→3`的方向復制成一個完整的雙鏈F因子，另一條沒有被切開的鏈再進行復制，重新形成雙鏈F因子，接合的產(chǎn)物即結(jié)合后體（escomjugant)都是F＋，F(xiàn)－獲得F＋的F因子。與細菌染色體無關，不能形成重組型。

（二）Hfr細胞的形成及染色體的轉(zhuǎn)移

人們研究發(fā)現(xiàn)F＋細胞中1/萬的會偶然整合到染色體，成Hfr型，Hfr細胞可以把主染色體的部分甚至全部帶入到受體細胞。

接合時，整合到染色體上的F因子首先活躍起來，在它的一條鏈中切開缺口，并同時進行滾環(huán)式復制，借助于DNA滾環(huán)復制的動力，帶切口的鏈從5`端進入接合管，這種轉(zhuǎn)移和F＋向F－轉(zhuǎn)移相似，所不同的是F因子和染色體DNA鏈相連，染色體也隨著F因子的轉(zhuǎn)移而被帶入到受體細胞，轉(zhuǎn)移的鏈進入受體細胞立即按照5`→3`的方向進行復制。

Hfr×F－，F(xiàn)－常常只能得到供體染色體的一部分，而不是全部，使F－仍屬于F－，如果全部轉(zhuǎn)移了，F(xiàn)－就變成Hfr類型了。受體細胞得到供體的一部染色體，這部分染色體稱為外基因子（exogenote）,受體自己本身的染色體稱為內(nèi)基因子，這樣的細菌部分染色體是同源的，稱為部分二倍體。細菌的重組就是在內(nèi)基因子和外基因子之間進行。但有兩點和高等生物不同：①交換單次無意義。②重組后替換下來的游離DNA片段只帶有部分基因組，不能單獨復制和延續(xù)，一般被消化掉，重組后的F－細胞不再是部分二倍體，仍為單倍體，重組子類型僅為一個，而不是兩個。（三）中斷雜交試驗及染色體連鎖圖

Hfr×F－，基因從供體進入受體，是有時間差別和次序的，據(jù)此可制作基因圖譜。Wollman和Jacob于1954年在大腸桿菌的接合中設計了一個著名的中斷雜交試驗：

Hfr：thr＋leu＋azistons

lac＋