生物化學(xué)重點(diǎn)整理

第1課生物化學(xué)的概念內(nèi)容及發(fā)展簡史（1）生物化學(xué)（Biochemistry）：生命的化學(xué)，利用化學(xué)的原理與方法去探討和研究生命現(xiàn)象的化學(xué)本質(zhì)。研究生物體內(nèi)物質(zhì)的化學(xué)組成和生命過程中的化學(xué)變化的科學(xué)，從分子水平探討生命現(xiàn)象的本質(zhì)。（2）1、靜態(tài)生物化學(xué)時期（結(jié)構(gòu)生化）：研究以分離分析生物體內(nèi)物質(zhì)的化學(xué)組成、性質(zhì)和含量為主。2、動態(tài)生物化學(xué)時期（代謝生化）：從單純的組成分析深入到物質(zhì)代謝途徑的研究3、分子生物化學(xué)時期（機(jī)能生化）：通過深入探討各種生物大分子的結(jié)構(gòu)與其功能之間的關(guān)系來揭示生命的本質(zhì)和奧秘2.生化相關(guān)概念術(shù)語：旋光性：旋光物質(zhì)使平面偏振光的偏振面發(fā)生旋轉(zhuǎn)的能力稱旋光性，也稱光學(xué)活性或旋光度。用（+）代表右旋，（－）代表左旋。不對稱碳原子/手性中心：指與四個不同的原子或基團(tuán)相連并因此失去對稱性的四面體碳，也稱手性碳原子、不對稱碳原子(asymmetriccarbon)、立體原中心。常用C*表示。對映體：一個不對稱碳原子的取代基在空間里的兩種取向是物體與鏡像的關(guān)系，兩者不能疊合，這兩種旋光異構(gòu)體互稱為對映體。非對映體：彼此不成鏡像的旋光異構(gòu)體差向異構(gòu)體：僅一個手性碳構(gòu)型不同的非對映體構(gòu)型：原子的固定空間排列(取向)構(gòu)象：因單鍵自由旋轉(zhuǎn)及鍵角有一定的柔性,一種具有相同結(jié)構(gòu)和構(gòu)型的分子在空間里可采取多種形態(tài),分子所采取的特定形態(tài)稱為構(gòu)象亞基或單體：僅由一條多肽鏈組成，例如溶菌酶和肌紅蛋白寡聚體：由兩條或者多條多肽鏈構(gòu)成，其中每條多肽鏈稱為亞基或亞單位(subunit)，亞基之間通過非共價鍵相互締合。例如血紅蛋白生物大分子：生物大分子指的是作為生物體內(nèi)主要活性成分的各種分子量達(dá)到上萬或更多的有機(jī)分子。生物大分子主要是指蛋白質(zhì)、核酸以及高相對分子量的碳?xì)浠衔铩３Ｒ姷纳锎蠓肿影ǖ鞍踪|(zhì)、核酸、多糖。超分子復(fù)合體：核糖體是由rRNA與蛋白質(zhì)構(gòu)成的超分子復(fù)合體，是合成蛋白質(zhì)的機(jī)器。3、DL相對構(gòu)型和RS絕對構(gòu)型的判別（1）DL表示法:表示相對構(gòu)型D（+）-甘油醛：右旋甘油醛具有的構(gòu)型，D型L（-）-甘油醛：左旋甘油醛具有的構(gòu)型，L型編號最大的手性碳原子上-OH在右為D型，在左為L型。（2）RS構(gòu)型的判斷方法：確定4個取代基的優(yōu)先性順序；使優(yōu)先性最小的取代基離開觀察者最遠(yuǎn)；觀察其他三個取代基按優(yōu)先性大小的順序是順時針方向（R，rectus）還是逆時針方向（S,sinister）4、生物體型中的非共價相互作用鹽鍵：指正負(fù)離子電荷間的靜電引力氫鍵：負(fù)電性很強(qiáng)的原子（如氧或氮）和已與氧或氮共價結(jié)合的氫原子相互吸引，這種作用稱為氫鍵。范德華力：原子間在一定空間距離上的相互作用力（吸引力和排斥力的總稱）定向效應(yīng)(orientationeffect)：極性-極性誘導(dǎo)效應(yīng)(inductioneffect)：極性-非極性分散效應(yīng)(dispersioneffect)：非極性-非極性（London分散力，狹義范德華力），范德華距離。疏水相互作用：指疏水基團(tuán)在水溶液中出于避開水的目的而聚集在一起的作用力，或指非極性基團(tuán)受到水分子的排斥相互聚集在一起的作用力。5、緩沖系統(tǒng)和H-H方程由于氨基酸的兩性解離，蛋白質(zhì)肽鏈中有許多的游離羧基和游離氨基，當(dāng)溶液中呈堿性時，羧基可以貢獻(xiàn)質(zhì)子；當(dāng)溶液呈酸性時，氨基可以接受質(zhì)子。從而緩沖溶液的PH值。成為天然的緩沖系統(tǒng)。第2課蛋白質(zhì)的平均含氮量是多少？有什么應(yīng)用？凱氏定氮：平均含氮16%；粗蛋白質(zhì)含量=蛋白氮×6.25應(yīng)用：凱氏定氮法測蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量蛋白質(zhì)不同水解方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較。（1）酸水解：優(yōu)點(diǎn)：不引起消旋作用，得到L-氨基酸缺點(diǎn)：色氨酸完全被破壞（2）堿水解：優(yōu)點(diǎn)：色氨酸不被破壞缺點(diǎn)：產(chǎn)生消旋現(xiàn)象，所得產(chǎn)物是D型和L型氨基酸的混合物（稱消旋物）引起精氨酸脫氨，生成鳥氨酸和尿素（3）酶水解：

優(yōu)點(diǎn)：不產(chǎn)生消旋作用，也不破壞氨基酸缺點(diǎn)：采用一種酶往往水解不徹底，往往需要幾種酶協(xié)同作用才能使蛋白質(zhì)完全水解所需時間較長3、20種基本氨基酸的結(jié)構(gòu)通式和三字母符號4、20種基本氨基酸按照R結(jié)構(gòu)、極性大小以及營養(yǎng)學(xué)價值的不同分類。（1）R結(jié)構(gòu)脂肪族氨基酸：15種中性氨基酸:5（甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸）含羥基或硫氨基酸:4（羥基：絲氨酸、蘇氨酸）（硫：半胱氨酸、甲硫氨酸/蛋氨酸）酸性氨基酸及酰胺:4（生理?xiàng)l件下帶負(fù)電荷：天冬氨酸、谷氨酸；發(fā)生氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)天冬酰胺、谷氨酰胺）堿性氨基酸:2（賴氨酸、精氨酸）芳香族氨基酸：3種（苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸）280nm，Trp吸收最強(qiáng)，Tyr次之，Phe最弱雜環(huán)族氨基酸：2種（組氨酸生理pH條件下唯一具有緩沖能力的氨基酸；酶的酸堿催化、脯氨酸）（2）極性大小非極性（R基）氨基酸：8種（丙氨酸(Ala)、纈氨酸（Val）、亮氨酸（Leu）、異亮氨酸（Ile）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）、甲硫氨酸（Met）、脯氨酸（Pro））對于維持蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)起重要作用（形成蛋白質(zhì)的疏水核心）極性氨基酸：12種不帶電荷的極性氨基酸：7絲氨酸（Ser）蘇氨酸（Thr）天冬酰胺（Asn）谷氨酰胺（Gln）半胱氨酸（Cys）酪氨酸（Tyr）甘氨酸（Gly）帶正電荷的極性氨基酸：3賴氨酸（Lys）精氨酸（Arg）組氨酸（His）帶負(fù)電荷的極性氨基酸：2天冬氨酸（Asp）谷氨酸（Glu）（3）營養(yǎng)學(xué)價值必需氨基酸（essentialaminoacid，8種)：指的是人和哺乳動物機(jī)體自身不能合成，必須由外界供給的氨基酸。包括：Val,Ile,Leu,Phe,Met,Trp,Thr,Lys（纈異亮苯蛋色蘇賴）半必需氨基酸：指的是His,Arg：人和哺乳動物雖然能夠合成，但數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到機(jī)體的需求，尤其是在胚胎發(fā)育以及嬰幼兒期間，基本上也是由食物中補(bǔ)充。5.名詞：必需氨基酸：指的是人和哺乳動物機(jī)體自身不能合成，必須由外界供給的氨基酸。第3課1.天然的蛋白質(zhì)氨基酸是哪種構(gòu)型？從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，蛋白質(zhì)是由20種L-型α氨基酸通過肽鍵連接而成的長鏈大分子。2.在紫外區(qū)有吸收的氨基酸有哪些？賦予了蛋白質(zhì)什么樣的特性？有什么應(yīng)用？蛋白質(zhì)特征吸收峰：=280nmTrp：280nmTyr：275nmPhe：257nm蛋白質(zhì)具有紫外吸收的特性應(yīng)用于蛋白質(zhì)的定量測定。3.等電點(diǎn)(isoelectricpoint，pI)：當(dāng)溶液為某一pH值時，氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-數(shù)目相等，凈電荷為0。這一pH值即為氨基酸的等電點(diǎn)，簡稱pI。4、如何計算氨基酸的等電點(diǎn)？5、分配層次的基本原理是什么？如何采用紙層析對氨基酸進(jìn)行定性鑒別？（1）溶質(zhì)的Kd越大，在流動相中的比值越大，前進(jìn)越快。6、離子交換層析的基本原理是什么？如何采用離子交換層析對不同種類的氨基酸進(jìn)行分離？原理：樹脂先用含Na堿處理成鈉型，在低pH下（pH＝2-3）使aa帶上正電荷，與樹脂上的鈉離子發(fā)生交換從而結(jié)合在層析柱上；然后再提高pH或離子強(qiáng)度使結(jié)合在柱上的aa依結(jié)合力強(qiáng)弱不同而逐步被分別洗脫下來。依據(jù)的原理是物質(zhì)的酸堿性，極性，所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質(zhì)，對管柱上的離子交換劑有不同的親和力，改變沖洗液的離子強(qiáng)度和pH值，物質(zhì)就能依次從層析柱中分離出來。樹脂的處理、裝柱前的準(zhǔn)備、裝柱、平衡、加樣、洗脫、測定第4課1.名詞：肽基(peptidegroup):也稱肽單位。肽鏈中的酰氨基(-CO-NH-)共價主鏈：由-N-Cα-C-序列重復(fù)排列而成：肽平面(peptideplane）：也稱肽基平面、酰胺平面。二面角：3.肽平面的形成和特點(diǎn)特點(diǎn)：肽鍵長=1.33Ao，具部分雙鍵性質(zhì)，不能自由旋轉(zhuǎn)肽平面上的六個原子傾向于共平面，因此肽平面具有剛性在肽平面中C=O與N–H或兩個Cα呈反式排布3、谷胱甘肽的特點(diǎn)和功能第5課1、何謂蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)？2、簡述蛋白質(zhì)測序的基本策略3、如何測定多肽鏈的末端氨基酸？4、斷開二硫鍵的方法有哪些？5、常用來對多肽鏈進(jìn)行選擇性裂解的酶有哪幾個？各有何作用特點(diǎn)？6、何謂對角線電泳？有什么應(yīng)用？7、自學(xué)教材p78-84，掌握序列同源、同源蛋白質(zhì)、可變殘基、不變殘基的基本概念，了解系統(tǒng)樹/進(jìn)化樹和固相多肽合成是從C端向N端延長8、書面作業(yè)教材p86：13，18，19第6課1、進(jìn)一步加強(qiáng)對肽平面、二面角的概念的掌握，同時了解二面角取值與拉式構(gòu)象圖。2、維持蛋白質(zhì)空間三維結(jié)構(gòu)的主要作用力有哪些？（尤其注意幾種次級鍵）3、何謂蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)？維持二級結(jié)構(gòu)的主要作用力是什么？4、蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)包括哪幾種基本類型？分別具有什么特點(diǎn)？5、超二級結(jié)構(gòu)的基本概念及主要類型6、試計算典型的α-螺旋對多肽鏈的壓縮率是多少？(已知在伸展的多肽鏈中每個氨基酸殘基的長度約為0.36nm)7、請從生化的角度解釋一下燙發(fā)的原理？第7課結(jié)構(gòu)域的特點(diǎn)和分類2、蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)的概念和主要維持作用力3、球狀蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)主要有哪些特征？4、四級結(jié)構(gòu)亞基之間的相互作用有哪些？5、試述蛋白質(zhì)亞基締合的生物學(xué)意義6、名詞：原體；結(jié)構(gòu)域；分子伴侶第8、9課1、蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)和膠體性質(zhì)2、蛋白質(zhì)的變性，等離子點(diǎn)，鹽溶，鹽析3、蛋白質(zhì)分離純化的一般原則和步驟。4、蛋白質(zhì)分離純化的常用方法。5、凝膠過濾分離蛋白質(zhì)的洗脫順序6、SDS分離蛋白質(zhì)的遷移率大小順序7、測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的常用方法。8、蛋白質(zhì)含量測定的常用方法。9、試比較凝膠過濾法和SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)Mr的主要差異。10、P210：1，3，4，5，7，8，9，10，14，15第10課1、酶作為生物催化劑有哪些作用特點(diǎn)？一般：用量少而催化效率高不改變化學(xué)反應(yīng)的平衡點(diǎn)（平衡常數(shù)）在反應(yīng)前后E本身無變化可降低反應(yīng)的活化能(activationenergy)生物催化劑：（1）酶易失活，一般需要溫和的反應(yīng)條件（2）酶具有很高的催化效率,即高效性（3）酶具有高度專一性(specificity)（4）酶活性受到調(diào)節(jié)和控制（5）酶的催化活力與輔酶，輔基及金屬離子有關(guān)2、如何解釋酶的專一性？鎖與鑰匙學(xué)說(lockandkeytheory)1894，E.Fischer提出整個酶分子的天然構(gòu)象是具有剛性結(jié)構(gòu)的，酶表面具有特定的形狀。酶與底物的結(jié)合如同一把鑰匙對一把鎖一樣。將酶的活性中心比喻作鎖孔，底物分子象鑰匙，底物能專一性地插入到酶的活性中心,酶與底物的結(jié)合如同一把鑰匙對一把鎖一樣。矛盾:酶的多底物現(xiàn)象、酶對正反方向的催化、相對專一性誘導(dǎo)契合假說(induced-fithypothesis)1958，Koshland提出酶的活性中心在結(jié)構(gòu)上具柔性，底物接近活性中心時，可誘導(dǎo)酶蛋白構(gòu)象發(fā)生變化，這樣就使酶活性中心有關(guān)基團(tuán)正確排列和定向，使之與底物成互補(bǔ)形狀有機(jī)的結(jié)合在一起從而催化反應(yīng)的進(jìn)行。在酶反應(yīng)過程中，酶活性中心構(gòu)象的變化是可逆的。即酶與底物結(jié)合時，產(chǎn)生一種誘導(dǎo)構(gòu)象，反應(yīng)結(jié)束時，產(chǎn)物從酶表面脫落，酶又恢復(fù)其原來的構(gòu)象3.按照國際系統(tǒng)分類酶可以分成哪幾大類？1氧化還原酶類(oxido-reductases)2轉(zhuǎn)移酶類(移換酶類)(transferases)3水解酶類(hydrolases)4裂合酶類(裂解酶類)(lyases)5異構(gòu)酶類(isomerases)6連接酶類(合成酶類)(ligases)4.名詞：ribozyme：核酶,具有催化功能的RNA。誘導(dǎo)契合假說；酶的活性中心在結(jié)構(gòu)上具柔性，底物接近活性中心時，可誘導(dǎo)酶蛋白構(gòu)象發(fā)生變化，這樣就使酶活性中心有關(guān)基團(tuán)正確排列和定向，使之與底物成互補(bǔ)形狀有機(jī)的結(jié)合在一起從而催化反應(yīng)的進(jìn)行。在酶反應(yīng)過程中，酶活性中心構(gòu)象的變化是可逆的。即酶與底物結(jié)合時，產(chǎn)生一種誘導(dǎo)構(gòu)象，反應(yīng)結(jié)束時，產(chǎn)物從酶表面脫落，酶又恢復(fù)其原來的構(gòu)象寡聚酶；由2個或2個以上亞基組成的酶，亞基間以非共價鍵締合，如3-磷酸甘油醛脫氫酶、乳酸脫氫酶、丙酮酸激酶等。亞基可以相同也可以不同,偶數(shù)居多,少數(shù)為奇數(shù)多酶復(fù)合體(multienzymecomplex)：由兩個或兩個以上的酶，靠非共價鍵結(jié)合而成，其中每一個酶催化一個反應(yīng)，所有反應(yīng)依次進(jìn)行，構(gòu)成一個代謝途徑或代謝途徑的一部分。多酶復(fù)合體有利于一系列反應(yīng)的進(jìn)行。如丙酮酸脫氫酶系、肪酸合成酶復(fù)合體等。脫輔酶；結(jié)合蛋白質(zhì)酶全酶的蛋白質(zhì)部分為脫輔酶。全酶；除蛋白質(zhì)部分(脫輔酶apoenzyme)外，還需要非蛋白質(zhì)的物質(zhì)（即所謂酶的輔因子cofactors)，兩者結(jié)合成的復(fù)合物稱作全酶(holoenzyme)全酶=脫輔基蛋白（脫輔酶）+輔因子輔酶；與酶蛋白松弛結(jié)合的小分子有機(jī)物質(zhì)，通過透析超濾等可以除去。輔基：與酶蛋白以共價鍵緊密結(jié)合的輔因子。第11課1、為什么測定酶活力時以測定反應(yīng)初速率為宜，且底物濃度要遠(yuǎn)大于酶濃度?底物濃度的降低；酶的部分失活；產(chǎn)物對酶的抑制；產(chǎn)物增加引起逆反應(yīng)速率增加使得酶反應(yīng)速率降低底物濃度大，可以保證酶的底物結(jié)合位點(diǎn)全部結(jié)合，處于飽和狀態(tài)，此時酶的反應(yīng)速度最大。但是隨著反應(yīng)的進(jìn)行，產(chǎn)物會對酶的活性產(chǎn)生反饋性抑制，所以測初速度可以避免這種抑制的影響。2、測定酶活力應(yīng)注意哪些問題？測定酶活力時以測定反應(yīng)初速率為宜，且底物濃度要遠(yuǎn)大于酶濃度（1）酶促反應(yīng)過程中，只有最初一段時間內(nèi)反應(yīng)速度與酶濃度成正比，隨著反應(yīng)時間的延長，反應(yīng)速度即逐漸降低。(2)要規(guī)定一定的反應(yīng)條件，如時間、溫度、ph等，并在酶測定過程中保持這些反應(yīng)條件的恒定，如溫度不得超過規(guī)定溫度的士1°C，ph應(yīng)恒定。(3)配制的底物濃度應(yīng)準(zhǔn)確且足夠大，底物液中應(yīng)加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以防止底物被分解。(4)標(biāo)本要新鮮，由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力降低，標(biāo)本如無法及時測定，應(yīng)保存于冰箱中。用血漿時，應(yīng)考慮到抗凝劑對酶反應(yīng)的影響。有些酶在血細(xì)胞、血小板中的濃度比血清高，為此在采血、分離血清時，應(yīng)注意防止溶血和白細(xì)胞的破裂。(5)在測定過程中，所用儀器應(yīng)絕對清潔，不應(yīng)含有酶的抑制物，如酸、堿、蛋白沉淀劑等。3、酶的分離純化過程中有哪些注意事項(xiàng)？（1）過濾或攪拌，防止泡沫生成；（2）加少量金屬螯合劑，防止重金屬離子破壞，EDTA或EGTA乙二醇雙(2-氨基乙醚)四乙酸（3）加入巰基試劑，防止巰基被氧化，巰基乙醇，二硫蘇糖醇(1,4-dithiothreitol,DTT)（4）加入少量蛋白酶抑制劑：對甲苯磺酰氟(PMSF)；亮抑酶肽(Leupeptin)；抑蛋白酶肽(aprotinin)每一步驟都應(yīng)測定：所含酶的總活力和比活力，計算酶回收率、純化倍數(shù)，決定該步的取舍。4、名詞：酶活力；酶活性，指酶催化某一反應(yīng)的能力。常用酶所催化的反應(yīng)的速率來表示比活力；酶的比活（specificactivity）：每毫克酶蛋白所具有的酶活力單位數(shù)。比活力=總活力單位/總蛋白mg數(shù)=U(或IU或Kat)/mg蛋白量度酶的純度轉(zhuǎn)換數(shù)；酶的轉(zhuǎn)換數(shù)(turnovernumber，TN）：指一定條件下每秒鐘每個酶分子轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)，等于催化常數(shù)kcat（表示酶的催化效率）回收率（產(chǎn)率）：純化后總活力/純化前總活力×100%純化倍數(shù)：純化后比活力/純化前比活力5、作業(yè)：教材P240第12，13題第12課1.底物濃度是如何影響酶促反應(yīng)速率的？中間絡(luò)合物學(xué)說：在低底物濃度時,反應(yīng)速度與底物濃度成正比，表現(xiàn)為一級反應(yīng)特征;v=k[S]當(dāng)?shù)孜餄舛容^高時[S]增加,反應(yīng)速度v增加,但增加幅度較小當(dāng)?shù)孜餄舛冗_(dá)到一定值，反應(yīng)速度達(dá)到最大值（Vmax），此時再增加底物濃度，反應(yīng)速度不再增加，表現(xiàn)為零級反應(yīng)。v=Vmax2、寫出米氏方程的推導(dǎo)過程。3、當(dāng)一個酶促反應(yīng)進(jìn)行的速率為Vm的80%時，Km和[S]之間有何關(guān)系？4、什么是米氏常數(shù)？用什么方法可以測得米氏常數(shù)？代表了反應(yīng)速率達(dá)最大反應(yīng)速率一半時的[S]基本原則：將米氏方程變化成相當(dāng)于y=ax+b的直線方程，再用作圖法求出Km和Vmax值。1）雙倒數(shù)作圖法(Lineweaver-Burkplot)2）Hanes-Woolf作圖法：3）Eadie-Hofstee作圖法：4）Eisenthal和Cornish-Bowden直接線性作圖法5、pH和溫度對酶促反應(yīng)速率分別有什么樣的影響？在一定的pH下,酶具有最大的催化活性,通常稱此pH為最適pH(optimumpH)影響酶活性中心解離影響底物的解離影響ES的解離影響維持酶分子空間結(jié)構(gòu)的有關(guān)基團(tuán)的解離過酸、過堿使酶蛋白構(gòu)象解體或使其變性失活大多數(shù)酶都有一個最適溫度(optimumtemperature)溫度的影響有兩個方面：

提高溫度，加快反應(yīng)速率提高溫度，導(dǎo)致酶活性降低甚至喪失酶的最適溫度不是一個固定不變的常數(shù)酶對溫度的耐受力與其存在狀態(tài)有關(guān)6、名詞：Ks；代表E和S反應(yīng)形成過渡態(tài)復(fù)合物ES→E+S的解離常數(shù)KS=K2/K1=[E]·[S]/[ES]，直接反映E與S的親和力Km；米氏常數(shù)；Km代表了反應(yīng)速率達(dá)最大反應(yīng)速率一半時的[S]Kcat:k3=kcat（催化常數(shù)）=TN(轉(zhuǎn)換數(shù)）酶的轉(zhuǎn)換數(shù)（TN）：每個酶分子每分鐘所能催化底物轉(zhuǎn)化的分子數(shù)，表示酶的催化效率。第13課1、三種可逆抑制作用的不同動力學(xué)特征競爭性抑制作用：抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)與底物相似，因而能與底物競爭酶的活性中心，與酶形成可逆的EI復(fù)合物，阻止底物與酶結(jié)合從而抑制反應(yīng)。非競爭性抑制劑：酶可同時與底物及抑制劑結(jié)合，即底物和抑制劑沒有競爭作用。但是形成的三元中間復(fù)合物不能進(jìn)一步分解為產(chǎn)物，所以導(dǎo)致酶活性降低。反競爭性抑制劑：酶只有與底物結(jié)合后才與抑制劑結(jié)合，形成的ESI復(fù)合物不能進(jìn)一步分解為產(chǎn)物從而導(dǎo)致酶活性下降。這類抑制作用常見于多底物反應(yīng)中。2、兩種專一性不可逆抑制劑專一性不可逆抑制劑：（1）Ks型：根據(jù)底物結(jié)構(gòu)設(shè)計，是底物類似物，也稱親和標(biāo)記試劑活潑的氯甲酮基團(tuán)攻擊胰酶活性中心的底物結(jié)合位His57，引起酶的不可逆失活（2）Kcat型：根據(jù)酶作用機(jī)制設(shè)計，本身是酶的底物，含潛伏性反應(yīng)基團(tuán)(latentgroup)，因酶的作用而暴露或活化并攻擊酶的活性中心，使酶不可逆失活。該抑制劑具有極高的專一性，也稱為：自殺性底物3、磺胺藥物的作用機(jī)理4、教材p276：8，15，16第14課1、何謂酶的活性中心，有哪些主要特點(diǎn)？E的活性中心(activecenter)或活性部位(activesite)：酶分子上只有少數(shù)特異的氨基酸殘基參與底物結(jié)合及催化作用，這些特異的氨基酸殘基比較集中的區(qū)域，也就是與酶活力直接相關(guān)的區(qū)域稱為酶的活性中心或活性部位。1只由少數(shù)幾個氨基酸殘基構(gòu)成，占1％~2％酶分子體積；2是一個三維實(shí)體；3位于酶分子表面或接近表面的裂縫(crevice)內(nèi)，是一個相對疏水的區(qū)域；4和底物接近過程中通過誘導(dǎo)楔合互補(bǔ)結(jié)合；5和底物酶通過次級鍵形成ES復(fù)合物;6活性中心具有柔性或可運(yùn)動性，活性中心構(gòu)象比其他部分更容易發(fā)生變化（鄒承魯）;7活性中心殘基一般具有較強(qiáng)的質(zhì)子供、受能力。2.與酶的高效催化有關(guān)的因素有哪些？底物和酶的鄰近效應(yīng)(approximation,proximity)與定向效應(yīng)(orientationeffect)底物的形變(distortion)和誘導(dǎo)契合(inducedfit)酸堿催化；共價催化；金屬離子催化；多元催化和協(xié)同效應(yīng)第15課1、酶活性的調(diào)節(jié)方式有哪些？遲緩調(diào)控：調(diào)節(jié)酶濃度：誘導(dǎo)或抑制酶的合成；調(diào)節(jié)酶的降解激素調(diào)控反饋抑制(feedbackinhibition)調(diào)控酶原的激活對酶活性的調(diào)控快速調(diào)控：抑制劑和激活劑對酶活性的調(diào)控別構(gòu)效應(yīng)調(diào)控酶的可逆共價修飾對酶活性的調(diào)控2、別構(gòu)酶的概念及其特點(diǎn)別構(gòu)酶(allostericenzyme)：具有別構(gòu)效應(yīng)的酶。活性部位+調(diào)節(jié)部位（別構(gòu)中心）（1）調(diào)節(jié)部位不同于催化部位（2）效應(yīng)物可引起酶催化的活性增加或降低；（3）存在同促效應(yīng)和異促效應(yīng)（4）酶促動力學(xué)不遵循米氏方程（5）常處于代謝途徑的起始部位或受控部位3、別構(gòu)調(diào)節(jié)和共價修飾調(diào)節(jié)別構(gòu)調(diào)節(jié)：酶分子的非催化部位（別構(gòu)中心／調(diào)節(jié)中心）與某些化合物（效應(yīng)劑／調(diào)節(jié)物）可逆地非共價結(jié)合后發(fā)生構(gòu)象的改變，進(jìn)而改變酶活性狀態(tài)的調(diào)控現(xiàn)象。共價修飾調(diào)節(jié)：酶分子通過其它酶對其多肽鏈某些基團(tuán)進(jìn)行可逆共價修飾，在活性形式與非活性形式之間相互轉(zhuǎn)變，從而調(diào)節(jié)酶活性。如在蛋白激酶作用下發(fā)生磷酸化，主要的蛋白激酶有蛋白激酶A，磷酸化酶激酶，蛋白酪氨酸激酶等；4、協(xié)同效應(yīng)的判斷方法5、可逆共價修飾調(diào)控及其最主要方式（1）有些酶因自身某氨基酸殘基發(fā)生可逆共價修飾，而在活性形式和無活性形式之間發(fā)生變化，這種酶的活性調(diào)節(jié)形式稱為可逆共價修飾。通過共價調(diào)節(jié)酶來實(shí)現(xiàn)的調(diào)控。（2）磷酸化/去磷酸化6、何謂酶原？酶原激活的實(shí)質(zhì)是什么？酶原(zymogensorproenzymes)：酶的前體酶原的激活：酶原在一定的條件下，去掉一個或幾個特殊的肽鍵，從而使酶的構(gòu)象發(fā)生一定的變化，成為有活性的酶的過程。7、名詞：酶原(zymogensorproenzymes)：酶的前體。別構(gòu)酶(allostericenzyme)：具有別構(gòu)效應(yīng)的酶。活性部位+調(diào)節(jié)部位（別構(gòu)中心）別構(gòu)調(diào)控、協(xié)同效應(yīng)：一個配體與酶結(jié)合后對另一配體與酶結(jié)合的影響（出現(xiàn)于別構(gòu)酶上，往往通過別構(gòu)效應(yīng)實(shí)現(xiàn)）正效應(yīng)物(positiveeffector)或別構(gòu)激活劑：因別構(gòu)導(dǎo)致酶活性增加的物質(zhì)負(fù)效應(yīng)物(negativeeffector)或別構(gòu)抑制劑：因別構(gòu)導(dǎo)致酶活性降低的物質(zhì)正協(xié)同性(positivecooperativity)：S形曲線負(fù)協(xié)同性(negativecooperativity)：表觀雙曲線同促效應(yīng)(homotropiceffect):S~S,I~I異促效應(yīng)(heterotropiceffect):I~S,activator~S別構(gòu)中心：酶分子的非催化部位（別構(gòu)中心／調(diào)節(jié)中心）第16課1、糖類物質(zhì)作為地球上含量最為豐富的有機(jī)物，具有哪些生物學(xué)功能？作為生物體的結(jié)構(gòu)物質(zhì)作為生物體內(nèi)的主要能源物質(zhì)作為生物體內(nèi)的碳源物質(zhì)作為細(xì)胞識別的信息分子2、糖類物質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)是什么？俗稱碳水化合物(carbohydrate)Cn(H2O)m（不夠全面）鼠李糖及巖藻糖（C6H12O5)，脫氧核糖（C5H10O4)化學(xué)定義：多羥基醛或酮及其衍生物或水解時能產(chǎn)生這些化合物的物質(zhì)。3、何謂異頭物？如何區(qū)分其不同類型？單糖由直鏈結(jié)構(gòu)變成環(huán)狀結(jié)構(gòu)后，羰基碳成為新的手性碳（異頭碳），導(dǎo)致C1差向異構(gòu)化，產(chǎn)生兩個非對映體，稱為異頭物。4、天然單糖的構(gòu)型有什么特點(diǎn)？是否所有的單糖都具有光學(xué)活性？天然單糖大多數(shù)是D-型糖。除二羥丙酮外所有單糖都含有不對稱碳原子，都具有旋光性，旋光性是鑒定糖的一個重要指標(biāo)5、名詞：異頭物：單糖由直鏈結(jié)構(gòu)變成環(huán)狀結(jié)構(gòu)后，羰基碳成為新的手性碳（異頭碳），導(dǎo)致C1差向異構(gòu)化，產(chǎn)生兩個非對映體，稱為異頭物。差向異構(gòu)體：僅一個手性碳構(gòu)型不同的非對映體對映體：一個不對稱碳原子的取代基在空間里的兩種取向是物體與鏡像的關(guān)系，兩者不能疊合，這兩種旋光異構(gòu)體互稱為對映體。構(gòu)型(configuration)：原子在空間的相對分布或排列(取向)（具有相同的分子式和結(jié)構(gòu)式，但原子在空間的相對分布不同）構(gòu)象(conformation)：因單鍵自由旋轉(zhuǎn)及鍵角有一定的柔性,一種具有相同結(jié)構(gòu)和構(gòu)型的分子在空間里可采取多種形態(tài),分子所采取的特定形態(tài)稱為構(gòu)象第17課1.比較麥芽糖、乳糖和蔗糖的結(jié)構(gòu)差別。還原糖：有游離半縮醛羥基的寡糖；如：麥芽糖、乳糖。非還原糖：無游離半縮醛羥基的寡糖；如：蔗糖。麥芽糖——葡萄糖+葡萄糖（α-1，4糖苷鍵）乳糖——半乳糖+葡萄糖β-1,4糖苷鍵蔗糖——葡萄糖+果糖（α，β-1,2糖苷鍵）2.比較分析淀粉、糖原、纖維素的結(jié)構(gòu)差別及其不同的生物學(xué)功能。名稱結(jié)構(gòu)生物學(xué)功能淀粉直鏈淀粉(amylose)：葡萄糖分子以α(1→4)糖苷鍵縮合而成的多糖鏈。二級結(jié)構(gòu)：左手螺旋，6個殘基/圈，螺距0.8nm,直徑1.4nm,I2分子正好嵌入形成深藍(lán)色淀粉-碘絡(luò)合物支鏈淀粉（amylopetin）

高度分支，每25-30單位即有一個分支點(diǎn)，具有多個非還原端，但只有一個還原端植物體內(nèi)的葡萄糖貯存庫，分解產(chǎn)生葡萄糖，為生物體提供能量糖原遇碘呈紅紫色至紅褐色。與同支鏈淀粉；區(qū)別在于分支程度更高，分支鏈更短，平均每8-12單位即發(fā)生一次分支。亦稱動物淀粉，是動物體內(nèi)的葡萄糖貯存庫，其合成與分解取決于血糖水平。纖維素由D-葡萄糖以β（1→4）糖苷鍵連接起來的線形聚合物。植物細(xì)胞壁的主要成分3.糖胺聚糖的概念和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及代表物質(zhì)。糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG),又稱糖胺多糖，粘多糖（mucopolysaccharides)，氨基多糖，酸性多糖:結(jié)構(gòu):由含己糖醛酸（角質(zhì)素除外）和己糖胺成分的重復(fù)二糖單位構(gòu)成的不分支的長鏈聚合物。通式：[己糖醛酸→己糖胺]n1)透明質(zhì)酸(hyaluronicacid，HA)最簡單的糖胺聚糖，不被硫酸化，不與蛋白質(zhì)共價結(jié)合2)硫酸軟骨素(chondroitinsulfate，CS)3)硫酸皮膚素(dermatansulfate，DS)4)硫酸角質(zhì)素(keratansulfate，KS)不含糖醛酸5)肝素(heparin，Hp)和硫酸類肝素(heparansulfate,HS）第18課1.糖復(fù)合物中糖是如何共價連接到蛋白上的（即主要的糖肽鍵的鍵型有哪些）？N-糖肽鍵：指β-構(gòu)型的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）異頭碳與天冬酰胺（Asn）的γ-酰胺N-原子共價連接而成的N-糖苷鍵。O-糖肽鍵：單糖的異頭碳與羥基氨基酸的羥基O原子共價結(jié)合而成的O-糖苷鍵。不常見糖肽鍵類型：⑴與半胱氨酸（Cys）連接的糖肽鍵（Gal-Cys,Glc-Cys）⑵與天冬氨酸（Asp）側(cè)鏈羧基形成糖肽鍵(酯糖苷鍵)2.脂類物質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)是什么？生物體內(nèi)一類不溶或低溶于水而高溶于非極性溶劑的生物有機(jī)物質(zhì)，統(tǒng)稱脂類或脂質(zhì)（lipid）3.天然脂肪酸在結(jié)構(gòu)上有哪些共同的特點(diǎn)？（1）碳原子數(shù)目幾乎都是偶數(shù)（2）碳骨架長度為4-36個C原子，多數(shù)為12-24，最常見的是16或18個C原子（3）大多單不飽和脂肪酸雙鍵位置一般在第9-10位C原子之間?9（4）PUFA：?9，其余雙鍵多位于?9和末端甲基之間（5）雙鍵的安排形式：多數(shù)屬于非共軛系統(tǒng)，1,4-戊二烯結(jié)構(gòu),少數(shù)屬于共軛系統(tǒng)（6）雙鍵多為順式結(jié)構(gòu)（7）飽和脂肪酸中最常見的是軟脂酸和硬脂酸；不飽和脂肪酸中最普通的是油酸、亞油酸。4.解釋名詞：蛋白聚糖；由一條或多條糖胺聚糖和一個核心蛋白共價連接而成，性質(zhì)更接近于多糖。糖蛋白：由蛋白質(zhì)結(jié)合數(shù)量不等的糖鏈構(gòu)成,糖含量變化較大,總體性質(zhì)更接近于蛋白質(zhì)；必需脂肪酸(essentialfattyacid,EFA)：是指對人體的功能不可缺少，且必須由膳食提供的兩個多不飽和脂肪酸。PUFA；多不飽和脂肪酸(polyunsaturatedFA，PUFA)EPA；二十碳五烯酸(eicosapentaenoic,EPA):20:5?5c,8c,11c,14c,17cDHA；二十二碳六烯酸(docosahexaenoic，DHA):22:6?4c,7c,10c,13c,16c,19c(在眼視網(wǎng)膜和大腦皮層中特別活躍)ARA：花生四烯酸(arachidonic，ARA):20:4?5c,8c,11c,14c(維持細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能,合成類二十碳烷)5.掌握立體專業(yè)編號系統(tǒng)（即sn-系統(tǒng)）對甘油取代物的命名原則sn–系統(tǒng)是把甘油的手性β碳都看成是L-構(gòu)型的立體專一編號(stereospecificnumbering)或稱sn–系統(tǒng)S-原(pro-S)羥甲基碳為1-位手性原中心(β碳)為2-位R-原(pro-R)羥甲基碳為3-位Fischer投影式：β碳的羥基應(yīng)放在左邊第19課1.甘油磷脂、鞘磷脂、鞘糖脂及甘油糖脂的母體化合物分別是什么？甘油磷脂：3-sn-磷脂酸，磷酸基被極性醇(X-OH)酯化形成極性頭部，兩條烴鏈組成非極性尾部。鞘磷脂：是鞘氨醇的衍生物，由鞘氨醇、脂肪酸和磷酰膽堿(少數(shù)磷酰乙醇胺)組成。鞘糖脂：以神經(jīng)酰胺為母體，1-位羥基被糖基化形成的糖苷化合物甘油糖脂：也稱糖基甘油酯，是二酰甘油分子sn-3位上的羥基與糖基以糖苷鍵連接而成。2.在pH＝7時，判斷下列物質(zhì)的帶電狀況？磷脂酰膽堿（b）磷脂酰乙醇胺（c）磷脂酰絲氨酸0,0，-1pH7時，其磷酸基團(tuán)帶一個負(fù)電荷，整個分子的帶電性質(zhì)因極性頭部而異3.試述血漿脂蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、分類及主要功能。脂質(zhì)和蛋白質(zhì)以非共價鍵（包括疏水作用、范德華力、靜電引力）結(jié)合而成的復(fù)合物.其蛋白質(zhì)部分叫載脂蛋白，脂蛋白廣泛存在于血漿中，因此又稱血漿脂蛋白，細(xì)胞膜中與脂質(zhì)融合存在的脂蛋白叫細(xì)胞脂蛋白。功能:轉(zhuǎn)運(yùn)磷脂、三酰甘油、膽固醇和膽固醇酯4.人和動物體內(nèi)的膽固醇可以轉(zhuǎn)變?yōu)槟男┚哂兄匾硪饬x的類固醇類物質(zhì)？由動物膽固醇衍生來的類固醇激素有5類：（雄激素、雌激素、孕酮、糖皮質(zhì)激素、鹽皮質(zhì)激素）5.教材課后練習(xí)題：1，3，8，9，10，12第20、21課1.主要的嘌呤、嘧啶、核苷、核苷酸的結(jié)構(gòu)。核苷=戊糖（脫氧核糖，核糖）+堿基；在大多數(shù)情況下，核苷是由呋喃型脫氧核糖或核糖的C1以-糖苷鍵與嘧啶的N1或嘌呤的N9以N-糖苷鍵連接形成核苷核苷酸(nucleotide)是由核苷與磷酸經(jīng)脫水縮合后生成的磷酸酯類化合物，包括核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸兩大類。2.B-DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)具有哪些特點(diǎn)？1.兩條反平行鏈以右手螺旋方向繞同一中心軸纏繞形成右手反平行雙螺旋；2.磷酸與脫氧核糖以3’,5’磷酸二酯鍵相連形成DNA外側(cè)骨架；堿基在內(nèi)側(cè)，兩條鏈間存在堿基互補(bǔ)：A與T或G與C配對形成氫鍵，稱為堿基互補(bǔ)原則（A與T為兩個氫鍵，G與C為三個氫鍵）；3.螺旋有大溝(majorgroove)和小溝(minorgroove)；4.螺旋的穩(wěn)定因素為氫鍵和堿基堆積力以及和環(huán)境中正離子的作用；5.雙螺旋平均直徑=2nm，螺距=3.4nm，每圈螺旋包含10bp；6.雙螺旋分子中糖分子與縱軸平行，與堿基平面垂直。3.A-DNA與Z-DNA的主要特點(diǎn)相對濕度<75%—A型DNAA型：較寬、短的右手螺旋，堿基傾角19存在：RNA分子雙螺旋區(qū)、RNA-DNA雜交鏈Z-DNA：為左手雙螺旋，螺距=4.56nm，每圈12nt。螺旋細(xì)長，只有小溝。磷酸及核糖骨架呈現(xiàn)Z字形走向。必須含G，且嘌呤堿與嘧啶堿基交替出現(xiàn)，鹽或有機(jī)溶劑、DNA甲基化，導(dǎo)致B-DNA→Z-DNA存在：天然DNA局部區(qū)；人工合成寡核苷酸鏈AZB4.鉸鏈DNA（hinged-DNA）(H-DNA)的概念是一種分子內(nèi)折疊形成的三股螺旋DNA。當(dāng)DNA的一段多聚嘧啶或嘌呤核苷酸的組成為鏡像重復(fù)時，即可在分子內(nèi)回折產(chǎn)生H-DNA。由于在形成分子內(nèi)三股螺旋時胞嘧啶需發(fā)生質(zhì)子化過程，故稱為H-DNA。5.tRNA的一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)各有何明顯特征？其中二級結(jié)構(gòu)包括哪幾部分？各部分的功能是什么？一級結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：tRNA是單鏈核酸，但其分子中的某些局部也可形成雙螺旋結(jié)構(gòu)分子較小，73-93nt(4S)；含有較多稀有堿基，可多達(dá)20%；序列保守性較強(qiáng)；5’末端多為pG,也有pC的；3’末端都為…CCA-OH二級結(jié)構(gòu)：由于局部雙螺旋的形成而呈現(xiàn)“三葉草”形，故稱為“三葉草”結(jié)構(gòu)。五部分：氨基酸臂(aminoacidarm)：7bp；富含G；末端為CCA，接受活化的氨基酸。攜帶氨基酸二氫尿嘧啶環(huán)(dihydrouridineloop；DHUloop；D-loop)：8~12nt；3~4bp的二氫尿嘧啶臂。辨認(rèn)并結(jié)合氨基酰tRNA合成酶反密碼環(huán)（anticodonloop):7nt；中部為反密碼子。識別mRNA上的密碼額外環(huán)(extraloop)：也稱可變環(huán)，3~18nt，是tRNA分類的重要指標(biāo)。假尿嘧啶核苷-胸腺嘧啶核糖核苷環(huán)(TΨCloop)：7nt。識別并結(jié)合核糖體三級結(jié)構(gòu)：

呈倒L形。短臂：氨基酸臂+TC環(huán)長臂：額外環(huán)+D環(huán)+反密碼環(huán)大?。?5X75X25A°通過額外的堿基對形成一些二級結(jié)構(gòu)中沒有的新的氫鍵tRNA不與蛋白質(zhì)裝配，無四級結(jié)構(gòu)6.真核生物mRNA有哪些主要特點(diǎn)？單順反子,有時有極少數(shù)甲基化的堿基7.真核生物和原核生物的rRNA的分類和區(qū)別。第22課1.核酸分子中不同糖苷鍵和磷酸酯鍵對酸的穩(wěn)定性比較嘌呤堿與脫氧核糖之間的糖苷鍵對酸最不穩(wěn)定嘌呤堿的糖苷鍵﹥嘧啶堿的糖苷鍵﹥磷酸酯鍵2.蛇毒磷酸二酯酶和牛脾磷酸二酯酶在對核酸水解時的作用特點(diǎn)3.核酸的等電點(diǎn)核酸的等電點(diǎn)：由于磷酸是中等強(qiáng)度的酸，堿基呈現(xiàn)弱堿性，所以核酸的等電點(diǎn)比較低RNA：約為2.0~2.5DNA：約為4.0~4.54.核酸的滴定曲線特點(diǎn)：正向滴定不同于反向滴定，滴定過程不可逆天然DNA雙鏈中通過氫鍵配對的堿基不參與酸堿滴定；變性DNA雙鏈解開，堿基參與酸堿滴定5.核酸的紫外吸收特點(diǎn)及應(yīng)用λmax≈260nm嘌呤堿、嘧啶堿的紫外吸收判斷樣品純度定量測定核酸純品測定核酸的ε(p)可判斷DNA制劑是否發(fā)生變性或降解。核苷酸﹥單鏈﹥雙螺旋；RNA﹥DNA6.何謂DNA的熔點(diǎn)或熔解溫度(Tm)？影響DNATm值的因素有哪些？DNA的熔點(diǎn)或熔解溫度(Tm)：指加熱變性使DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時的溫度，或DNA熱變性過程中A260達(dá)到最大值一半時的溫度。影響Tm大小值的因素：（1）DNA的均一性：均質(zhì)DNA熔解溫度范圍較異質(zhì)DNA窄（2）G-C含量：Marmur-Doty關(guān)系式：Tm=69.3+0.41(G+C)%或GC%=（Tm-69.3）×2.44（3）介質(zhì)中的離子強(qiáng)度：介質(zhì)離子強(qiáng)度較高時,Tm值較大7.名詞：限制性內(nèi)切酶；能識別特定的核苷酸順序，并從特定位點(diǎn)水解核酸的內(nèi)切酶.降解外源DNA。增色效應(yīng)(hyperchromiceffect):DNA變性，ε(p)升高的現(xiàn)象指DNA變性后變性后DNA在260nm處的光吸收（A260）比變性前增加的現(xiàn)象減色效應(yīng)(hypochromiceffect):DNA復(fù)性，ε(p)下降的現(xiàn)象復(fù)性后的DNA的A260降低，甚至恢復(fù)到變性前水平的現(xiàn)象核酸的變性：是指核酸雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂，變成單鏈結(jié)構(gòu)的過程。核酸的復(fù)性：變性DNA在適當(dāng)?shù)臈l件下，兩條彼此分開的單鏈又可以重新締合形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程稱為復(fù)性。DNA的熔點(diǎn)或熔解溫度(Tm)：指加熱變性使DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時的溫度，或DNA熱變性過程中A260達(dá)到最大值一半時的溫度。退火（annealing）：復(fù)性也稱退火（變性DNA在適當(dāng)?shù)臈l件下，兩條彼此分開的單鏈又可以重新締合形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程稱為復(fù)性）Cot1/2：復(fù)性完成一半時的C。t值，衡量復(fù)性反應(yīng)速度第23課1.常見的分子印跡術(shù)有哪幾種？請對southernBlotting進(jìn)行詳述。Southernblotting(Southern印跡法)DNA印跡術(shù):通過DNA-DNA雜交檢測特異性DNA，可用于DNA之間同源性分析，確定特異性DNA序列的大小和定位DNA限制性內(nèi)切酶→瓊脂糖凝膠電泳→酶切圖譜→堿處理（DNA變性）→轉(zhuǎn)移→硝酸纖維素膜→標(biāo)記探針雜交→顯色或放射自顯影Northernblotting：RNA印跡術(shù)，檢測特異RNAWesternblotting：蛋白質(zhì)印跡術(shù)或免疫印跡術(shù)South-Westernblotting：檢測DNA和蛋白質(zhì)相互作用；可測定特異性DNA結(jié)合蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量Easternblotting:檢測蛋白質(zhì)的翻譯后修飾Far-westernblotting:檢測蛋白質(zhì)之間的相互作用。2、核酸含量的常用測定法有哪些？（1）紫外分光光度法（2）定磷法：鉬藍(lán)比色法（測定范圍：10~100μg）用濃硫酸或過氯酸將有機(jī)磷消化為無機(jī)磷酸，后者與鉬酸作用生成磷鉬酸，還原后成鉬蘭（A660nm)（3）定糖法：RNA：地衣酚(苔黑酚，甲基苯二酚,orcinol)法：RNA中的核糖與HCl共熱轉(zhuǎn)變?yōu)榭啡?，后者與地衣酚作用呈綠色（A670nm)20~250μgRNADNA：二苯胺法：DNA在酸性條件下與二苯胺共熱，脫氧核糖與二苯胺形成藍(lán)色絡(luò)合物（A595nm)40~400μgDNA3、常用的核酸分離和純化方法（注意EB的特點(diǎn)及不同核酸分子采用密度梯度離心和電泳分離的排布順序）。（一）DNA的超離心分離純化溴乙錠（EB)-氯化銫CsCl）密度梯度平衡超離心沉降由慢到快：蛋白質(zhì)，開環(huán)及線型DNA，閉環(huán)質(zhì)粒DNA，超螺旋DNADNA與EB結(jié)合后，密度減??；cccDNA的超螺旋結(jié)構(gòu)使EB不易插入，密度減小不明顯（2）瓊脂糖凝膠電泳：DNA分析常用手段，一般用1%濃度(含EB)分離DNA遷移速度：超螺旋DNA>線型DNA>開環(huán)DNA檢測：EB染色，紫外光照射→紅、橙色熒光瓊脂糖電泳可以用于DNA分子量的測定以及DNA的制備與純化等（3）聚丙烯酰胺凝膠電泳：分離小片段核酸Mr.小于1000bp的DNA和RNA4、DNA雙脫氧測序法的主要原理。能夠根據(jù)電泳圖譜推斷出待測待測序列。雙脫氧鏈末端終止法通過使用鏈終止劑—類似于正常dNTP的2’,3’-雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)，將延伸的DNA鏈特異性地終止。其反應(yīng)體系也包括單鏈模板、引物、4種dNTP和DNA聚合酶。共分四組，每組按一定比例加入一種(ddNTP)，它能隨機(jī)滲入合成的DNA鏈，一旦滲入合成即終止，于是各種不同大小片段的末端核苷酸必定為該種核苷酸，可以從放射自顯影帶上直接閱讀DNA的核苷酸序列。5、名詞：分子雜交；熱變性的DNA單鏈，在復(fù)性時并不一定與同源DNA互補(bǔ)鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，它也可以與在某些區(qū)域有互補(bǔ)序列的異源DNA單鏈或RNA單鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu).這一現(xiàn)象稱為核酸的分子雜交(hybridization)。PCR；為聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction）的簡稱，用于在體外快速擴(kuò)增DNA，可使模板DNA含量以指數(shù)方式增加。是應(yīng)用最廣的分子生物學(xué)技術(shù)之一。探針：帶有一定標(biāo)記的已知順序的核酸片段稱為探針（probe），可以是DNA，也可以是RNA。第24課1.維生素的概念及生物學(xué)作用。概念：生物生長發(fā)育及代謝所必需的一類微量有機(jī)小分子化合物。由于體內(nèi)不能合成或合成不足，所以必須由膳食供給。生物學(xué)作用：不是結(jié)構(gòu)成分；不是供能物質(zhì)；大部分作為酶的輔酶或輔基成分參