植物酵素對實驗性便秘小鼠的作用

植物酵素對實驗性便秘小鼠的作用

隨著現(xiàn)代人生活節(jié)奏的加快和飲食結(jié)構(gòu)的變化，通過添加纖維和其他食物來促進腸道蠕動，而蛋白質(zhì)食物攝入過多。此外，由于鍛煉和生活壓力的影響，便秘一直是人類問題之一。發(fā)病率呈逐漸升高趨勢，嚴重影響了人們的生活質(zhì)量和生活安全。便秘是臨床上常見的慢性消化道疾病,通常以排便間隔延長,大便干結(jié)、艱澀不暢為主要癥狀,嚴重者可導(dǎo)致電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂,引起痔瘡、下肢靜脈曲張等疾病。便秘多由飲食、排便習(xí)慣不良、腸道蠕動減退、應(yīng)激性減退而逐漸形成,一般可以采取增加攝入膳食纖維、食用具有潤腸通便作用的功能食品等方法來舒解。植物酵素采用日本傳統(tǒng)的發(fā)酵工藝,從50余種蔬菜、水果、海藻等植物中提取酵素精華和豐富的營養(yǎng)物質(zhì),是一種天然的、無任何添加劑的保健飲品。它含有多種功效成分,如低聚糖、黃酮、皂苷等,對治療便秘、調(diào)節(jié)機體免疫力等有一定的效果。本實驗以小鼠為研究對象,依照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年版)的規(guī)定,采用小腸運動實驗和排便實驗,研究植物酵素對小鼠通便功能的影響及其作用機理,以提高亞健康人群的生活質(zhì)量和健康水平。1材料和方法1.1地芬諾酯片、空間植物酵素由吉林敖東大高酵素有限公司提供,批號110801;復(fù)方地芬諾酯片由長春長虹制藥有限公司生產(chǎn),批號20110701;阿拉伯樹膠粉,購于天津市光復(fù)精細化工研究所,生產(chǎn)批號20101125;活性炭,購于天津市華東試劑廠,生產(chǎn)批號20100603。1.2試驗動物昆明種小鼠,雄性,體重18-22g,購自吉林大學(xué)實驗動物中心,合格證號:SCXK-2008-005。飼料來源同上。1.3藥物和試劑1.3.1活性碳溶液配制準(zhǔn)確稱取阿拉伯樹膠100g,加水800mL,煮沸至溶液透明,稱取活性碳(粉狀)50g加至上述溶液中煮沸三次,待溶液冷卻后加水定容至1000mL,4℃冰箱保存,用前搖勻。1.3.2混懸液的配制復(fù)方地酚諾酯片,每片含復(fù)方地酚諾酯2.5mg,取復(fù)方地酚諾酯片25mg或50mg(10片或20片),用研缽研碎呈粉末后加水至100mL,臨用前配制成濃度為0.025%或0.05%的混懸液。1.4測試方法1.4.1大高酵素劑量的確定小鼠按體重,隨機分為模型對照組、空白對照組、低、中、高劑量組,每組10只。其中低、中、高三個劑量組經(jīng)口灌胃給予大高酵素劑量分別為(36mL、54mL、72mL/(kg·BW))(約相當(dāng)于人體推薦口服劑量(60mL/人·d)30倍、50倍、70倍),模型對照組和空白對照組給予蒸餾水的劑量為40mL/(kg·BW)。每天分兩次給予,連續(xù)灌胃15d后,觀察小鼠的小腸推進試驗和排便試驗。1.4.2測試基礎(chǔ)依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年版)中通便功能檢驗方法。1.4.3墨汁推進率測定各組動物連續(xù)灌胃給予受試物15d,實驗前各組小鼠禁食16h,模型對照組和三個劑量組灌胃給予5mg/(kg·BW)復(fù)方地酚諾酯溶液20mL/(kg·BW),空白對照組給予等量蒸餾水,30min后,劑量組一次給予含相應(yīng)受試物(1∶1混合)的墨汁10mL/(kg·BW),模型對照組和空白對照組給予等量墨汁。25min后頸椎脫臼處死動物,立即打開腹腔分離腸系膜,剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管,不加牽引拉成直線,進行測量。腸管長度為“小腸總長度”,從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進長度”。按下列公式計算墨汁推進率。墨汁推進率(P)=(墨汁推進長度/小腸總長度)×100%1.4.4模型分組與給藥各組動物連續(xù)灌胃給予受試物15d,實驗前各組小鼠禁食16h,模型對照組和三個劑量組灌胃給予10mg/(kg·BW)復(fù)方地酚諾酯溶液20mL/(kg·BW),空白對照組給予等量蒸餾水,30min后,劑量組一次給予含相應(yīng)受試物的墨汁(1∶1混合)10mL/(kg·BW),模型對照組和空白對照組給予等量墨汁,同時開始計時。每只動物均單獨飼養(yǎng),并供給飼料和飲水,觀察記錄每只動物首次排黑便所需時間、6h內(nèi)排黑便粒數(shù)及重量。1.5統(tǒng)計學(xué)學(xué)處理試驗數(shù)據(jù)用方差分析進行統(tǒng)計處理。各組數(shù)據(jù)用x軃±s表示,P<0.05為差異顯著,有統(tǒng)計學(xué)意義。在小鼠便秘模型成立前提下,6h排便粒數(shù)和排便重量任一項結(jié)果陽性,同時小腸運動試驗和排便時間任一項結(jié)果陽性,可判定該受試物具有潤腸通便功能。2結(jié)果與分析2.1小鼠墨汁推進率由表1可見:模型對照組小鼠經(jīng)口灌胃給予造模藥物復(fù)方地芬諾酯,建立小鼠便秘模型,該模型組小鼠的墨汁推進率顯著低于陰性對照組,表示便秘模型成立。各劑量組小鼠的墨汁推進率均高于模型對照組,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析各劑量組與便秘模型對照組的差異有極顯著意義(P<0.01),表明該樣品具有促進小腸運動的作用。與模型對照組比較,高劑量組墨汁推進率的顯著性低于中、低劑量組,可能由于高劑量組小鼠灌胃體積較大,影響小鼠的腸胃運動,使受試物在小鼠體內(nèi)不能被有效利用,因此其對小腸的推進作用顯著性低于中、低劑量組。2.2單粒排黑便實驗結(jié)果由表2可見:模型對照組小鼠排首粒黑便時間、糞便粒數(shù)顯著低于空白對照組(P<0.01),糞便重量低于陰性對照組(P<0.05),表明該便秘模型成立。低劑量組與模型對照組相比,首粒排黑便時間明顯縮短(P<0.05),糞便粒數(shù)顯著增多(P<0.01),糞便重量明顯增加(P<0.05),表明該樣品在給予低劑量時就能明顯縮短首粒排黑便時間,并增加糞便粒數(shù)及糞便重量,具有促排便的作用。高劑量組與模型對照組比較,首粒排黑便時間延長,可能由于高劑量組給予小鼠的灌胃劑量太大,超出小鼠適宜量,造成小鼠有飽腹感,胃腸道蠕動減弱,食物代謝時間延長,所以首粒排黑便時間延長,收集的糞便粒數(shù)減少,糞便重量也相應(yīng)減輕。中、高劑量組與模型對照組比較,首粒排黑便時間、糞便粒數(shù)及糞便重量略高于模型對照組,但差異不顯著(P>0.05),可能由于中、高劑量組小鼠的灌胃劑量略超出小鼠的適宜灌胃量,對小鼠胃腸道的消化、吸收及蠕動有一定的影響所致。2.3l/劑量d雄性昆明種小鼠經(jīng)口灌胃分別給予植物酵素(36mL、54mL、72mL/(kg·BW))(相當(dāng)于人體推薦口服劑量(60mL/人·d)30倍、50倍、70倍),15d后,能夠明顯促進小鼠小腸推進運動,縮短首粒排黑便的時間,增加糞便的粒數(shù)及糞便的重量。綜上所述,植物酵素具有潤腸通便的功能。3潤腸通氣功效成分便秘是一種常見的胃腸功能失調(diào)引起的慢性疾病,研究認為增加飲食中的膳食纖維或是促進腸道蠕動的營養(yǎng)物質(zhì)可以減輕便秘癥狀。植物酵素是經(jīng)由水果、蔬菜、藻類等自然發(fā)酵成熟的一種天然保健食品,富含維生素、氨基酸、有機酸、低聚糖等多種功效成分,具有改善腸內(nèi)微生物平衡、潤腸通便、提高機體免疫力等功效。其發(fā)揮潤腸通便功效作用的主要成分為低聚糖、有機酸及植物性膳食纖維。低聚糖進入人體內(nèi),能在腸道發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸(SCFA),使腸道自發(fā)性蠕動增加,刺激排便。膳食纖維可以促進腸道蠕動,縮短腸內(nèi)物質(zhì)通過腸道的