準(zhǔn)確度一含量測(cè)定方法-

第二節(jié)樣品分析的前處理方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法(一)

水解法;

(二)

還原法二、經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法(一)

干法破壞;

(二)

濕法破壞一、不經(jīng)有機(jī)破壞的方法1.酸水解法水難溶性含金屬有機(jī)藥物與礦酸(鹽酸)共熱:十一烯酸鋅測(cè)定回流有機(jī)結(jié)合的待測(cè)元素原子離解,轉(zhuǎn)化為無機(jī)鹽(離子)2.堿水解法含鹵素有機(jī)藥物(脂肪碳鏈)與氫氧化鈉溶液回流:三氯叔丁醇測(cè)定適用于:結(jié)合不牢固的含金屬或含鹵素有機(jī)藥物(一)水解法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的方法碘他拉酸測(cè)定:氫氧化鈉試液與鋅粉回流后,用硝酸銀滴

定回流堿性溶液中加

鋅粉回流,使碳-碘鍵還原轉(zhuǎn)化

為無機(jī)碘化物碘番酸膽影酸膽影葡胺注射液泛影酸泛影酸鈉泛影葡胺注射液適用于:結(jié)合牢固的含碘有機(jī)藥物

(直接與芳環(huán)連接)(二)還原法二、經(jīng)有機(jī)破壞的方法(一)濕法破壞適用于含氮有機(jī)藥物分析的前處理硫酸作為分解劑,氧化劑(硝酸,高氯酸)輔助分解劑凱氏定氮法(二)干法破壞高溫?zé)胱品ㄓ糜诤u素藥物的鑒別

無水碳酸鈉,硝酸鎂,氫氧化鈣,氧化鋅等輔助灰化氧瓶燃燒法適用于:含金屬,鹵素,氮,硫,磷等有機(jī)藥物(待測(cè)原子與碳原子結(jié)合牢固者)61.凱氏定氮法儀器裝置消解劑與助劑:硫酸-硫酸鉀-硫酸銅操作法供試品:

常量法含氮25~30mg;

半微量法:

1.0~2.0mg消解:

溶液成澄明的綠色,

繼續(xù)加熱30min蒸餾與接收:

40%氫氧化鈉堿化,

水蒸氣蒸餾,

2%硼酸溶液吸收滴定:

甲基紅-溴甲酚綠指示液,

硫酸滴定液(0.05mol/L),

灰紫色應(yīng)用范圍:含有氨基或酰氨(胺)結(jié)構(gòu)1.凱氏定氮法取本品約0.2g,精密稱定,照氮測(cè)定法測(cè)定;每1ml硫酸滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于10.91mg的撲米酮(C12H14N2O2)關(guān)鍵步驟:消解試劑作用:硫酸-消解劑;硫酸鉀-提高沸點(diǎn);硫酸銅- 化劑;

硼酸-固氮(NH3·H3BO3)(5)示例與討論撲米酮的含量測(cè)定C12H14N2O2

=

218.262.氧瓶燃燒法含待測(cè)元素的有機(jī)藥物在充滿氧氣的燃燒瓶中充分燃燒有機(jī)結(jié)構(gòu):徹底分解為CO2和H2O待測(cè)元素:轉(zhuǎn)化為不同價(jià)態(tài)的氧化物(或無氧酸)被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?多以酸根離子形式存在)(1)儀器裝置鉑絲:1mm;2/3瓶:硬質(zhì)玻璃(石英玻璃)10-20mg——500ml200mg——1000-2000ml2.氧瓶燃燒法(2)燃燒產(chǎn)物與吸收液氟——HF:氯——HCl:溴——Br2+HBr:碘——I2(+HIO):硫——SO3(+SO2):水水-氫氧化鈉過氧化氫-氫氧化鈉氫氧化鈉-硫酸肼飽和溶液水-過氧化氫磷——P2O5→H4P2O7,(HPO3)n:水-硝酸(煮沸)2.氧瓶燃燒法Content

Layouts需驗(yàn)證的項(xiàng)目驗(yàn)證的內(nèi)容鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)檢查含量測(cè)定防腐劑溶出度,釋放度藥物含量測(cè)定方法驗(yàn)證檢測(cè)限定量限線性

范圍

耐用性準(zhǔn)確度精密度重復(fù)性中間精密度重現(xiàn)性專屬性一、準(zhǔn)確度(一)含量測(cè)定方法(二)雜質(zhì)定量測(cè)定加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)試(三)數(shù)據(jù)要求

9個(gè)測(cè)定結(jié)果3個(gè)不同濃度

(80,100,120％)每個(gè)濃度各3份v

準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度v

一般用回收率(%)表示定義二、精密度重復(fù)性同一分析人員連續(xù)測(cè)定所得結(jié)果的精密度;也稱批內(nèi)精密度或日內(nèi)精密度中間精密度不同時(shí)間不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度批/日間精密度重現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室不同人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法進(jìn)行v同一均勻供試品多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度v標(biāo)準(zhǔn)偏差(s,SD);相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)v數(shù)據(jù)要求同“準(zhǔn)確度”定義三、專屬性(一)鑒別反應(yīng)空白,結(jié)構(gòu)相似物或有關(guān)物質(zhì)呈負(fù)反應(yīng)(三)含量與雜質(zhì)測(cè)定含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣中各峰能獲得分離v

在其他成分(雜質(zhì),降解產(chǎn)物,輔料等)可能存在下,方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性v

鑒別,雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法定義與應(yīng)用四、檢測(cè)限分析方法,非儀器分析法鑒別的顯色法;雜質(zhì)檢查的TLC適用于能直觀顯示信號(hào)與基線噪聲水平的分析方法,如HPLC法信噪比S/N=3(2)時(shí)的相應(yīng)濃度或量適用于不能直觀比較信噪比的儀器 分析方法,如UV-Vis法□檢測(cè)限(limit

of

detection,LOD)是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量LOD是一種限度檢驗(yàn)效能指標(biāo),反映方法靈敏度適用于可用目視法直接評(píng)價(jià)結(jié)果的1.目視法2.信噪比法3.標(biāo)準(zhǔn)偏差法五、定量限定量限(limit

of

quantitation,LOQ

)是指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量;反映方法的靈敏度測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量方法研究時(shí),應(yīng)確定LOQLOQ的測(cè)定方法與LOD相同相應(yīng)的系數(shù)(倍數(shù))不同,如信噪比S/N=10六、線性與范圍

線性系指在設(shè)計(jì)的“范圍”內(nèi),響應(yīng)值(y)與被測(cè)物濃度(x)直接呈正比關(guān)系的程度

y

=ax+

b

系列(n≥5)供試樣品測(cè)定,以響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖

用最小二乘法進(jìn)行線性回歸;或經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換后再進(jìn)行線性回歸范圍系指方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間在試驗(yàn)研究開始前確定驗(yàn)證的范圍和方法在范圍內(nèi)應(yīng)能達(dá)到一定精密度,準(zhǔn)確度和線性18六、線性與范圍特殊元素含量測(cè)定:雜質(zhì)測(cè)定:下限-20%~上限+20%限度±20%如果雜質(zhì)檢查與含量測(cè)定同時(shí)進(jìn)行,雜質(zhì)限度-20％~含量上限+20%涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目均需對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn)證如:含量測(cè)定,含量均勻度,溶出度或釋放度,特殊元素或特殊雜質(zhì)的定量檢查原料藥/制劑含量測(cè)定:80%~120%制劑含量均勻度檢查:70%~130%溶出度或釋放度檢查:下限-20%~上限+20%七、耐用性

耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí),測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度;體現(xiàn)測(cè)定條件的允許變動(dòng)范圍

HPLC法典型因素有:流動(dòng)相的組成和pH值及流速,不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱,柱溫等

GC法典型因素有:不同廠牌或批號(hào)的色譜柱,固定相,不同類型的擔(dān)體,柱溫,進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等八、驗(yàn)證內(nèi)容的選擇驗(yàn)證內(nèi)容選擇的一般原則:非定量分析方法如鑒別,雜質(zhì)的限度檢查法:驗(yàn)證“專屬性”,“檢測(cè)限”和“耐用性”定量分析方法如原料藥或制劑的含量測(cè)定及含量均勻度,溶出度或釋放度的測(cè)定方法:除“檢測(cè)限”和“定量限”外,其余均驗(yàn)證微量定量分析方法如雜質(zhì)的定