體外受精-胚胎移植中精精濃度對(duì)胚胎質(zhì)量的影響

體外受精-胚胎移植中精精濃度對(duì)胚胎質(zhì)量的影響

體外受精可滲透（ivf-et）在中國(guó)開(kāi)展了20多年，但許多中心的精子濃度不同，最佳提取濃度也不同。此外，需要多中心預(yù)測(cè)和隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)。本文希望通過(guò)我中心147個(gè)IVF-ET周期比較同周期卵子不同授精精子濃度下的受精率、多精受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率等指標(biāo),探索合適的授精精子濃度,改善胚胎質(zhì)量,提高臨床妊娠率。1數(shù)據(jù)和方法1.1mii卵數(shù)及成熟卵率2011年5-12月在我中心行常規(guī)IVF的患者共147周期,獲卵1807個(gè),平均取卵數(shù)(12.3±8.2)個(gè),MII卵數(shù)1536個(gè),成熟卵率85%。平均年齡(30±2.3)歲,不孕年限(4.3±3.1)年,其中原發(fā)不孕41周期,繼發(fā)不孕106周期,男方精液密度>15×106/mL,前向運(yùn)動(dòng)精子a+b>30%,正常精子形態(tài)>10%。1.2方法1.2.1陰道取卵試驗(yàn)女方采用長(zhǎng)方案超促排卵,注射HCG5000～10000IU后36h在B超引導(dǎo)下經(jīng)陰道取卵。注射HCG后39～40h微滴法授精。1.2.2抗原卵母細(xì)胞制備培養(yǎng)采用vitrolife培養(yǎng)液,微滴法授精,每培養(yǎng)皿(Falcon35mm)內(nèi)6～7個(gè)40μL微滴,每微滴內(nèi)放置一枚卵母細(xì)胞,授精時(shí)加入精子懸浮液10μL,微滴終體積50μL,HCG后39～40h加精,精液處理采用梯度離心法。1.2.3mii卵的授精濃度根據(jù)加精子數(shù)隨機(jī)將同周期卵母細(xì)胞分3組,A組:精子濃度5000個(gè)前向運(yùn)動(dòng)精子/液滴,共503個(gè)MII卵;B組:7500個(gè)前向運(yùn)動(dòng)精子/液滴,共521個(gè)MII卵;C組:采用我中心常規(guī)授精濃度10000個(gè)前向運(yùn)動(dòng)精子/液滴,共512個(gè)MII卵。6%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),授精4h后剝除顆粒細(xì)胞,授精后18～20h觀察各組受精情況,d2觀察胚胎分裂情況,培養(yǎng)至d3觀察胚胎情況并將胚胎分為4級(jí)。1.2.4卵裂球大小不均勻的組織根據(jù)卵裂球大小、是否均勻、碎片多少及發(fā)育速度將胚胎分為4級(jí),1級(jí):卵裂球≥6細(xì)胞,大小均勻,形狀規(guī)則,無(wú)碎片或碎片<5%;2級(jí):卵裂球≥6細(xì)胞,大小略不均勻,形狀略不規(guī)則,碎片<20%;3級(jí):卵裂球<6細(xì)胞或卵裂球≥6細(xì)胞,卵裂球大小明顯不均勻,形狀明顯不規(guī)則,碎片21%～50%;4級(jí):卵裂球大小嚴(yán)重不均勻,形狀嚴(yán)重不規(guī)則,碎片>50%。1級(jí)和2級(jí)胚胎為優(yōu)質(zhì)胚胎。1.3統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1受精率與時(shí)間相關(guān)性A、B和C組受精率分別為72.37%、78.58%、79.49%,A組受精率與B組、C組比較差異有顯著性(P<0.05),A組3個(gè)周期12個(gè)MII卵受精3個(gè),受精率<30%。2.2不同的優(yōu)胚率,比的歷史顯示,b組的優(yōu)胚率有哪些?3組多精受精率、卵裂率、優(yōu)胚率比較差異無(wú)顯著性(P>0.05),B組的優(yōu)胚率有增高的趨勢(shì),但統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無(wú)顯著性(P>0.05)。3組正常受精率、多精受精率、卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率結(jié)果,見(jiàn)表1。3精子濃度對(duì)提升品精率的作用胚胎培養(yǎng)是常規(guī)體外受精(IVF)中的重要環(huán)節(jié),移植高質(zhì)量的胚胎是提高臨床妊娠率的關(guān)鍵因素,如何獲得高質(zhì)量的胚胎是臨床醫(yī)師和胚胎學(xué)家關(guān)注的焦點(diǎn),也是實(shí)驗(yàn)室人員研究的重點(diǎn),在體外受精的過(guò)程中精子數(shù)量的多少直接影響今后胚胎的發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn),卵母細(xì)胞與高密度的精子長(zhǎng)時(shí)間作用,精子代謝產(chǎn)生的多種有害物質(zhì)如活性氧成分(ROS)、氧自由基等會(huì)引起細(xì)胞膜流動(dòng)性降低,促使DNA碎片形成和胚胎發(fā)育停止。隨著國(guó)內(nèi)大多中心短時(shí)受精的應(yīng)用,在一定程度上改善了胚胎質(zhì)量,但常規(guī)IVF正常受精所需的精子參數(shù)范圍尚不十分清楚,在自然生理狀況下,最終到達(dá)受精部位的精子數(shù)與卵子數(shù)比例不超過(guò)10∶1。過(guò)去認(rèn)為常規(guī)IVF每個(gè)卵子約需5萬(wàn)～10萬(wàn)條精子,是體內(nèi)所需精子數(shù)量的幾百倍,具體的機(jī)制尚不十分清楚,目前大多中心的授精濃度在(1～10)×104/每卵母細(xì)胞,是否能在更少的精子濃度下獲得更多的優(yōu)質(zhì)胚胎,降低多精受精率是本文研究的重點(diǎn)。筆者采用同周期卵母細(xì)胞在A、B、C3組不同受精精子濃度下,授精后4h剝脫顆粒細(xì)胞的方法進(jìn)行研究,結(jié)果顯示,A組的受精率與B組、C組比較顯著降低(P<0.05),優(yōu)質(zhì)胚胎率及多精受精率與C組比較差異無(wú)顯著性,因此,將授精精子數(shù)量降至5000個(gè)前向運(yùn)動(dòng)精子/每卵母細(xì)胞時(shí),受精率降低,同時(shí)有3個(gè)周期受精率<30%,增大受精失敗的風(fēng)險(xiǎn),這可能與精子在體外環(huán)境下不能同時(shí)獲能或體外培養(yǎng)的卵子顆粒細(xì)胞團(tuán)塊較大,精子不易穿透有關(guān)。B組與C組比較受精率、多精受精率、卵裂率、優(yōu)胚率差異均無(wú)顯著性(P>0.05),但優(yōu)胚率有增加的趨勢(shì),由此認(rèn)為,將精子濃度調(diào)整為7500個(gè)前向運(yùn)動(dòng)精子/每卵母細(xì)胞是較為理想的授精濃度。多精受精常見(jiàn)于IVF過(guò)程,授精精子數(shù)量的增多可導(dǎo)致卵細(xì)胞皮質(zhì)顆粒釋放延遲,導(dǎo)致較高頻率的多精子受精。但本研究在不同授精濃度下受精結(jié)果顯示,3組多精受精的比率無(wú)顯著性差異,一方面本研究的精子濃度在一個(gè)相對(duì)較低的范圍,另一方面本研究是應(yīng)用同周期卵母細(xì)胞,卵子的成熟度相同,故多精受精率差異無(wú)顯著性。Yie等研究認(rèn)為,多精受精主要發(fā)生于成熟卵細(xì)胞,卵細(xì)胞透明帶下皮質(zhì)顆粒的釋放是抗多精子受精的機(jī)制之一。筆者推測(cè)由于促排卵過(guò)程中卵母細(xì)胞成熟的不同步性,有的卵細(xì)胞過(guò)熟出現(xiàn)皮質(zhì)顆粒缺乏等缺陷導(dǎo)致多精受精的發(fā)生,而其他卵細(xì)胞處于較理想的成熟狀態(tài)。因此,在一定的授精精子濃度范圍,合適的促排卵方案對(duì)獲得高質(zhì)量的卵子,降低多精受精率更為關(guān)鍵。綜上所述,IVF受精精子濃度在7500～10000個(gè)前向運(yùn)動(dòng)精子/每卵母細(xì)胞范圍其胚胎培養(yǎng)結(jié)果較為理想,精子濃度在7