野生軟棗獼猴桃多糖抑菌作用研究

野生軟棗獼猴桃多糖抑菌作用研究

野生軟棗和桃的產(chǎn)于吉林省長白山區(qū)，每年8月至9月成熟。它是長白山地區(qū)著名的經(jīng)濟(jì)野果之一。他是珍貴的野生果實(shí)之王，被稱為“世界上的珍寶”。據(jù)研究分析,野生軟棗獼猴桃可以抑制易引起食品腐敗的微生物生長,起到防腐保鮮的作用,同時(shí)它的多種保健作用,更能滿足人們的健康要求,避免化學(xué)防腐劑給人們身體健康造成的危害。已有研究顯示多糖具有抑菌作用,野生軟棗獼猴桃果實(shí)中有豐富的多糖,目前國內(nèi)對(duì)野生軟棗獼猴桃果實(shí)的抑菌活性研究的報(bào)道近乎空白,有很廣闊的開發(fā)潛力。本文旨在初探野生軟棗獼猴桃多糖的抑菌活性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,其多糖對(duì)幾種常見致病菌確實(shí)有明顯的抑制作用,為進(jìn)一步開發(fā)和利用野生軟棗獼猴桃資源提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1供試菌株、儀器和測試材料野生軟棗獼猴桃:遼寧省本溪市;野生軟棗獼猴桃多糖:實(shí)驗(yàn)室自制。細(xì)菌:枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus);真菌:根霉(Rhizopus)、黑曲霉(Aspergillusniger)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、青霉(Penicilliumsp.)、熱帶假絲酵母(G.tropicalis)、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae);由沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。供試培養(yǎng)基:細(xì)菌3種菌株采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基(BPA),真菌6種菌株采用馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)。濾紙圓片為直徑6mm、厚度1.5mm的定性濾紙。RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海亞榮生化儀器廠;5805高速冷凍離心機(jī):INVESTMENT公司;DZF-6050真空干燥箱:上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司;TU-1810紫外-可見分光光度計(jì):深圳市凱銘杰儀器有限公司;HZP-150型全溫振蕩培養(yǎng)箱:上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;BOXUN超凈臺(tái):上海優(yōu)浦科學(xué)儀器有限公司;HVE-50高壓滅菌鍋:HIRAYAMA公司;PB-10型pH計(jì):Sartorius公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1野生軟棗和桃的糖樣品1.2.1.乙醇的蒸發(fā)、蒸發(fā)取冷藏的野生軟棗獼猴桃,融化后打成勻漿后,采用料水比1:6(m/v)加水,在80℃恒溫水浴鍋中攪拌浸提5h。取出后紗布過濾、離心。將上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),濃縮至原體積的1/6,加入乙醇,使乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到75%,靜置6h。離心后將沉淀依次用丙酮、乙醚和乙醇洗滌脫脂,真空干燥得粗多糖。1.2.1.生軟棗獼猴桃果實(shí)的制備將制得的粗多糖采用料水比1:3(以上述野生軟棗獼猴桃果實(shí)計(jì)算)溶于水中,在pH8.0的條件下,加雙氧水使體積分?jǐn)?shù)達(dá)到50%,放入60℃的恒溫水浴鍋中加熱5h。1.2.1.氯乙酸-正丁醇組的制備將脫色后的多糖溶液與1:8(m/v)的三氯乙酸-正丁醇等體積混合,振蕩20min后靜置1h,棄去上層有機(jī)層和中層蛋白層,保留下層多糖溶液。此步重復(fù)操作3次。1.2.1.4分析1.2.1.5.濃縮和干燥將多糖溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),濃縮到最小體積后,真空干燥,得到的則為野生軟棗獼猴桃多糖樣品。1.2.2野生軟棗和桃子的糖菌實(shí)驗(yàn)1.2.2.添加c細(xì)菌培養(yǎng)基:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、瓊脂15~20g,蒸餾水1000mL,pH7.2~7.4;霉菌及酵母菌培養(yǎng)基:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂15~20g,水1000mL。1.2.2.2.試驗(yàn)菌的激活和懸懸液的制備1.2.2.3.野生軟棗和桃的溶解和稀釋取制備好的野生軟棗獼猴桃多糖,溶解稀釋,得到5個(gè)濃度:100、50、25、10、5mg/mL。1.2.2.最小抑制濃度測定采用瓊脂擴(kuò)散濾紙片法測定抑菌圈直徑,采用菌落直接觀察法測定最小抑制濃度。方法見參考文獻(xiàn)稍有改動(dòng),此文用的濾紙片直徑為6mm,每個(gè)平皿貼7片。結(jié)果見表1和表2。1.2.2.不同ph值對(duì)軟棗獼猴桃多糖抑菌活性的影響(1)不同溫度對(duì)野生軟棗獼猴桃多糖抑菌效果的影響。分別移取10mL質(zhì)量濃度為100mg/mL的野生軟棗獼猴桃多糖供試液于4個(gè)小燒杯中,放入直徑為6mm的濾紙片(121℃條件下20min干熱滅菌),在25、50、75、100℃水浴中加熱浸泡1h。以枯草芽孢桿菌為代表菌,用瓊脂擴(kuò)散濾紙片法測定不同溫度下的抑菌圈直徑,重復(fù)該操作3次,結(jié)果見表3。(2)不同pH值對(duì)野生軟棗獼猴桃多糖抑菌活性的影響。取7個(gè)小燒杯,分別移取10mL質(zhì)量濃度為100mg/mL的野生軟棗獼猴桃多糖供試液,用0.1mol/L的HCl和0.1mol/L的NaOH配制成pH值為3、4、5、6、7、8、9的不同溶液。放入上述處理過的濾紙片,浸泡30min。以枯草芽孢桿菌及米曲霉為代表菌,比較不同pH值對(duì)野生軟棗獼猴桃多糖抑菌活性的影響,重復(fù)操作3次,結(jié)果見表4。2野生軟棗獼猴桃多糖對(duì)酵母的最小抑制作用由表1、表2可知,野生軟棗獼猴桃多糖對(duì)枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、根霉、黑曲霉、米曲霉、青霉、啤酒酵母均有一定的抑制效果,且作用相當(dāng);隨著多糖質(zhì)量濃度的增大,抑制作用增強(qiáng);最小抑制濃度(MIC)在10~25mg/mL之間。野生軟棗獼猴桃多糖對(duì)細(xì)菌和霉菌有較好的抑制效果,對(duì)啤酒酵母也有較好的抑制效果,而對(duì)熱帶假絲酵母沒有抑制作用,這說明野生軟棗獼猴桃多糖對(duì)酵母的抑制有選擇性。由表3可知,以生理鹽水為空白對(duì)照液,溫度越高,抑菌圈直徑越大,即野生軟棗獼猴桃多糖的抑菌效果越明顯,因?yàn)闇囟壬?野生軟棗獼猴桃多糖溶液有濃縮的趨勢。由表4可知,以生理鹽水為空白對(duì)照液,pH值對(duì)野生軟棗獼猴桃多糖的抑菌效果有明顯的影響,偏酸性的pH值更有利于抑菌,在pH4~5范圍內(nèi),抑菌效果較好。3野生軟棗獼猴桃多糖的抑菌效果野生軟棗獼猴桃多糖具有較強(qiáng)的抑菌作用。對(duì)常見細(xì)菌和霉菌都有較好的抑菌效果,對(duì)酵母的抑制作用具有選擇性,對(duì)供試的熱帶假絲酵母沒有抑制效果。對(duì)同一個(gè)菌種而言,抑制效果隨多糖濃度的增大而顯著提高。野生軟棗獼猴桃多糖對(duì)枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、根霉、黑曲霉、米曲霉、青霉、啤酒酵母最小抑制濃度在10~25mg/mL之間。溫度和pH值對(duì)野生軟棗獼猴桃多糖的抑菌效果也有一定影響。實(shí)驗(yàn)表明,溫度越高,野生軟棗獼猴桃多糖的抑菌效果越明顯,