大腸菌群的測(cè)定GB4789.3-2016

食品中大腸菌群的檢驗(yàn)與分析GB4789．3-2016第二法大腸菌群計(jì)數(shù)法大腸菌群在結(jié)晶紫中性紅瓊脂(VRBA)上典型特征

典型菌落為紫紅色,菌落周?chē)屑t色的膽鹽沉淀環(huán)。菌落直徑為0.5mm或更大。試驗(yàn)流程1、樣品的稀釋?zhuān)?）液體樣品以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品，置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分棍勻，制成1:10

的樣品勻液。（2）樣品勻液的pH值應(yīng)在6.5-7.5

之間，必要時(shí)分別用1mol/L氫氧化鈉（NaOH）或1mol/L鹽酸（HCI）調(diào)節(jié)。（3）用1mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:10

樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1mL無(wú)菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成1:100

的樣品勻液。

（4）、根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，按上述操作，依次制成10倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無(wú)菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過(guò)程不得超過(guò)15min

。2、平板計(jì)數(shù)（1）選取2個(gè)～3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)無(wú)菌平皿，每皿1mL。同時(shí)分別取1mL生理鹽水加入兩個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。（2）及時(shí)將15mL-20mL冷至46℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）約傾注于每個(gè)平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3mL-4mLVRBA

覆蓋平板表層。翻轉(zhuǎn)平板，置于36℃±l℃培養(yǎng)18h-24h。

（3）平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在15-150

之間的平板，分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周?chē)屑t色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大。

結(jié)晶紫中性膽鹽瓊脂

（4）、證實(shí)試驗(yàn)

從VRBA平板上挑取10個(gè)不同類(lèi)型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB

肉湯管內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)24h-48h

，觀察產(chǎn)氣情況。凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。

2、平板計(jì)數(shù)

（5）大腸菌群平板計(jì)數(shù)的報(bào)告

經(jīng)最后證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的試管比例乘以（3）中計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每克（或毫升）樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-4樣品稀釋液1mL，在VRBA平板上有100個(gè)典型和可疑菌落，挑取其中10個(gè)接種BGLB肉湯管，證實(shí)有6個(gè)陽(yáng)性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：100×6/10×104/g（mL）=6.0×10