蓮子體內(nèi)兩種黃酮甙的提取和鑒定

蓮子體內(nèi)兩種黃酮甙的提取和鑒定

荷花心是睡蓮科植物的一種古老的綠色幼葉和胚胎，苦而寒冷。它能凈化心臟的安寧，使心臟的腎臟和澀精轉(zhuǎn)為止血。主要用于興奮、喉嚨干渴、出血、紅眼和胸痛。在我國其主要產(chǎn)于浙江、江蘇、福建、湖南等地。蓮子心生物堿研究始于l9世紀末,此后國內(nèi)外學者進一步將蓮子所含生物堿分為非酚性生物堿和酚性生物堿,主要有蓮心堿(liensinine),異蓮心堿(isoliensinine),甲基蓮心堿(neferine),荷葉堿(nuciferine),牛角花堿(lorusine),甲基紫堇杷靈(methylcorypalline),蓮子堿(nelumbine)等。黃酮廣泛存在自然界的植物和漿果中,大約有4千多種。但其化學結(jié)構(gòu)不盡相同,如綠茶多酚、蕓香苷、橘皮苷、櫟素、花色苷酸等都屬黃酮。黃酮的功效是非常豐富的,它是一種很強的抗氧化劑,可有效清除體內(nèi)的氧自由基,可阻止細胞衰老和退化,也具有阻止癌癥發(fā)生的抗氧化作用。它還可以改善血液循環(huán),減少血液中的膽固醇,大大降低了動脈粥樣硬化的發(fā)病率,也可改善心腦血管疾病的癥狀。為了進一步開發(fā)利用黃酮資源,我們對蓮子心黃酮類化合物的提取分離工藝進行了研究,并利用波譜技術(shù)鑒定了兩個碳甙黃酮的結(jié)構(gòu)。1材料和方法1.1路徑二、實驗用樹脂儀器:紫外光檢測器,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,核磁共振儀等。材料:蓮子心,2009年9月購自福建省醫(yī)藥有限責任公司;D101大孔吸附樹脂;硅膠;SephadexLH-20(羥丙基葡聚糖凝膠);MCI(微孔樹脂);RP-18(十八烷基硅烷鍵合硅膠);硅膠粉,硅膠板H(中國青島海洋化工集團公司);工業(yè)級甲醇;其余有機試劑均為分析純。1.2黃酮類物質(zhì)的檢測1.2.1蓮子心中黃酮類物質(zhì)的提取、分離及純化:1.2.2黃酮類物質(zhì)的定性檢測:層析柱所分離出的化合物使用薄層色譜分析。采用硅膠薄層層析板,以氯仿-甲醇-水(體積比為8∶2∶0.2)為展開劑。展開后的硅膠板,在紫外光365nm下,黃酮類物質(zhì)呈現(xiàn)黃色熒光;用分子碘熏呈棕色;經(jīng)5%的稀硫酸溶液(乙醇∶水=1∶1)烘烤呈黃色。1.2.3黃酮類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定:核磁共振分析:將分離出的黃酮類單體物質(zhì)溶解于氘代二甲基亞砜(DMSO-d6)中,在核磁共振儀上測定氫譜(1HNMR),碳譜(13CNMR),異核遠程相關(guān)譜(HMBC),異核單量子相關(guān)譜(HSQC)。以四甲基硅烷為內(nèi)標物,并與參考文獻比對確定化合物結(jié)構(gòu)。2結(jié)果與討論2.1糖及糖教育化合物c-4化合物1呈淡黃色粉末狀,經(jīng)5%的稀硫酸溶液(乙醇∶水=1∶1)烘烤后呈黃色,易溶于甲醇。氫譜(1HNMR)δ:7.51(1H,d,J=8.4,J=2.0,H-6′),7.48(1H,d,J=2.0,H-2′),6.88(1H,d,J=8.4,H-5′),6.63(1H,s,H-3),6.33(1H,s,H-6),4.66(1H,d,J=7.6,H-1″)。碳譜(13CNMR)δ:182.0(C-4),164.1(C-2),162.8(C-7),160.3(C-5),156.0(C-9),149.7(C-4′),145.8(C-3′),121.9(C-1′),119.4(C-6′),115.8(C-5′),114.1(C-2′),104.5(C-8),104.0(C-10),102.4(C-3),98.2(C-6),82.0(C-5″),78.8(C-3″),73.4(C-1″),70.8(C-2″),70.7(C-4″),61.7(C-6″)。1HNMR圖譜顯示:共有6個氫,低場區(qū)有兩個在7.51,6.88且偶合值是8.4的氫信號和在7.48且偶合值是2的氫信號,判斷為苯環(huán)上的ABX自旋體系,且1,3,4位被取代;同時兩個在δ6.63和6.33的單峰;存在1個端基質(zhì)子信號(δ4.66,J=7.6),說明這個糖是β-D-葡萄糖甙;13CNMR圖譜表明:δ182.0處的信號為羰基,在δ145.8～164.1區(qū)間有6個連氧碳信號,δ102.4處有1個烯烴碳信號,在δ121.9～98.2區(qū)間有7個芳香碳信號,可推斷該化合物為黃酮類化合物,通過以上的分析并參考文獻可以得出該化合物為木犀草素糖甙。從13CNMR來看只有1個δ73.4處的信號表明含有C糖甙,δ61.7為糖上亞甲基。在δ82.0～70.7區(qū)間有5個連氧碳為葡萄糖上的碳信號,對照得出為β-D-葡萄糖。通過δ104.5(C-8)和98.2(C-6),推出化合物1為木犀草素-8-C-β-D-葡萄糖甙。2.2-d-葡萄糖化合物2呈淡黃色粉末狀,經(jīng)5%的稀硫酸溶液(乙醇∶水=1∶1)烘烤后呈黃色,易溶于甲醇。氫譜(1HNMR)δ:7.42(1H,d,J=8.4,J=2.0,H-6′),7.40(1H,d,J=8.4,H-2′),6.88(1H,d,J=2.0,H-5′),6.67(1H,s,H-3),6.47(1H,s,H-8),4.57(1H,d,J=8.6,H-1″)。碳譜(13CNMR)δ:181.9(C-4),163.7(C-2),163.3(C-7),160.7(C-5),156.2(C-9),149.7(C-3′),145.8(C-4′),121.5(C-1′),119.0(C-5′),116.1(C-2′),113.3(C-6′),108.9(C-6),103.4(C-10),102.8(C-3),93.5(C-8),81.6(C-5″),79.0(C-3″),73.1(C-1″),70.7(C-2″),70.2(C-4″),61.5(C-6″)。1HNMR圖譜顯示:共有6個氫,低場區(qū)有兩個在87.42,86.88且偶合值是8.4的氫信號和在86.88且偶合值是2的氫信號,判斷為苯環(huán)上的ABX自旋體系,且1,3,4位被取代;還有兩個在δ6.67和6.47的單峰;有1個端基質(zhì)子信號(δ4.57,J=8.6),說明這個糖是β-D-葡萄糖甙;13CNMR圖譜表明:δ1821.9處的信號為羰基,在δ145.8～163.3區(qū)間有6個連氧碳,δ102.8處有1個烯烴碳信號,在δ121.5～93.5區(qū)間有7個芳香碳信號,推斷該化合物為黃酮碳甙,通過以上的分析并參考文獻可以得出該化合物為木犀草素糖甙。從13CNMR來看只有1個δ71.3處的信號表明含有C糖甙,δ61.7為糖上甲基。在δ82.0～70.7區(qū)間有5個連氧碳為糖上的的碳,對照得出為β-D-葡萄糖。通過δ108.9(C-6)和93.5(C-8),推出化合物2為木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖甙。3黃酮糖苷化合物的合成本實驗從蓮子心中分離到的2種化合物經(jīng)NMR鑒定分別為木犀草-8-C-β-D-葡萄糖甙和木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖甙。在蓮子心提取的文獻中,已報道的蓮子心中的黃酮類化合物主要是O-取代黃酮,C-取代黃酮則較少,但此次實驗獲得了兩種葡萄糖碳甙:木犀草素-8-C-β-D-葡萄糖甙和木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖甙。C-取代黃酮與O-取代黃酮在生物活性上也有些不同,如C8-取代柚皮素衍生物對雌激素起到調(diào)節(jié)作用,能夠治療由于雌激素缺乏或過量引起的失調(diào)與疾病。而且異戊二烯基柚皮素衍生物具有細胞毒性,可以調(diào)節(jié)白血病細胞(HL-60)增殖功能,但清除自由基實驗顯示其具有較弱的抗氧化作用。同時由于C-取代黃酮分子結(jié)構(gòu)一般較穩(wěn)定,不會輕易遭受水解、氧化等外界