保健食品毒理學評價程序征求意見稿

保健食品及其原料毒理學評價程序（征求意見稿）本程序合用于保健食品及其原料的毒理學安全性評價。1術語1.1保健食品是指聲稱保健功效，不得對人體產(chǎn)生急性、亞急性或者慢性危害的特殊食品。涉及屬于補充維生素、礦物質等營養(yǎng)物質的營養(yǎng)素補充劑，以及聲稱保健功效的產(chǎn)品。1.2保健食品原料形成保健食品功效成分和配方的初始物料。2受試物2.1受試物能夠是保健食品或保健食品原料。2.2資料性規(guī)定2.2.1應提供受試物的名稱、性狀、規(guī)格、批號、生產(chǎn)日期、保質期、保存條件、申請單位名稱、生產(chǎn)公司名稱、配方、生產(chǎn)工藝、質量原則、保健功效以及推薦攝入量等信息。2.2.2受試物為保健食品原料時應提供動物和植物類原料的產(chǎn)地和食用部位、微生物類原料的分類學地位和生物學特性、食用條件和方式、食用歷史、食用人群等基本信息，以及其它有助于安全性評定的資料。2.2.3原料為從動物、植物、微生物中分離的成分時，還需提供該成分的理化特性和化學構造等資料。2.2.4提供受試物的重要成分、功效成分/標志性成分及可能的有害成分的分析報告。2.3受試物的特殊規(guī)定2.3.1保健食品應提供包裝完整的定型產(chǎn)品。毒理學實驗所用樣品批號應與功效學實驗所用樣品批號一致，并且為衛(wèi)生學實驗所用三批樣品之一（益生菌、奶制品等產(chǎn)品保質期短于整個實驗周期的產(chǎn)品除外）。根據(jù)技術審評意見規(guī)定補做實驗的，若原批號樣品已過保質期，可使用新批號的樣品實驗，但應提供新批號樣品按產(chǎn)品技術規(guī)定檢查的全項目檢查報告。2.3.2由于推薦量較大等因素不適合直接以定型產(chǎn)品進行實驗時，能夠對送檢樣品適宜解決，如濃縮、部分去除輔料或已知安全的食品成分等。應提供受試樣品解決過程的闡明和對應的證明文獻，解決過程應與原保健食品的重要生產(chǎn)工藝環(huán)節(jié)保持一致。3.毒理學實驗的重要項目根據(jù)GB15193開展下列實驗。3.1急性經(jīng)口毒性實驗3.2遺傳毒性實驗：細菌回復突變實驗，體內(nèi)哺乳動物紅細胞微核實驗，哺乳動物骨髓細胞染色體畸變實驗，小鼠精原細胞或精母細胞染色體畸變實驗，體外哺乳類細胞HGPRT基因突變實驗，體外哺乳類細胞TK基因突變實驗，體外哺乳類細胞染色體畸變實驗、嚙齒類動物顯性致死實驗，體外哺乳類細胞DNA損傷修復（非程序性DNA合成）實驗，果蠅伴性隱性致死實驗。遺傳毒性實驗組合：普通應遵照原核細胞與真核細胞、體內(nèi)與體外實驗相結合的原則，并涉及不同的終點（誘導基因突變、染色體構造和數(shù)量變化），推薦下列遺傳毒性實驗組合：組合一：細菌回復突變實驗；哺乳動物紅細胞微核實驗或哺乳動物骨髓細胞染色體畸變實驗；小鼠精原細胞或精母細胞染色體畸變實驗或嚙齒類動物顯性致死實驗。組合二：細菌回復突變實驗；哺乳動物紅細胞微核實驗或哺乳動物骨髓細胞染色體畸變實驗；體外哺乳類細胞染色體畸變實驗或體外哺乳類細胞TK基因突變實驗。根據(jù)受試物的特點也可用其它體外或體內(nèi)測試替代推薦組合中的一種或多個體外測試。3.328天經(jīng)口毒性實驗3.4致畸實驗3.590天經(jīng)口毒性實驗3.6生殖毒性實驗3.7毒物動力學實驗3.8慢性毒性實驗3.9致癌實驗3.10慢性毒性和致癌合并實驗4.毒性實驗的選擇4.1保健食品原料需要開展安全性評價的保健食品原料應參考新食品原料安全性審查的有關規(guī)定進行。4.2保健食品4.2.1保健食品普通應進行急性經(jīng)口毒性實驗、三項遺傳毒性實驗和28天經(jīng)口毒性實驗。根據(jù)實驗成果和目的人群決定與否增加90天經(jīng)口毒性實驗、致畸實驗和生殖毒性實驗、慢性毒性和致癌實驗及毒物動力學實驗。4.2.2采用造成物質基礎發(fā)生重大變化等非傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的保健食品，應進行急性經(jīng)口毒性實驗、三項遺傳毒性實驗、90天經(jīng)口毒性實驗和致畸實驗，必要時開展其它毒性實驗。4.2.3以普通食品、保健食品原料目錄內(nèi)的物質為原料，僅采用物理粉碎或水提等傳統(tǒng)食品生產(chǎn)工藝生產(chǎn)、食用辦法與傳統(tǒng)食用辦法相似，且原料推薦食用量為常規(guī)用量或符合國家有關食品用量規(guī)定的保健食品，普通可不開展毒性實驗。5.特定產(chǎn)品的毒理學設計規(guī)定5.1如產(chǎn)品配方中含有人體必需營養(yǎng)素或已知存在安全問題等物質，如某一過量攝入易產(chǎn)生安全性問題的人體必需營養(yǎng)素等物質（如維生素A、硒等）或已知存在安全問題物質（如咖啡因等），在按其推薦量設計實驗劑量時，如該物質的劑量達成已知的毒性作用劑量，在原有劑量設計的基礎上，應考慮增設去除該物質或減少該物質劑量（如降至未觀察到有害作用劑量）的受試物劑量組，方便對受試物中其它成分的毒性作用及該物質與其它成分的聯(lián)合毒性作用做出評價。5.2推薦量較大的含乙醇的受試物，在按其推薦量設計實驗劑量時，如超出動物最大灌胃容量，能夠進行濃縮。乙醇濃度低于15％（V/V)的受試物，濃縮后應將乙醇恢復至受試物定型產(chǎn)品原來的濃度。乙醇濃度高于15％的受試物，濃縮后應將乙醇濃度調(diào)節(jié)至15％，并將各劑量組的乙醇濃度調(diào)節(jié)一致。不需要濃縮的受試物，其乙醇濃度高于15％時，應將各劑量組的乙醇濃度調(diào)節(jié)至15％。在調(diào)節(jié)受試物的乙醇濃度時，原則上應使用生產(chǎn)該受試物的酒基，無法達成定型產(chǎn)品的濃度時，可用食用酒精。5.3針對適宜人群為孕婦、乳母或小朋友的產(chǎn)品，應特別關注與否存在生殖毒性和發(fā)育毒性，必要時還需檢測某些神經(jīng)毒性和免疫毒性指標。5.4對益生菌、真菌等有特殊規(guī)定的保健食品，應按規(guī)定增加對應的實驗，如毒力實驗。6.動物實驗設計共性問題6.1受試物的前解決6.1.1袋泡茶類受試物的提取辦法應與產(chǎn)品推薦飲用的辦法相似，可用該受試物的水提取物進行實驗。如果產(chǎn)品無特殊推薦飲用辦法，水提取物可采用下列提取條件進行：常壓、溫度80℃～90℃，浸泡時間30min，水量為受試物質量的10倍或以上，提取2次，將提取液合并濃縮至所需濃度，并標明該濃縮液與原料的比例關系。如產(chǎn)品有特殊推薦服用辦法（如推薦食用浸泡后的產(chǎn)品），在實驗時予以考慮。6.1.2液體受試物需要進行濃縮解決時，應采用不破壞其中有效成分的辦法?？墒褂脺囟?0℃～70℃減壓或常壓蒸發(fā)濃縮、冷凍干燥等辦法。液體受試物經(jīng)濃縮后達成人體推薦量的實驗規(guī)定，但不能通過灌胃予以的，允許以摻入飼料的方式予以實驗動物。6.1.3不易粉碎的固體受試物（如含膠基、蜜餞類）可用凍干粉碎的方式解決，并在實驗報告中具體闡明。6.1.4含益生菌或其它微生物的受試物在進行細菌回復突變實驗或體外細胞實驗時，應將微生物滅活，并闡明具體辦法。6.1.5對人體推薦量較大的受試物，在按其推薦量設計實驗劑量時，如超出動物的最大灌胃容量或超出摻入飼料中的限量（10％（w/w）），可允許去除無安全問題的部分輔料進行實驗，并在實驗報告中具體闡明。6.1.6吸水膨脹率較高的受試物應考慮吸水膨脹對受試物予以劑量和實驗動物的影響，以此來選擇適宜的受試物予以方式（灌胃或摻入飼料）。如采用灌胃方式予以，應選擇水為溶媒。6.2受試物的予以方式6.2.1受試物應經(jīng)口予以。根據(jù)受試物的性質及人體推薦攝入量，選擇摻入飼料或飲水、灌胃的方式予以受試物。應具體闡明受試物配制辦法、予以辦法和時間。6.2.2灌胃予以受試物時，應根據(jù)實驗的特點和受試物的理化性質選擇適合的溶媒（溶劑、助懸劑或乳化劑），將受試物溶解或懸浮于溶媒中，普通可選用蒸餾水、植物油、淀粉、明膠、羧甲基纖維素、蔗糖脂肪酸酯等，如使用其它溶媒應闡明理由。所選用的溶媒本身應不產(chǎn)生毒性作用；與受試物各成分之間不發(fā)生化學反映，且保持其穩(wěn)定性；無特殊刺激性或氣味。6.2.3摻入飼料或飲水方式予以受試物時，應確保受試物的穩(wěn)定性和均一性及飼料的適口性，以不影響動物攝食、營養(yǎng)均衡和飲水量為原則。當受試物在飼料中的最大加入量超出5%（w/w）時，需考慮動物的營養(yǎng)需要，結合受試物的蛋白質含量將各組飼料蛋白質水平調(diào)節(jié)一致，并闡明具體調(diào)節(jié)辦法。原則上添加的受試物最高不超出飼料的10%（w/w），否則應闡明理由。6.3實驗動物的選擇實驗動物應符合對應國標的規(guī)定，同時結合保健功效（如減肥、輔助降血脂等）的特點來選擇實驗動物的品系、性別和年紀等。7.實驗成果的鑒定與應用7.1急性毒性實驗如LD50不大于人的推薦（可能）攝入量的100倍，則普通應放棄該受試物用于保健食品，不再繼續(xù)進行其它毒理學實驗。7.2遺傳毒性實驗7.2.1如三項實驗均為陰性，則可繼續(xù)進行下一步的毒性實驗。7.2.2如遺傳毒性實驗組合中兩項或以上實驗陽性，則表達該受試物很可能含有遺傳毒性和致癌作用，普通應放棄該受試物應用于保健食品。7.2.3如遺傳毒性實驗組合中一項實驗為陽性，根據(jù)其遺傳毒性終點、結合受試物的構造分析、化學反映性、生物運用度、代謝動力學、靶器官等資料綜合分析，再選兩項備選實驗（最少一項為體內(nèi)實驗）。如再選的實驗均為陰性，則可繼續(xù)進行下一步的毒性實驗；如其中有一項實驗陽性，則應放棄該受試物應用于保健食品。7.328天經(jīng)口毒性實驗對只需要進行急性毒性、遺傳毒性和28天經(jīng)口毒性實驗的受試物，若實驗未發(fā)現(xiàn)有明顯毒性作用，綜合其它各項實驗成果可做出初步評價；若實驗中發(fā)現(xiàn)有明顯毒性作用，特別是有劑量—反映關系時，則普通應放棄該受試物用于保健食品。7.490天經(jīng)口毒性實驗根據(jù)實驗所得的未觀察到有害作用劑量進行評價，原則是：a)未觀察到有害作用劑量不大于或等于人的推薦（可能）攝入量的100倍表達毒性較強，普通應放棄該受試物用于保健食品。b)未觀察到有害作用劑量不不大于100倍而不大于300倍者，應進行慢性毒性實驗。c)未觀察到有害作用劑量不不大于或等于300倍者則不必進行慢性毒性實驗，可進行安全性評價。7.5致畸實驗 根據(jù)實驗成果評價受試物是不是實驗動物的致畸物。若致畸實驗成果陽性則不再繼續(xù)進行生殖毒性實驗和生殖發(fā)育毒性實驗。在致畸實驗中觀察到的其它發(fā)育毒性，應結合28天和（或）90天經(jīng)口毒性實驗成果進行評價。7.6生殖毒性實驗和生殖發(fā)育毒性實驗根據(jù)實驗所得的未觀察到有害作用劑量進行評價，原則是：a)未觀察到有害作用劑量不大于或等于人的推薦（可能）攝入量的100倍表達毒性較強，應放棄該受試物用于保健食品。b)未觀察到有害作用劑量不不大于100倍而不大于300倍者，應進行慢性毒性實驗。c)未觀察到有害作用劑量不不大于或等于300倍者則不必進行慢性毒性實驗，可進行安全性評價。7.7慢性毒性和致癌實驗7.7.1根據(jù)慢性毒性實驗所得的未觀察到有害作用劑量進行評價的原則是：a)未觀察到有害作用劑量不大于或等于人的推薦（可能）攝入量的50倍者，表達毒性較強，應放棄該受試物用于保健食品。b)未觀察到有害作用劑量不不大于50倍而不大于100倍者，經(jīng)安全性評價后，決定該受試物可否用于食品。c)未觀察到有害作用劑量不不大于或等于100倍者，則可考慮允許使用于保健食品。7.7.2根據(jù)致癌實驗所得的腫瘤發(fā)生率、潛伏期和多發(fā)性等進行致癌實驗成果鑒定的原則是（凡符合下列狀況之一，可認為致癌實驗成果陽性。若存在劑量反映關系，則判斷陽性更可靠）：a)腫瘤只發(fā)生在實驗組動物，對照組中無腫瘤發(fā)生。b)實驗組與對照組動物均發(fā)生腫瘤，但實驗組發(fā)生率高。c)實驗組動物中多發(fā)性腫瘤明顯，對照組中無多發(fā)性腫瘤，或只是少數(shù)動物有多發(fā)性腫瘤。d)實驗組與對照組動物腫瘤發(fā)生率雖無明顯差別，但實驗組中發(fā)生時間較早。致癌實驗成果陽性應放棄將該受試物用于保健食品。8.安全性綜合評價時需要考慮的因素8.1實驗指標的統(tǒng)計學意義、生物學意義和毒理學意義對實驗中某些指標的異常變化，應根據(jù)實驗組與對照組指標與否有統(tǒng)計學差別、其有無劑量反映關系、同類指標橫向比較、兩種性別的一致性及與本實驗室的歷史性對照值范疇等，綜合考慮指標差別有無生物學意義，并進一步判斷與否具毒理學意義。另外，如在受試物組發(fā)現(xiàn)某種在對照組沒有發(fā)生的腫瘤，即使與對照組比較無統(tǒng)計學意義，仍要予以關注。8.2人體推薦（可能）攝入量較大的受試物首先，若受試物摻入飼料的最大加入量（原則上最高不超出飼料的10%）或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達不到未觀察到有害作用劑量為人體推薦（可能）攝入量的規(guī)定倍數(shù)時，綜合其它的毒性實驗成果和實際食用或飲用量進行安全性評價。另首先，應考慮予以受試物量過大時，可能通過影響營養(yǎng)素攝入量及其生物運用率、從而造成某些與受試物無關的毒理學體現(xiàn)。8.3時間-毒性效應關系對由受試物引發(fā)實驗動物的毒性效應進行分析評價時，要考慮在同一劑量水平下毒性效應隨時間的變化狀況。8.4人群資料由于存在著動物與人之間的物種差別，在評價食品的安全性時，應盡量收集人群接觸受試物后的反映資料。人體的毒物動力學或代謝資料對于將動物實驗成果推論到人含有很重要的意義。8.5動物毒性實驗和體外實驗資料本程序所列的各項動物毒性實驗和體外實驗系統(tǒng)是現(xiàn)在管理（法規(guī)）毒理學評價水平下所得到的最重要的資料，也是進行安全性評價的重要根據(jù)。結合其它來源于計算機分析、體外實驗或體內(nèi)實驗的有關資料，有助于更加全方面地解釋實驗成果、做出科學的評價。8.6不擬定系數(shù)即安全系數(shù)。將動物毒性實驗成果外推到人時，鑒于動物與人的物種和個體之間的生物學差別，不擬定系數(shù)普通為100，但可根據(jù)受試物的原料來源、理化性質、毒性大小、代謝特點、蓄積性、接觸的人群范疇、食品中的使用量和人的可能攝入量、使用范疇及功效等因素來綜合擬定其安全系數(shù)的大小。8.7毒物動力學實驗的資料毒物動力學實驗是對化學物質進行毒理學評價的一種重要方面，由于不同化學物質、劑量大小，在毒物動力學或代謝方面的差別往往對毒性作用影響很大。在毒性實驗中，